ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途制造技术

本发明专利技术提供一种ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途，本发明专利技术证实了ERRα可以作为新的病毒药物研究用靶点，有着很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域，具体地说涉及ERRa及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途。
技术介绍
雌激素相关受体a (estrogen-related receptor alpha，ERR α )是第一个被发现的孤儿核受体，是通过ERa的DBD结构域低严谨性杂交发现的，随后又发现了雌激素相关受体的另外两个亚型:ESRRB和ERRy。ERRa具有明显的组织表达特异性，主要在肌肉，肝脏和大脑等高耗能的组织中表达，在其他组织细胞中也均有表达，但表达水平较低；体内和体外实验均显示ERRa可以激活线粒体基因，增加线粒体生理功。ERRa与ERa具有同源性，作为转录因子，他们所识别的DNA序列具有部分重叠，但是与ERa不同，ERRa不能结合内源的雌激素，他们的活化是在PGCl α或PGC1I3共刺激因子的辅助下形成二聚体，活化的二聚体结合ERE和ERRE，从而调节转录和能量代谢平衡。细胞的免疫应答可分为先天性免疫应答和获得性免疫应答，先天性免疫应答是机体抗感染免疫的第一道防线，在获得性免疫活化前，它就开始发挥抗感染的作用。先天性免疫应答途径的激活主要是通过模式识别受体(Pattern Recognit1n Receptors，PRRs)识别病原相关分子模式(Pathogen-Associated Molecular Patterns，PAMPs)。PRRs 根据其结构特点主要包括:N0D样受体(NOD-like receptors, NLRs)、Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)和 RIG-1 样受体(RIG-1-liker receptors,RLRs)等。PAMPs 主要包括细菌的细胞壁组分、鞭毛蛋白、脂多糖、非甲基化CpGs、病毒的遗传物质和细胞自身产生的损伤分子等。PRRs识别PAMP后，发生构象改变并募集下游的接头蛋白，激活下游的一系列激酶，启动细胞内级联反应，进而激活转录因子NF-K B (Nuclear Factor κ B)和干扰素调控因子(Interferon Regulatory Factors，IRFs)，最终激活宿主的免疫反应。转录因子NF-κ B、IRF3及AP-1 (Activator protein I)调控I型干扰素的表达在抗病毒先天性免疫途径中起到了极为重要的作用，然而，I型干扰素信号通路的过度激活会导致组织、器官损伤。因此，精确调控I型干扰素表达，也是宿主先天性免疫信号通路的主要研宄热点。申请人前期工作中发现雌激素相关受体a (Estrogen related receptor α，ERRa )可能参与宿主先天性免疫信号通路的调控。ERRa是第一个被发现的孤儿核受体，它是通过雌激素受体a (Estrogen receptor，ERa )的DBD结构域低严谨性杂交发现的。研宄显示ERR α的功能主要通过其转录因子活性，在PGCl α或PGCl β共刺激因子的辅助下，调节能量代谢及线粒体氧化磷酸化。临床研宄结果表明ERRa失调与肥胖、糖尿病及肿瘤等代谢性疾病密切相关。近期研宄发现，ERR α通过增强线粒体功能促进ROS的产生，帮助宿主细胞清除胞内感染的李斯特单胞菌。过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARy)促进能量代谢，同时也有促炎作用；肝乂受体(LXR)通过抑制IRF3活性，抑制IFN β的表达。提示我们核受体可能参与调控宿主先天性免疫应答。但是，目前尚未发现ERRa与干扰素的生成以及抑制病毒感染之间关系的相关报道。
技术实现思路
本专利技术提供的一个技术方案是:ERRa在制备促进干扰素生成的药物中的用途。本专利技术提供的另一个技术方案是:ERRa的抑制剂在制备促进干扰素生成的药物中的用途。本专利技术提供的另一个技术方案是:ERRa在制备抑制病毒感染的药物中的用途。本专利技术提供的另一个技术方案是:ERRa的抑制剂在制备抑制病毒感染的药物中的用途。优选的，所述的病毒为:天花病毒；甲型肝炎病毒；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；人类乳突病毒；流行性感冒病毒；单纯疱瘆病毒；脊髓灰质炎病毒；柯萨奇病毒；埃柯病毒；埃博拉病毒；SARS病毒；人类免疫缺陷病毒；MERS病毒；鼻病毒；人泡沫病毒；麻瘆病毒；人类嗜T细胞病毒；流行性乙型脑炎病毒；登革病毒；出血热病毒；水痘-带状疱瘆病毒；轮状病毒；风瘆病毒。本专利技术通过实验证实了抑制ERRa的转录和表达可以促进体内I型干扰素的产生，进而能够抑制病毒对机体的感染。从实验结果可以看出，ERRα可以作为新的病毒药物研宄用靶点，有着很好的应用前景。【附图说明】图1为VSV感染小鼠骨髓来源巨噬细胞，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图。图2为RNA病毒模拟物poly 1:C转染小鼠骨髓来源巨噬细胞，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图3为DNA病毒模拟物poly dA:dT转染小鼠骨髓来源巨噬细胞，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图4为XCT790处理小鼠骨髓来源巨噬细胞，VSV感染，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图5为XCT790处理小鼠骨髓来源巨噬细胞，DNA病毒模拟物poly dA:dT转染，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图6为XCT790处理小鼠骨髓来源巨噬细胞，RNA病毒模拟物poly 1:C转染，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图7为敲低293Τ细胞内源ERR α表达，并用VSV感染，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图8为敲低293Τ细胞内源ERR α表达，并用RNA病毒模拟物poly 1:C转染，不同感染时间细胞IFN-β分泌结果图图9为敲低293Τ细胞内源ERRa表达，DNA病毒模拟物poly dA:dT转染，不同感染时间细胞IFN- β分泌结果图。图10为抑制ERRa表达，新城疫病毒(NDV)感染细胞，病毒数量变化结果。图11为RNA抑制ERR α表达，VSV感染细胞，病毒数量变化结果。其中A:构建shERRa质粒，并转染293Τ细胞，在嘌呤霉素(puromycin ；PM)的刺激下shERRa质粒载293T细胞中稳定表达，从而获得低ERRa表达水平的293T细胞系。B:采用VSV病毒感染shcontrol细胞和shERRa细胞，收取不同感染时间点的细胞，免疫印迹实验检测细胞中VSV-G蛋白表达。图12为抑制ERR α表达，VSV病毒感染细胞，病毒感染后细胞的存活率。其中A:VSV病毒感染对shcontrol细胞和shERRa细胞存活的影响，台盼蓝染色计数活细胞比例。B:结晶紫染色，检测不同稀释度的病毒感染对shcontrol细胞和shERR a细胞存活的影响。图13为XCT790处理，VSV病毒感染细胞，病毒感染后细胞的存活率。其中A、B:用DMSO溶解XCT790，并用细胞培养基稀释，使其终浓度分别为320、80、20,5,2.5、1.2、0.6和0.3 μ M，然后处理293T细胞，处理24h后收取细胞，检测细胞存活。C:分别采用5、2.5、1.2和0.6 μ M的XCT790处理293Τ细胞，并用VSV病毒感染，分别收取感染后8h和24h的细胞，免疫印迹实验检测细胞内VSV-G的表达。D:采用5μΜ的XCT790处理293Τ、Hela, Α549和Vero细胞，并用VS本文档来自技高网...

【技术保护点】
ERRα在制备促进干扰素生成的药物中的用途。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钟辉，何湘，魏从文，马胜利，张艳红，郑子瑞，管楷，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11