GLP-1衍生物颗粒复合物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种GLP-1衍生物颗粒复合物及其制备方法、以及其在制备糖尿病治疗药物与减肥药物中的应用。所述复合物是在修饰聚合物γ-PGA-L-PAE形成的颗粒中包载GLP-1衍生物aGLP-1或mGLP-1所形成的一种壳核结构复合体系。本发明专利技术复合物粒子能在溶液中稳定存在，能抵御DPPIV酶对GLP-1衍生物降解，延长体循环时间，具缓释效应，延长其体内的活性时间，不仅能实现长效降血糖，还具有控制体重增长的减肥效果。本发明专利技术还公开了降血糖和/或降体重的组合物。本发明专利技术制备方法中涉及的原料均无生物毒性，安全性高，成本低，制备工艺简单，包裹效率高，所得复合物粒径均匀可控，稳定性好，体内活性时间长，体重控制效果好，适合工业化规模生产，具良好应用前景。

【技术实现步骤摘要】
GLP-1衍生物颗粒复合物及其制备方法与应用
本专利技术属于生物药物
，涉及一种GLP-1衍生物颗粒复合物及其制备方法与应用、以及一种降血糖和/或降体重的组合物。
技术介绍
糖尿病是当前威胁全球人类健康的最重要的慢性非传染性疾病之一。我国糖尿病患者已超过一亿，成为全球糖尿病患者最多的国家。糖尿病新型药物的研发近年来一直是医药研发中重要的一环，而胰高血糖素样肽-1，即Glucagon-likepeptide1,缩写为GLP-1，类新型药物成为糖尿病医药研发的焦点。GLP-1是一种强效的降血糖激素，并且具有葡萄糖依赖性的刺激胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌功能，降低了低血糖的危险[VilsbollT.DiabetesObesMetab.2009Dec:11]。此外，GLP-1还能刺激胰岛细胞再生，保护胰岛β细胞功能，是新型2型糖尿病靶点特异性小肽[VellaA.Diabetes.2000Apr:49(4):611-7]。但GLP-1进入体内后由于DPPIV等酶的降解，其半衰期仅为2分钟[KnudsenLB.IntJClinPractSuppl.Oct:64(167):4-11]。这使得将GLP-l直接做为临床药物不切合实际，因此大量的研究工作用作修饰GLP-1的动力学参数，产生了一系列的类似物与衍生物。目前已被FDA批准上市的药物，如诺华诺德公司研制的利拉鲁肽，其34位精氨酸替换为赖氨酸，26位的赖氨酸处连接1个16C脂肪酸侧链；礼来研制的艾塞那肽，是由蜥蜴(钝尾毒蜥)分泌的具有39个氨基酸的多肽，与GLP-1具有59％的同源性；葛兰素史克研制的阿必鲁肽，其为GLP-1二聚体与人白蛋白重组体。而国内药物公司还未有被批准上市的相关药物，使得该类药物价格昂贵，给病人造成大的经济负担。但是，利拉鲁肽由于其化学修饰，在临床试验中被发现有致癌风险，被FDA黑框警告[ParksM.NEnglJMed2010；362:774-7]；艾塞那肽由于其低同源性，被发现有恶心、呕吐等肠胃道副反应[RuizGrandeC.CanJPhysiolPharmaco1.1990Dec:68(12):1568-73]，以及胰腺炎报告案例，同样被FDA黑框警告；阿必鲁肽虽然可一周给药一次，但面临的肠胃道副反应也更加严重[RichardE.TheLancetDiabetes&Endocrinology,2014,2(4):289-297]。所以，还需要研制一种更为经济，安全，长效的新型GLP-1衍生物。同时，肥胖症是21世纪威胁人类健康的另一大病症，1997年世界卫生组织已将肥胖正式宣布为一种疾病并作为一种严重的慢性疾病而进行重点防治[许榕仙.肥胖的病因与防治.海峡预防医学杂志,2002,8(5):1-33]。据WHO统计，现全球肥胖症患者已经超过3亿人，11亿人体重过重，中国的肥胖症患者已经超过七千万人，列在全球肥胖病发病率排行榜第10位。而肥胖症给患者带来巨大的健康隐患：增加脑血管疾病的风险，肥胖症患者容易发生大脑动脉粥样硬化；增加糖尿病的风险，肥胖是发生2型糖尿病的重要危险因素之一，在长期肥胖的人群中，糖尿病的患病率明显增加，可高达普通人群的4倍，而2型糖尿病人中，80％是肥胖者；引起骨关节疾病，肥胖可能引起的骨关节疾病主要有三种：骨性关节炎、糖尿病性骨关节炎和痛风性关节炎；增加患癌症的风险，肥胖与某些癌症的发生密切相关[吴丽明,中国医药科学,2011(2):25-26]。但现有的减肥药物主要由于安全性低，负面报道频现。过去的40年内，有5种减肥药因安全隐患而退出市场。其中最著名的两种药物——惠氏公司的Pondimin芬氟拉明和Redux右芬氟拉明，被发现有增加心脏瓣膜病变风险，在上市一年后便退出市场；赛诺菲的Acomplia利莫那班由于可能引发抑郁症或自杀于2008年退市；Servier公司的Mediator苯氟雷司由于引发心脏瓣膜病变于2009年退市；在我国，由于副反应明显，国家食品药品监督管理局禁止了西布曲明制剂和原料药在中国的生产、销售和使用，结束了以“曲美”为代表的减肥药物长达10年的销售史。因此，需要研制更为安全、有效的减肥药物。γ-聚谷氨酸，即γ-PGA，是由谷氨酸的α-氨基和γ-羧基缩合而成的线性大分子，由于其生物相容性高，在体内能被降解为内源性谷氨酸，不易产生积蓄和毒副作用，安全可靠，而成为一种理想的药物载体[李睿.高分子材料科学与工程,2014,30(1):11-14]。但γ-PGA其侧链带有大量的游离羧基，与水高度亲和，无法在水中自聚形成颗粒。本专利技术巧妙地将γ-PGA进行疏水性修饰，即通过将L-苯丙氨酸乙酯，即L-PAE，的氨基与γ-PGA侧链的羧基通过肽键缩合反应相连接，使其成为新型的两亲性共聚物γ-PGA-L-PAE，其中γ-PGA作为水溶性的骨架、L-PAE作为疏水性区域，因而在水中能自聚形成由内部疏水区域和外部亲水区域所组成的稳定颗粒。根据这样的特性，该复合物在水溶液形成颗粒的过程中，能将水溶液中的GLP-1衍生物包裹在颗粒中，装载成为药物-颗粒复合物，该过程的形成示意图如图1所示。装载的两种GLP-1衍生物已有专利授权保护：aGLP-1，专利申请号为CN200910045188，其在给药后体内降血糖活性为440min，其序列如SEQIDNo：1所示；mGLP-1,专利申请号为CN200610024355，其在给药后体内降血糖活性为180min，其序列如SEQIDNo：2所示。在已经上市的药物中，为了增加药物溶解度、提高药物稳定性，往往需要对药物进行结构改造或者使用药物辅料，如由美国百时美-施贵宝公司研制的紫杉醇注射剂Taxol，为提高紫杉醇的水溶性使用了聚氧乙烯蓖麻油系列衍生物CrEL[HuizingM,JChromatogrB,1998,709(1):161-5]，而CrEL被发现具有急性超敏反应、外周神经毒性、细胞毒性等一系列不良反应，限制了其使用的广度与深度[高鹏.药学与临床研究,2010,18(1):61-63]。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种GLP-1衍生物颗粒复合物即GLP-1衍生物-NPs，在γ-PGA-L-PAE形成的颗粒中，包载了GLP-1衍生物，形成一种壳核结构复合体系。其中，所述装载的GLP-1衍生物包括aGLP-1或mGLP-1。由于装载的内含物不同，形成了两种GLP-1衍生物-NPs，即aGLP-1颗粒复合物aGLP-1-NPs和mGLP-1颗粒复合物mGLP-1-NPs。两种GLP-1衍生物-NPs即aGLP-1-NPs和mGLP-1-NPs的颗粒直径均在100-150nm之间，呈单分散体系，表面Zeta电位30-35mV，表明粒子能在溶液中稳定存在。GLP-1衍生物-NPs的外层为γ-PGA-L-PAE，为L-PAE的氨基与γ-PGA的羧基通过肽键缩合反应相连接形成的复合物，L-PAE在γ-PGA上的接入率为54％～95％。γ-PGA-L-PAE对aGLP-1和mGLP-1的包裹率分别达78.40±1.80％和81.50±2.50％。GLP-1衍生物经γ-PGAL-PAE-包裹后，能起到抵御DPPIV酶对其降解、延长体循环时间与缓释的作用，从本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种GLP‑1衍生物颗粒复合物，其特征在于，所述复合物为GLP‑1衍生物‑NPs，在修饰聚合物γ‑PGA‑L‑PAE形成的颗粒中装载了GLP‑1衍生物所形成的壳核结构体系。

【技术特征摘要】
1.一种GLP-1衍生物颗粒复合物，其特征在于，所述复合物为GLP-1衍生物-NPs，在修饰聚合物γ-PGA-L-PAE形成的颗粒中装载了GLP-1衍生物所形成的壳核结构体系；其中，所述复合物的外壳结构中，γ-PGA-L-PAE复合物中的L-PAE在γ-PGA上的接入率为54％～95％。2.如权利要求1所述的GLP-1衍生物颗粒复合物，其特征在于，所述装载的GLP-1衍生物包括aGLP-1或mGLP-1；所述GLP-1衍生物-NPs包括aGLP-1-NPs或mGLP-1-NPs。3.如权利要求2所述的GLP-1衍生物颗粒复合物，其特征在于，所述aGLP-1的序列如SEQIDNo：1所示之序列；所述mGLP-1的序列如SEQIDNo：2所示之序列。4.如权利要求1所述的GLP-1衍生物颗粒复合物，其特征在于，所述复合物的外壳结构中，L-PAE的氨基与γ-PGA的羧基通过肽键缩合反应相连接。5.一种GLP-1衍生物-NPs的制备方法，其特征在于，基于经L-PAE疏水性修饰的γ-PGA具有两亲性，在水中能够自聚形成亲水基团在外、疏水基团在内的颗粒，同时包裹GLP-1衍生物进入疏水核心制备而成；包括以下步骤：1)将由枯草芽孢杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘盈盈，黄静，杨芳，谭世明，严文娟，陈亚州，吴自荣，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：上海;31