包含富集主要电荷同工型的抗体组合物的药物制造技术

本发明专利技术属于抗体疗法技术领域，涉及通过ADCC的靶细胞破坏机理。本发明专利技术涉及经纯化的抗体组合物，其用做药物，通过层析分级分离抗体组合物中天然存在的多种电荷同工型，并组合对应于层析图的主峰的一个或多个层析级分得到所述抗体组合物，所得的单克隆抗体组合物富含所述主峰，所述峰占所得组合物的层析图的至少85％。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】包含富集主要电荷同工型的抗体组合物的新药物 专利
本专利技术属于设及借助ADCC摧毁祀细胞的机制的抗体疗法
它设及作 为药物使用的纯化抗体组合物，所述的纯化抗体组合物通过W下获得：借助层析对抗体组 合物中天然存在的不同电荷同工型分离并且合并与层析图主峰相对应的一个或多个层析 级分，因而获得富含所述主峰的单克隆抗体组合物，后者占获得的组合物的层析图的至少 85%。 现有技术 在过去十年期间，已经在W下各种治疗领域借助抗体、经常借助单克隆抗体大力 开发被动免疫疗法治疗：癌症、化esus阴性怀孕女性中预防同种异体免疫、感染性疾病、炎 性疾病W及尤其自身免疫疾病。 尽管借助抗体的被动免疫疗法治疗如今已经显示其治疗益处，但是观察到的临床 反应水平仍然不足，并且因此需要有可能增加临床反应并施用更小剂量的更高效抗体组合 物，W便限制副作用。 如同任何生物产品，抗体组合物本质上是不均一的。实际上，治疗中所用的抗体组 合物在生物系统（细胞、转基因动物或植物）中产生，其中蛋白质通常并且因此尤其抗体经 受众多翻译后修饰（酶促修饰或降解），运将在一种抗体分子与另一种抗体分子见不同并 因而在产生的抗体组合物内部生成微小异质性。 抗体是由四条多肤链组成的糖蛋白可变数目二硫键和非共价相互作用结合的 两条总体上相同的重链（所谓"H"链即"重"链）和两个总体上相同的轻链（所谓"L"链 即"轻"链）。运些链形成Y型结构，重链构成Y型结构的茎部并构成Y型结构的每条臂的 一半，轻链构成Y型结构的每条臂的一半。每条轻链由一个恒定结构域（CJ和一个可变结 构域（\)组成；重链由一个可变片段（Vh)和3个或4个恒定片段（Chi至CH3或CH4)组成， 运取决于抗体同种型（IgG包含3个恒定片段Chi至CJ。轻链（\+Cj和重链Vh结构域和 Chi结构域的结合形成Fab片段，结合的结构域VL和VH负责识别抗原。两条重链的恒定结 构域（Ch2和CH3)或（Ch2至CH4)形成恒定化片段。 已知抗体经历W下翻译后修饰：重链或轻链末端修饰，Fc部分（和任选地F油）糖 基化、脱酷胺化、异构化、氧化、片段化和聚集（参见Vlasak等人，-2008)。 大多数翻译后修饰导致抗体的表面电荷特性改变，或通过修饰带电荷基团的数目 直接改变，或通过引入结构性修饰间接地改变，所述的结构性修饰本身调整带电荷残基的 局部分布或改变它们的地a。因此，全部运些修饰也均生成微小异质性，许多同工型具有同 一种抗体的不同电荷，具有不同的等电点（pl)，因此共存于抗体组合物内部（参见Vlasak 等人，- 2008)。 在翻译后修饰当中，抗体恒定部分Fc的糖基化如今因强烈影响抗体的许多生物 学特性而知名：体内半寿期（参见Wri曲t等人，-1994)，诱导ADCC反应（抗体依赖性细 胞毒性细胞反应）的能力（参见Satoh等人，- 2006，Presta等人，- 2006)、CDC反应（补 体依赖性细胞毒反应，参见Wri曲t等人，- 1994，Presta等人，- 2006)等。特别地，岩藻 糖化聚糖形式的抗体组合物的含量如今已知非常强烈地影响组合物在体内诱导ADCC反应 的能力。 相反，虽然许多文章旨在表征抗体组合物中存在的电荷同工型W判定商业批次单 克隆抗体的再现性和质量，但是直到现在仍认为导致同一种抗体的许多不同电荷同工型在 抗体组合物内部存在的其他翻译后修饰对抗体的体内生物学特性影响甚微或无影响。因 此，虽然现有技术中通常认为就电荷同工型方面追踪商业批次抗体的质量是必不可少的， 但是将运种追踪视为纯粹追踪产品质量并且从未存在建议为治疗目的，使用抗体组合物的 极度富含特定电荷同工型的纯化级分。实际上，在没有显示明显影响抗体组合物的至少某 些生物学特性的情况下，没有理由不使用整个组合物，没有理由使得制备方法复杂化和降 低产率。现在，如上文所示，除了糖基化W外，直至现在仍认为导致抗体的许多不同电荷同 工型在抗体组合物内存在的其他翻译后修饰不改变抗体的生物学特性。 导致几种电荷同工型出现的修饰之一是酶促裂解抗体重链中的C末端赖氨酸。一 旦抗体在表达簇肤酶的细胞中产生，则取决于抗体分子，运种裂解在不同水平发生。C末端 赖氨酸的存在产生相当碱性的性质，原因在于赖氨酸的侧链。其一条重链或两条重链上的 赖氨酸裂解因此产生酸性更强的同工型。通常，存在重链上具有0、1或2个C末端赖氨酸 的同工型，因此产生具有略微不同pi的S种同工型（参见Vlasak等人，- 2008)。关于运 种特定修饰，Antes等人，-2007描述了通过等电聚焦（IE巧分析在血清存在或不存在情 况下产生的在癌症被动免疫疗法中使用的批量人源化单克隆抗Lewis-YIGN311抗体。作 者显示在血清存在或不存在情况下产生的抗体组合物的电荷同工型概况是不同的，在血清 不存在下产生的组合物比血清存在下酶促切割抗体重链的C末端赖氨酸产生的组合物受 影响更小。分析运种修饰对两种组合物诱导CDC反应的相应能力（借助补体）尚未显示与 运种修饰相关的任何明显效应。 导致几种电荷同工型在抗体组合物内部出现的另一类型修饰是N末端谷氨酷胺 或谷氨酸残基环化，运导致焦谷氨酸盐（P巧基团的形成并且因此导致酸性更强的同工型。 运种修饰在完整抗体组合物中W不同水平系统出现，但不认为它能够影响抗体的功能特性 (参见Vlasak等人，- 2008)。 导致几种电荷同工型在抗体组合物内部出现的再一类型修饰是形成共价加合物 和明显糖化现象（非酶促地添加糖），尤其在赖氨酸残基上，运产生酸性更强的同工型。也 不认为运种类型的修饰能够影响抗体的功能特性（参见Vlasak等人，-2008)。 导致几种电荷同工型在抗体组合物内部出现的另一个寻常类型修饰是天冬酷胺 残基的脱酷胺化和天冬氨酸残基的异构化，运产生酸性更强的同工型。在抗体的恒定部分 中，对脱酷胺化现象敏感的天冬酷胺残基位于C册结构域，远离Fc化受体和Fc丫R受体结 合位点。因此通常不认为运些修饰能够影响抗体的功能特性（参见Vlasak等人，- 2008)。 化awli等人，-2010和Gamlhi等人，-2011描述了使用阳离子交换树脂W层析技术分离 被动免疫疗法中所用单克隆抗体组合物的主要同工型、酸性同工型和碱性同工型；对导致 几种同工型存在的翻译后修饰的分析；W及研究=种纯化级分（酸性级分、主要级分和碱 性级分）的药代动力学特性和某些功能特性的研究。在两种情况下，天然组合物的层析图 总是显示一个由包含酸性同工型的峰和包含碱性同工型的峰包围的主峰。鉴定的翻译后修 饰尤其包括某些二硫键还原化hawli等人，-2010)、糖化化hawli等人，-2010 ;GarKlhi等 人，-2011)、脱酷胺化（Khawli等人，-2010 ;GarKlhi等人，-2011)、切割重链C末端赖氨 酸（Khawli等人，-2010;GarKlhi等人，-2011)、存在聚集物（Gamlhi等人，-2011)、氧化 现象（Gan化i等人，-2011)。药代动力学特性的分析（Fc化结合及体内检验，引自化awli 等人，-2010)没有作出=种所测试纯化级分在行为方面存在显著差异的任何展示。在运 两篇文本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可以通过以下方法获得的单克隆抗体组合物作为药物使用，所述方法包括：a)从细胞克隆、非人类转基因动物或转基因植物产生单克隆抗体组合物，b)通过层析将步骤(a)中获得的组合物分级分离，和c)合并步骤b)中获得的与层析图主峰相对应的一个或几个层析级分，因而获得的单克隆抗体组合物富含所述主峰，所述主峰占步骤c)中获得的组合物的层析图的至少85％。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·谢弗勒，N·比霍罗，
申请(专利权)人：法国血液分割暨生化制品实验室，
类型：发明
国别省市：法国;FR