单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用。单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用。所述的单克隆抗体NJ001-1由保藏号为CCTCC NO：C201172的杂交瘤细胞株NM001-1分泌。单克隆抗体NJ001-1能有效抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭，并能显著增加TIMP-3mRNA和蛋白表达。单抗NJ001-1作用下，肺腺癌细胞核内单抗NJ001-1特异性抗原能与转录因子FOXP1结合，抑制其对TIMP-3基因启动子区的转录抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用
本专利技术属于生物药物领域，涉及单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移中的应用。
技术介绍
肺癌的侵袭与转移是其恶性标志和特征，也是影响肺癌患者治疗效果和导致患者死亡的最主要原因。肺癌可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(Non-small-cellLungCancer,NSCLC)，其中NSCLC约占85％，NSCLC中又以肺腺癌最为常见。NSCLC起病隐匿，发展迅速，预后差，不治疗者的中位生存期仅为4～5个月，1年生存率为10％左右，5年生存率不足5％。多数NSCLC患者在临床初诊时已出现远处转移(Ⅳ期)，化疗药物治疗效果很不理想。目前，非小细胞肺癌细胞发生转移的分子机制尚未完全阐明，而临床上也缺乏特异性高、针对性强的抑制肺癌细胞转移的治疗药物。因此，探索肺癌侵袭转移的分子机制，寻找并开发治疗肺癌侵袭转移的有效药物与治疗途径，是肺癌分子生物学研究的关键所在。肿瘤的侵袭转移是一个多步骤、多阶段、多途径、涉及多基因变化的复杂过程。有研究表明，在癌细胞侵袭和转移过程中多个信号通路可以被激活，如RAS/MAPK通路，Akt/PI3K通路和ERK通路等，从而使细胞产生肿瘤细胞的生物特征和行为。通常情况下，肿瘤侵袭和转移是一个主动的过程，需肿瘤细胞与肿瘤机制成分共同参与，常包括三个步骤：肿瘤细胞与细胞外基质的黏附；肿瘤细胞释放或诱导释放多种蛋白水解酶，降解细胞外基质；降解区域的肿瘤细胞在趋化因子的引导下转移，在此基础上肿瘤细胞于靶标组织中诱导血管形成，对抗宿主抗肿瘤免疫，最终在远处形成转移灶。金属蛋白酶组织抑制因子-3(TIMP-3)是一种结合细胞外基质(ECM)的非可溶性蛋白。TIMP-3参与正常组织的发育和重建过程，也参与了许多疾病的发生。TIMP-3一方面可以刺激成纤维细胞增殖，另一方面却诱导恶性肿瘤细胞的凋亡。由于TIMP-3能以1∶1分子比例与基质金属蛋白酶(MMPs)非共价结合，抑制MMPs的活性，因此TIMP-3有抑制肿瘤生长、侵袭和转移的作用，肿瘤组织中TIMP-3表达水平的下调或丢失将促进肿瘤的进程。由此可见，基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制剂(TIMP)是调控非小细胞肺癌侵袭转移能力的关键因子。恶性肿瘤细胞从原发部位经淋巴、血液、体腔等途径播散到其他部位的过程为肿瘤的转移。恶性肿瘤细胞的转移是其区别于正常细胞的特征之一，是其本身的生物学特征。肿瘤的转移是其危及宿主生命及影响治疗效果的主要原因。恶性肿瘤细胞能够转移，其原因在于它与正常细胞具有诸多方面的不同，如：生长调控机制的丧失、质膜流动性改变、细胞运动能力的改变、细胞异型性增加、粘附性改变、细胞极性改变等。在不同的肿瘤，其细胞特性不完全相同，因此其转移能力也不相同，即使在同一瘤体内，也可能存在具有不同转移潜能的细胞亚群。目前抗转移药物的研究主要针对肿瘤转移的机理以及转移过程中肿瘤细胞、机体组织的各种变化进行了多方面的研究，但由于肿瘤转移本身的多变性、复杂性，影响因素的多样性，以及研究手段的限制，到目前为止，尚未发现确切的可以控制恶性肿瘤转移动药物。目前，应用于临床的抗肿瘤药物虽然能在一定程度上抑制肿瘤生长，促进肿瘤细胞凋亡，然而对肿瘤细胞的侵袭和转移并无显著的抑制作用。肿瘤细胞的凋亡和侵袭转移是分子机制不同的两个病理生理过程。调控细胞凋亡的途径主要包括线粒体途径、内质网途径和死亡受体途径。然而，肿瘤细胞侵袭转移大多与基质金属蛋白酶及其抑制物的基因表达、上皮间质化等相关。以临床应用的铂类抗肿瘤药物-顺铂、卡铂等为例，虽然铂类药物能显著抑制肿瘤增殖，抗癌谱较广，但其无法抑制肿瘤的侵袭和转移。因此，能够促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长的药物或抗体并不一定能够用于抑制肿瘤侵袭与转移。开发针对恶性肿瘤转移的药物将成为延长肿瘤患者生存时间、提高肿瘤治疗效果的重要途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：单克隆抗体NJ001-1在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用。所述的单克隆抗体NJ001-1由保藏号为CCTCCNO：C201172的杂交瘤细胞株NM001-1分泌。单克隆抗体NJ001-1在抑制NSCLC侵袭及转移中所作用的关键基因作为靶点在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用。所述的单克隆抗体NJ001-1在抑制NSCLC侵袭及转移中所作用的关键基因优选编码转录因子FOXP1。本专利技术所述的单克隆抗体NM001-1的制备方法见CN102391992B。有益效果：单克隆抗体NJ001-1能够特异性识别位于NSCLC细胞浆与细胞膜上的SP70抗原，具有诱导NSCLC细胞凋亡的作用，且对肿瘤细胞的侵袭和转移也存在潜在性影响。单克隆抗体NJ001-1能有效抑制肺腺癌细胞的迁移(图1)和侵袭(图2)，并能显著增加TIMP-3mRNA和蛋白表达(图3)。单抗NJ001-1作用下，肺腺癌细胞核内NJ001-1特异性抗原能与转录因子FOXP1结合，抑制其对TIMP-3基因启动子区的转录抑制作用。附图说明图1细胞划痕实验检测肺腺癌细胞迁移能力A：单抗NJ001-1处理SPC-A1细胞0h和48h“划痕”图；B：单抗组与对照组SPC-A1细胞迁移距离比较；*单抗组和相应对照组间比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。图2Transwell实验检测肺腺癌细胞侵袭能力图3单抗NJ001-1诱导TIMP-3表达图4单抗NJ001-1特异性抗原(50kDa)与FOXP1相互作用生物材料样品的保藏信息杂交瘤细胞株NM001-1于2011年8月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉，武汉大学，保藏号为CCTCCNO：C201172。具体实施方式实施例11、细胞迁移检测收集处于对数生长期的肺腺癌细胞SPC-A-1制成单细胞悬液，以2×105细胞/孔加入6孔细胞培养板中，过夜培养，吸弃培养上清，并用Hank’s液500μl/孔洗一遍。抗体组(50μg/mL、100μg/mL和150μg/mL三组)：每孔加入单抗NJ001-1溶液，终浓度分别为50μg/mL、100μg/mL和150μg/mL每孔；对照组(0μg/mL)：每孔加入20ml培养液。干预后培养24h和48h，用于细胞迁移检测。每组设3个平行孔，实验重复3次。2、细胞迁移能力(划痕实验)检测原理：当细胞长到融合成单层状态是，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”(Wound)。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合(Healing)。基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。操作过程：(1)将2×105细胞/孔加入6孔细胞培养板中，过夜培养，待细胞长到融合状态。数量以贴壁后铺满板底为宜；(2)用消毒后的10μl进口枪头在洗净的细胞表面划出四道相互垂直的“井”字划痕；(3)吸去细胞培养液，使用PBS缓冲液洗涤细胞3次，洗去划痕产生的细胞碎片；(4)选择划痕视野，进行标记，并于显微镜下进行观察拍照；(本文档来自技高网...

【技术保护点】
单克隆抗体NJ001在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用；其中，所述的单克隆抗体NJ001由保藏号为CCTCC NO：C201172的杂交瘤细胞株NM001‑1分泌。

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体NJ001在制备抑制NSCLC侵袭及转移的药物中的应用；其中，所述的单克隆抗体NJ001由保藏号为CCTCCNO：C201172的杂交瘤细胞株NM001-...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘世扬，徐建，王芳，黄珮珺，
申请(专利权)人：南京壬辰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32