【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于mtDNA为抗原的抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法,包括如下步骤:1)应用线粒体分离试剂盒(Thermo)抽提哺乳动物培养细胞线粒体;2)应用DNA抽提试剂盒(Qiagen)提取线粒体DNA(mtDNA);3)DNA凝胶电泳检测mtDNA完整性(约16,500bp),NanoDropTM1000分光光度仪检测mtD NA浓度(pg/ml)及质量(OD260/280>1.8);4)用DNA包被液(Pierce)将mtDNA包被于ELISA板上(Nunc),包被浓度为5μg/ml,100μL每孔,4℃过夜;5)4℃取出包被板,PBS洗板4次,1%明胶室温封闭1h;6)清空封闭液,PBS洗板4次,加入1:100稀释的待测血清,室温孵育1‑2h;7)清空待测血清,PBS洗板4次,加入辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白G(IgG)二抗,室温孵育1h;8)清空抗人IgG二抗,PBS洗板5次,加入底物,室温避光孵育10‑15min;9)加入终止液,酶标仪波长450nm读取OD值。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:吴庄民,陈晓翔,叶霜,张瑱,
申请(专利权)人:吴庄民,
类型:发明
国别省市:上海;31
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