ASGPR抗体及其用途制造技术

本发明专利技术总体上涉及对脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异的抗体和它们选择性递送影响细胞活性的效应子部分的用途。此外，本发明专利技术涉及编码这类抗体的多核苷酸以及包含这类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及用于产生本发明专利技术抗体的方法，以及涉及在治疗疾病时使用它们的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ASGPR抗体及其用途专利
本专利技术总体上涉及对脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异的抗体和它们用于选择性递送影响细胞活性的效应子部分的用途。此外，本专利技术涉及编码这类抗体的多核苷酸和包含这类多核苷酸的载体及宿主细胞。本专利技术还涉及用于产生本专利技术抗体的方法，以及涉及在治疗疾病时使用它们的方法。背景脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是由两个亚基H1和H2组成的跨膜受体。据信这些亚基通过它们的胞外茎区寡聚化。ASGPR是C型凝集素家族(钙离子依赖性凝集素)的成员并介导广泛类型的去唾液酸化糖蛋白的内吞和降解。ASGPR选择性地在肝实质细胞(肝细胞)上表达，这使得它成为肝特异性疗法的有吸引力靶。许多肝病，例如肝炎、肝硬化或肝细胞癌(HCC)，可能因病毒性感染如乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染直接或间接引起。HCV慢性感染是肝硬化和HCC的主要病因之一。类似地，慢性HBV感染在美国占慢性肝病和肝硬化的5-10％。用于HBV和HCV感染的已批准疗法包括干扰素(IFN)，如干扰素α。但是，在许多情况下，副作用已经阻碍这些疗法的开发和广泛使用。认为这类IFN相关的副作用部分归因于全身暴露于IFN后在外周血细胞中诱导干扰素刺激的基因(ISG)。因此，为了使得与肝病IFN疗法相关的副作用最小化并且还为了增进常规干扰素的抗病毒效果，希望向肝脏选择性递送IFN。已经将ASGPR视为肝细胞上用于这类选择性递送的潜在靶分子。例如，WO92/22310描述一个通过重组IFN与脱唾液酸糖蛋白缀合将干扰素靶向肝脏的方案。在相似的方案中，已经修饰干扰素分子本身以产生与ASGPR结合的脱唾液酸-干扰素(Eto和Takahashi,NatMed5,577-581(1999))。最近，已经描述了一个基于抗ASGPR单一可变域(dAb)抗体的方案(WO2011/086143)。但是，这些方案迄今均未显示临床上成功，并且仍需要改进的靶向分子用于向肝脏选择性递送治疗性分子，例如干扰素。本专利技术的抗体组合了几个有利特性，这使得它们特别合适靶向效应子部分如干扰素至表达ASGPR的细胞，例如用于治疗肝病。专利技术概述在一个方面，本专利技术提供一种能够与脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异性结合的抗体，其中抗体包含a)SEQIDNO:16的重链可变区序列和SEQIDNO:14的轻链可变区序列；b)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:2的轻链可变区序列；c)SEQIDNO:8的重链可变区序列和SEQIDNO:6的轻链可变区序列；d)SEQIDNO:12的重链可变区序列和SEQIDNO:10的轻链可变区序列；e)SEQIDNO:20的重链可变区序列和SEQIDNO:18的轻链可变区序列；f)SEQIDNO:24的重链可变区序列和SEQIDNO:22的轻链可变区序列；g)SEQIDNO:28的重链可变区序列和SEQIDNO:26的轻链可变区序列；h)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:30的轻链可变区序列；i)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:32的轻链可变区序列；j)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:34的轻链可变区序列；或k)SEQIDNO:24的重链可变区序列和SEQIDNO:22的轻链可变区序。在一个具体实施方案中，抗体包含SEQIDNO:16的重链可变区序列和SEQIDNO:14的轻链可变区序列。在另一个具体实施方案中，抗体包含SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:2的轻链可变区序列。在又一个方面，本专利技术提供一种能够与ASGPR特异性结合的抗体，其中该抗体与包含SEQIDNO:16的重链可变区序列和SEQIDNO:14的轻链可变区序列的抗体竞争与ASGPR的表位的结合。在一个实施方案中，所述抗体识别ASGPR茎区中的表位。在一个实施方案中，所述抗体是包含SEQIDNO:16的重链可变区序列和SEQIDNO:14的轻链可变区序列的抗体的亲和力成熟变体。在一个实施方案中，所述抗体包含至少约96％、97％、98％或99％与SEQIDNO:16的序列同一的重链可变区序列和至少约96％、97％、98％或99％与SEQIDNO:14的序列同一的轻链可变区序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:14的具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个、特别地两个、三个、四个或五个氨基酸置换的轻链可变区序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:16的具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个、特别地两个、三个、四个或五个氨基酸置换的重链可变区序列。在仍然又一个方面，本专利技术提供一种能够与ASGPR特异性结合的抗体，其中该抗体与包含SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:2的轻链可变区序列的抗体竞争与ASGPR的表位的结合。在一个实施方案中，所述抗体识别ASGPR的糖识别结构域(CRD)中的表位。在一个实施方案中，所述抗体是包含SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:2的轻链可变区序列的抗体的亲和力成熟变体。在一个实施方案中，所述抗体包含至少约96％、97％、98％或99％与SEQIDNO:4的序列同一的重链可变区序列和至少约96％、97％、98％或99％与SEQIDNO:2的序列同一的轻链可变区序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:2的具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个、特别地两个、三个、四个或五个氨基酸置换的轻链可变区序列。在一个实施方案中，所述抗体包含SEQIDNO:4的具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个、特别地两个、三个、四个或五个氨基酸置换的重链可变区序列。在一个实施方案中，所述抗体包含a)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:36的轻链可变区序列；b)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:38的轻链可变区序列；c)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:40的轻链可变区序列；d)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:42的轻链可变区序列；e)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:44的轻链可变区序列；f)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:46的轻链可变区序列；或g)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:48的轻链可变区序列。在一个实施方案中，本专利技术的抗体能够与人ASGPR和食蟹猴ASGPR特异性结合。在一个实施方案中，作为Fab片段通过表面等离子体共振法(SPR)测量时，抗体以小于1μM、特别地小于100nM、更特别地小于1nM的解离常数(KD)与人ASGPR结合。在一个实施方案中，作为IgG1通过荧光共振能量转移法(FRET)测量时，抗体以小于1μM、特别地小于500nM、更特别地小于100nM或甚至小于10nM的KD与人ASGPR结合。在一个实施方案中，抗体不与ASGPR的天然配体竞争结合于ASGPR。在一个具体实施方案中，所述ASGPR的天然配体是脱唾液酸胎球蛋白。在一个实施方案中，抗体不与CLEC10A、特别是不与人CLEC10A可检测地结合。在一个实施方案中，抗体不与缺少ASGP本文档来自技高网...

【技术保护点】
能够与脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异性结合的抗体，其中抗体包含a)SEQ ID NO:16的重链可变区序列和SEQ ID NO:14的轻链可变区序列；b)SEQ ID NO:4的重链可变区序列和SEQ ID NO:2的轻链可变区序列；c)SEQ ID NO:8的重链可变区序列和SEQ ID NO:6的轻链可变区序列；d)SEQ ID NO:12的重链可变区序列和SEQ ID NO:10的轻链可变区序列；e)SEQ ID NO:20的重链可变区序列和SEQ ID NO:18的轻链可变区序列；f)SEQ ID NO:24的重链可变区序列和SEQ ID NO:22的轻链可变区序列；g)SEQ ID NO:28的重链可变区序列和SEQ ID NO:26的轻链可变区序列；h)SEQ ID NO:4的重链可变区序列和SEQ ID NO:30的轻链可变区序列；i)SEQ ID NO:4的重链可变区序列和SEQ ID NO:32的轻链可变区序列；j)SEQ ID NO:4的重链可变区序列和SEQ ID NO:34的轻链可变区序列；或k)SEQ ID NO:24的重链可变区序列和SEQ ID NO:22的轻链可变区序。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.08.09 US 61/681,2391.能够与脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)特异性结合的抗体，其中抗体包含a)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:2的轻链可变区序列；b)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:30的轻链可变区序列；c)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:32的轻链可变区序列；或d)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:34的轻链可变区序列。2.根据权利要求1所述的抗体的亲和力成熟变体，其包含a)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:36的轻链可变区序列；b)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:38的轻链可变区序列；c)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:40的轻链可变区序列；d)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:42的轻链可变区序列；e)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:44的轻链可变区序列；或f)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:46的轻链可变区序列；或g)SEQIDNO:4的重链可变区序列和SEQIDNO:48的轻链可变区序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体能够与人ASGPR和食蟹猴ASGPR特异性结合。4.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体不与ASGPR的天然配体竞争结合ASGPR。5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述ASGPR的天然配体是脱唾液酸胎球蛋白。6.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体不与CLEC10A可检测地结合。7.根据权利要求6所述的抗体，其中抗体不与人CLEC10A可检测地结合。8.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体不与缺少ASGPR表达的细胞特异性结合。9.根据权利要求8所述的抗体，其中抗体不与缺少ASGPR表达的人细胞特异性结合。10.根据权利要求9所述的抗体，其中抗体不与缺少ASGPR表达的人血细胞特异性结合。11.根据权利要求1或2所述的抗体，其中当抗体与表达ASGPR的细胞的细胞表面上的ASGPR结合，则抗体内化至所述细胞中。12.根据权利要求11所述的抗体，其中抗体按照大致与它内化至所述细胞中的相同速率再循环返回所述细胞的表面。13.根据权利要求1或2所述的抗体，其中当抗体与细胞表面上的ASGPR结合，则抗体不显著地诱导细胞表面处ASGPR表达的下调。14.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体是人抗体。15.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体包含人Fc区。16.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体包含IgGFc区。17.根据权利要求16所述的抗体，其中抗体包含IgG1Fc区。18.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体是全长抗体。19.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体是IgG类抗体。20.根据权利要求19所述的抗体，其中抗体是IgG1亚类抗体。21.根据权利要求1或2所述的抗体，其中抗体包含Fc区且在Fc区中包含减少抗体对Fc受体的结合亲和力的修饰。22.根据权利要求21所述的抗体，其中抗体在Fc区中包含减少抗体对Fcγ受体的结合亲和力的修饰。23.根据权利要求21所述的抗体，其中所述Fc受体是活化的Fc受体。24.根据权利要求体21所述的抗体，其中所述Fc受体选自FcγRIIIa(CD16a)、FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32)和FcαRI(CD89)。25.根据权利要求24所述的抗体，其中所述Fc受体是FcγRIIIa。26.根据权利要求25所述的抗体，其中所述Fc受体是人FcγRIIIa。27.根据权利要求21所述的抗体，其中抗体包含Fc区内选自根据EU编号的P329、L234和L235位置处的氨基酸置换。28.根据权利要求21所述的抗体，其中抗体在Fc区中包含根据EU编号的氨基酸置换P329G、L234A和L235A。29.根据权利要求21所述的抗体，其中抗体在Fc区中包含促进两条不相同抗体重链异二聚化的修饰。30.根据权利要求29所述的抗体，其中所述修饰是隆突入穴修饰，包含在抗体重链之一中的隆突修饰和在两条抗体重链的另一条重链中的穴修饰。31.根据权利要求30所述的抗体，其中抗体包含在CH3域中两条抗体重链之间界面内部的修饰，其中i)在一条重链的CH3域中，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·霍弗，C·季，E·默斯纳，P·乌马纳，
申请(专利权)人：罗切格利卡特公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH