治疗性肽制造技术

本公开部分地提供了包含与限定的结合伙伴免疫特异性结合的肽的组合物，其中所述肽至少包含与表1所示的互补区相关的互补决定区。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗性肽相关专利申请本申请要求获得2013年3月15日提交的美国临时专利申请系列号61/792,034和2013年12月6日提交的美国临时专利申请系列号61/913,198，的利益，本申请通过提述并入二者的全部内容。政府资助本专利技术是在美国国立卫生研究院批准基金号P01AI045757和P01CA78378的政府资助下完成的。美国政府对本专利技术具有某些权益。
本专利技术涉及与人类受试者相关的治疗性组合物(例如，肽)。背景暴露于病症或疾病的人类受试者是具有治疗潜力的抗体的一个来源，获得此类抗体的一般方法是本领域已知的。然而，用于特异性获得具有治疗潜力的抗体的方法通常受表达此类抗体的B细胞的出现频率低、增殖速度缓慢，和抗体分泌水平低的限制。例如，具有限定的特异性的记忆B细胞通常在每百万个外周血单核细胞或者大约一毫升血液中仅占1个细胞(Lanzavecchia等人,Curr.Opin.Immunol.,21:298-304(2009):Yoshida等人,Immunol.Rev.,237:117-139(2010))。在癌症患者中，具有治疗潜力的抗体的频率很可能还要更低，这就使得开发能够以高灵敏度和效率分离这类细胞的新方法成为必要。常规的方法通常依赖于通过体外培养和/或使用经免疫的动物模型(例如小鼠)将记忆B细胞转变成抗体分泌细胞(Crotty等人,J.Immunol.,171:4969-4973(2003):Fecteau等人,Immunology,128:e353-e365(2009):Buisman等人,Vaccine,28:179-186(2009):Corti等人,PLoSOne,5:e8805(2010))。例如，在体外培养长达1周之后，可以使用酶联免疫斑点(enzyme-linkedimmunosorbentspot)(ELISPOT)测定法测量培养物上清液中的抗体并对抗体分泌细胞的频率进行评估。这些方法的局限性已有报道(Henn等人,J.Immunol.,183:31777-3187(2009):Cao等人,J.Immunol.,Methods,358:56-65(2010))。例如，体外培养记忆B细胞会将记忆B细胞的表型变成类似于具有截然不同的功能性质的浆细胞(Jiang等人,Eur.J.Immunol.,37:2205-2213(2007):Huggins等人,Blood,109:1611-1619(2007):Jourdan等人,Blood,114:5173-5181(2009))。基于荧光抗原的方法的局限性也有报告(Hofer等人,Immunol.Rev.,211:295-302(2006):Odendahl等人,Blood,105:1614-1621(2005)；Kunkel等人,Nat.Rev.Immunol.,3:822-829(2003):Scheid等人,Nature,458:636-640(2009):Wu等人,Science,329:856-861(2010))。需要改进特异性获得或靶定具有治疗潜力的抗体的方法。MICA是NKG2D的一种配体，NKG2D是一种在大多数人NK细胞、γδT细胞和CD8+T细胞上表达的C型凝集素样II型跨膜受体。一旦偶联(ligation)后，NKG2D通过衔接子蛋白(adaptorprotein)DAP10传递信号，引发穿孔素依赖性细胞溶解，并提供共刺激。在人类中，NKG2D配体包括MHCI类链相关蛋白A(MICA)、与之密切近缘的MICB、UL-16结合蛋白(ULBP)1-4，和RAE-1G。尽管NKG2D配体通常不会在健康组织中被发现，但是各种形式的细胞胁迫，包括DNA损伤，可能上调配体表达，导致它们在多种实体瘤和血液恶性肿瘤，包括黑色素瘤中被频繁检测到。通过配体阳性转化细胞导致的NKG2D活化有助于外在肿瘤抑制，因为NKG2D缺陷小鼠和用抗-NKG2D阻断抗体处理的野生型小鼠表现出增强的肿瘤易感性。然而，在患者体内，可能由于NKG2D配体从肿瘤细胞脱落，引发表面NKG2D的内化并阻碍细胞毒淋巴细胞的功能，从而导致免疫逃逸。可溶性NKG2D配体也可能刺激调节性NKG2D+CD4+Foxp3-T细胞的扩增，该扩增可通过Fas配体、IL-10和TGF-β拮抗抗肿瘤细胞毒作用。MICA是一种从肿瘤细胞脱落，即从细胞表面释放到周围介质中的NKG2D配体，来自癌症患者的血清通常含有升高水平的可溶形式(sMICA)。MICA脱落部分地是通过与蛋白质二硫键异构酶ERp5相互作用实现的，ERp5与关键的半胱氨酸形成二硫键，导致α3结构域去折叠(unfolding)，使其容易遭受ADAM-10/17和MMP14的蛋白水解作用。需要鉴定可特异性识别并结合癌症靶标从而作为基于免疫的癌症疗法的新作用剂。这样的作用剂将可用于对与肿瘤发展相关的疾病状态进行诊断筛查和治疗性干预。概要本公开提供与具有治疗潜力的抗体相关的组合物和方法。在一些实施方案中，本公开了提供了组合物，其包含免疫特异性结合MHCI类多肽相关序列A(MICA)或其上的表位的肽。在一些方面中，该组合物的肽包含表1所示的抗体ID11的VH的互补决定区(CDR)3，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代，和表1所示的抗体ID11的VL的CDR3，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代。在一些方面中，这些肽包含表1所示的抗体ID11的VH的互补决定区(CDR)3和表1所示的抗体ID11的VL的CDR3。在一些方面中，肽进一步包含表1所示的抗体ID11的VH的CDR2，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代，或表1所示的抗体ID11的VL的CDR2，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代，或上述两者。在一些方面中，这样的肽包含表1所示的抗体ID11的VH的互补决定区CDR2，或表1所示的抗体ID11的VL的CDR2，或上述两者。在一些方面中，肽进一步包含表1所示的抗体ID11的VH的CDR1，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代，或表1所示的抗体ID11的VL的CDR1，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代，或上述两者。在一些方面中，这些肽包含表1所示的抗体ID11的VH的互补决定区CDR1，或表1所示的抗体ID11的VL的CDR1，或上述两者。在一些方面中，肽是抗体或抗体片段，其包括：与SEQIDNO:150具有同一性的VH链，其中对应于CDR1,CDR2,和CDR3的区域包括表1所示的抗体ID11的VH的CDR1,CDR2,和CDR3，其在CDR1,CDR2,和CDR3区内具有5个或更少的保守氨基酸取代，并且SEQIDNO:150中对应于FR1,FR2,FR3,FR4的区域包含与表1所示的抗体ID11的VH的FR1,FR2,FR3,FR4具有至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98,99％,或100％同一性的氨基酸序列；和与SEQIDNO:152具有同一性的VL链，其中对应于CDR1,CDR2,和CDR3的区域包括表1所示的抗体ID11的VL的CDR1,CDR2,和CDR3，其在CDR1,CDR2,和CDR3区内具有5个或更少的保守氨基酸取代，并且SEQIDNO:152中对应于FR1,FR2,F本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含与MHC I类多肽相关序列A(MICA)免疫特异性结合的肽，其中该肽包含表1所示的抗体ID 11的VH的互补决定区(CDR)3，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代；和表1所示的抗体ID 11的VL的CDR3，其中具有5个或更少的保守氨基酸取代。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/792,034;2013.12.06 US 61/913,1981.一种与MHCI类多肽相关序列A(MICA)免疫特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体包含：重链可变区(VH)CDR1，其由SEQIDNO:154中所示的氨基酸序列组成，VHCDR2，其由SEQIDNO:156中所示的氨基酸序列组成，和VHCDR3，其由SEQIDNO:158中所示的氨基酸序列组成，和轻链可变区(VL)CDR1，其由SEQIDNO:161中所示的氨基酸序列组成，VLCDR2，其由SEQIDNO:163中所示的氨基酸序列组成，和VLCDR3，其由SEQIDNO:165中所示的氨基酸序列组成。2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中VH区的FR1,FR2,FR3,FR4区包含与SEQIDNO:150中示出的VH的相应FR1,FR2,FR3,FR4区具有至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98,99％,或100％同一性的氨基酸序列。3.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其中VL区的FR1,FR2,FR3,FR4区包含与SEQIDNO:152中示出的VL的相应FR1,FR2,FR3,FR4区具有至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98,99％,或100％同一性的氨基酸序列。4.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其中所述VH区包含SEQIDNO:150所示的氨基酸序列、或其在不位于CDR内的残基中具有5个或更少的保守氨基酸取代的变体。5.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其包含这样的VL区，所述VL区包含SEQIDNO:152所示的氨基酸序列或其在不位于CDR内的残基中具有5个或更少的保守氨基酸取代的变体。6.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其包括：具有SEQIDNO:150所示的氨基酸序列的VH区，和具有SEQIDNO:152所示的氨基酸序列的VL区。7.权利要求1或2的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段是人源的、人源化的或嵌合的。8.一种药物组合物，其包含权利要求1-7中任一项的抗体或其抗原结合片段。9...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·W·武赫尔芬尼格，G·德拉诺夫，F·S·霍迪，B·弗朗茨，K·F·梅，C·哈维，
申请(专利权)人：达纳法伯癌症研究院公司，
类型：发明
国别省市：美国;US