一种GP73、PIVKA-Ⅱ联合检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明专利技术所述检测试剂盒，包括互相独立的高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-Ⅱ检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。本发明专利技术所提供试剂盒首次将GP73和PIVKA-Ⅱ通过荧光微球免疫层析技术进行检测，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种GP73、PIVKA- 11联合检测试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，特别是涉及一种GP73、PIVKA-II联合检测试剂盒及其 制备方法和用途。
技术介绍
高尔基体糖蛋白-73(GolgiProtein73，GP73)又称II型高尔基体膜蛋白（Golgi phosphoprotein2,G0LPH2)，其在慢性肝炎、肝硬化等病人血清中浓度升高，而在肝细胞肝 癌病人血清中升高更加明显，和正常人或良性肝病病人之间呈显著差异。有研宄表明，血清 GP73用于肝癌的诊断，优于血清AFP检测。据文献报道，GP73检测肝癌的灵敏度为69%， 特异性为75%。对于早期肝癌的诊断，GP73的敏感性为62%，而AFP敏感性仅为25%。 AFP水平低于20yg/L的肝癌患者中，有57%的人群GP73水平显著升高。这表明，GP73的 应用能够大大提高对AFP阴性的肝癌患者的检出率。 维生素K缺乏或诘抗剂-II诱导的蛋白质（ProteinInducedbyVitaminK AbsenceorAntagonist-II，PIVKA-II)，又叫脱-y-羧基凝血酶原（Des-gamma-carboxy prothrombin，DCP)或异常凝血酶原，1984年首次被认定为原发性肝癌的标志物。肝细胞肝 癌患者血清中PIVKA-II浓度水平远高于肝硬化和转移性肝癌患者，而且其血清浓度变化 和患者肝细胞癌的动态变化（手术、治疗和复发等）相关。后来的研宄证实，PIVKA-II和 AFP检测可以互为补充，二者的联合检测可以将肝细胞肝癌的诊断率提高到84%，仅大约 16%的肝细胞肝癌患者两者都呈阴性结果。目前PIVKA-II检测已被列入《日本肝癌学会肝 癌诊疗规范2009年版》中，用于肝细胞癌高危人群的筛查及原发性肝癌的辅助诊断；我国 卫生部发布的《原发性肝癌诊疗规范（2011年版）》中用于肝细胞癌辅助诊断的标志物也包 括PIVKA-II。 综上，GP73和PIVKA-II是新型肝癌标志物的典型代表。相对而言，GP73的敏感 性更高，而PIVKA-II的特异性更好，两种指标单独应用时都存在一定程度的假阴性和假阳 性，如果通过恰当的方式和手段，同时联合检测两项指标，互为补充，将有助于进一步降低 肝细胞肝癌临床诊断的假阴性和假阳性，提高这些标志物对肝细胞肝癌的诊断性能，更好 地为临床和患者服务。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种定量检测高尔基体糖 蛋白-73GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-II的检测试剂盒及其制 备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。 为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种定量检测高尔基体糖蛋 白-73GP73、维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-II的检测试剂盒，包括互 相独立的高尔基体糖蛋白-73GP73检测试纸卡和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋 白PIVKA-II检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开 始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述高尔基体糖蛋白-73GP73检测 试纸卡的金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73GP73抗体，所述维生素K缺乏或拮抗剂-II诱 导产生的蛋白PIVKA-II检测试纸卡的金标垫上包含维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生 的蛋白PIVKA-II抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高 尔基体糖蛋白-73GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-II抗体 米用焚光微球标记。 优选的，各个金标垫上的抗体采用180nm焚光微球标记，EX(nm)=650/Em(nm)= 670,具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。 优选的，所述底板为PVC底板。 优选的，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加 样端较远一侧。 优选的，所述高尔基体糖蛋白-73GP73检测试纸卡的检测线上包被有高尔基体糖 蛋白-73GP73抗体；所述维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-II检测试纸 卡的检测线上包被有维生素K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA-II抗体。 每个检测卡中金标垫上的抗体与检测线上的抗体可以是相同的抗体，也可以是不 同的抗体。 优选的，各质控线上包被羊抗鼠抗体。 优选的，所述各样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓 冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲 液的浓度为20-200mM。 优选的，本专利技术所述的各金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液 选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 5_50mM〇 优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。 优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19TWEEN20、 S-20TWEEN80、S-13TRIT0NX-45、S-14TRITONX-100、S-15TRIT0NX305 中的任意一种或 多种的组合，所述表面活性剂的浓度为10?50g/L。 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本专利技术所述的各金标垫 在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸 钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/ L，缓冲液的pH值为7. 2 - 7. 6。 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为： 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种定量检测高尔基体糖蛋白‑73 GP73、维生素K缺乏或拮抗剂‑II诱导产生的蛋白PIVKA‑Ⅱ的检测试剂盒，包括互相独立的高尔基体糖蛋白‑73 GP73检测试纸卡和维生素K缺乏或拮抗剂‑II诱导产生的蛋白PIVKA‑Ⅱ检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述所述高尔基体糖蛋白‑73 GP73检测试纸卡的金标垫上包含高尔基体糖蛋白‑73 GP73抗体，所述维生素K缺乏或拮抗剂‑II诱导产生的蛋白PIVKA‑Ⅱ检测试纸卡的金标垫上包含维生素K缺乏或拮抗剂‑II诱导产生的蛋白PIVKA‑Ⅱ抗体，所述各硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白‑73 GP73抗体和维生素K缺乏或拮抗剂‑II诱导产生的蛋白PIVKA‑Ⅱ抗体采用荧光微球标记。

【技术特征摘要】
1. 一种定量检测高尔基体糖蛋白-73 GP73、维生素 K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的 蛋白PIVKA- II的检测试剂盒，包括互相独立的高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡和维 生素 K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA- II检测试纸卡，所述检测试纸卡均各自 包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸 水垫，所述所述高尔基体糖蛋白-73 GP73检测试纸卡的金标垫上包含高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体，所述维生素 K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA- II检测试纸卡的金标垫 上包含维生素 K缺乏或拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA- II抗体，所述各硝酸纤维素膜上 包被有检测线和质控线，所述金标垫上的高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体和维生素 K缺乏或 拮抗剂-II诱导产生的蛋白PIVKA- II抗体采用荧光微球标记。2. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各硝酸纤维素膜上，检测线位于 离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。3. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述高尔基体糖蛋白-73 GP73检测 试纸卡的检测线上包被有高尔基体糖蛋白-73 GP73抗体；所述维生素 K缺乏或拮抗剂-II 诱导产生的蛋白PIVKA- II检测试纸卡的检测线上包被有维生素 K缺乏或拮抗剂-II诱导 产生的蛋白PIVKA- II抗体。4. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，各质控线上包被羊抗鼠抗体。5. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各样品垫采用缓冲液处理，所述 缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐 缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为20-200mM。6. 如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述各金标垫采用缓冲液处理，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亨宇，
申请(专利权)人：重庆乾德生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85