本发明专利技术涉及了一种采用联合遮蔽法制备的用于LDL-C检测的试剂盒。该试剂由分别放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体及定量酶试剂；所述试剂2含有表面活性剂、显色剂、防腐剂、抗干扰物质及反应促进剂。本发明专利技术具有显色特性好、准确度高、试剂成分稳定、操作简单适用于临床各种全自动生化分析仪的特点。用于检测人体血清中LDL-C的含量。
【技术实现步骤摘要】
： 本专利技术涉及一种测定血清中LDL-C的检测试剂盒，属于生物
技术介绍
： 低密度脂蛋白（LDL)是人的血液中含量最多的脂蛋白，它所携带的胆固醇 (LDL-C)被认为是动脉粥样硬化和冠心病的主要致病因素，临床检测已日益重要。 目前尚没有真正意义的测定LDL-C的参考方法。⑶C测定LDL-C暂定的参考方法 为超速离心法（Betaquantification，β -定量法/BQ法），也为NCEP所推荐。此法测定的 LDL-C，实际上包括脂蛋白（a) 和中间密度脂蛋白（IDL)的胆固醇含量，也是评价其 他检测方法正确性的基础。此法需昂贵的设备、操纵复杂、费时且技术要求高，不易在普通 实验室开展。Friedewald公式计算法是目前应用较广的估测LDL-C的方法，被NCEP推荐为 常规测定方法。其以VLDL组成恒定（VLDL-C/TG = 0. 2,均以mg/dl计）的假设为条件，具 有简便、直接、快速等优点。应用此公式计算山LDL-C常受TC、TG和HDL-C变异的影响，总 变异可达9. 5%。但在血清中存在CM、血清TG > 4. 52mmol/L(400mg/dl)、血清中存在异常 β脂蛋白时时不宜采用Friedewald公式法计算。色谱法和电泳 法因仪器、操纵要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究。 匀相法因其样本用量少、不需作离心沉淀分离处理、具精密度高、与F公式法相关 性好、可实现自动化而为临床实验所瞩目。匀相法推广应用的技术关键是其检测试剂的研 发，方法很多，但其原理相似，在反应体系中有选择地使LDL-C在显色反应中被测定，但匀 相法由于技术操作难度原因可能导致屏蔽LDL-C不完全，直接影响测定结果的准确性。匀 相法测定LDL-C国外（如日本、美国）起步较早，技术也较成熟，其中以表面活性剂法组成 的商品试剂盒以日本第一化学株式会社、英国朗道德产品为代表。目前国内临床实验室采 用匀相法测定LDL-C的试剂多从日本进口，如日本一化、和光出品的试剂，或国内采用国外 技术生产的试剂，如利得曼、申索公司的产品，其价格较高。
技术实现思路
： 本专利技术的目的在于，克服上述技术背景的不足，提供一种价格较低，具有准确度 高、重复性好、抗干扰能力强、基质稳定、可用于全自动生化分析仪等特点的达到国际水平 的用于检测LDL-C的检测试剂盒。本检测试剂盒由分别放置的试剂1和试剂2组成，其中， 所述试剂1主要含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体、表面活性剂1、胆固醇脂酶；所述试剂 2主要含有表面活性剂2、4_氨基安替比林、过氧化物酶、胆固醇氧化酶。 本专利技术的技术方案：试剂1中聚阴离子氯化钙和LDL-C单克隆抗体共同作用下，使 血清中游离LDL-C产生凝集效应并发生抗原抗体反应形成抗原抗体复合物，达到联合遮蔽 LDL-C的效果。血清中HDUVLDL及CM则在表面活性剂辛基苯基聚氧乙烯醚作用下被解离 并释出来的微粒化Chol分子与胆固醇脂酶试剂产生不完整的TRINDER反应。当加入试剂2 时，含有对LDL有特异作用的表面活性剂聚乙二醇8000能水解LDL，释放出微粒化Chol分 子，参与完整的TRINDER反应，在全自动生化分析仪即可得出血清中LDL-C的浓度。 本专利技术的具体实施基本操作如下： 1.试剂1的制备： 在烧杯中加入500ml-700ml纯化水，加入M0PS08-10g，常温下搅拌3-5分钟，加入 MOPSO钠盐9-1 lg，常温下搅拌3-5分钟，加入胆酸钠15-25g，常温下搅拌3-5分钟，加入氯 化钙0. 4-0. 5g，常温下搅拌2-3分钟，加入乙二胺四乙酸二钠盐0. 1-0. 2g，常温下搅拌2-3 分钟，加入辛基苯基聚氧乙烯醚2-4ml，常温下搅拌2-3分钟，加入胆固醇酯酶10-14KU， 常温下搅拌2-3分钟，加入硫酸葡聚糖8-12g，常温下搅拌3-5分钟，加入载脂蛋白B单克 隆抗体50-150ml，常温下搅拌3-5分钟，最后加入N-乙基间甲基苯胺-乙羟丙基磺酸钠 0. 1-0. 3g，常温下搅拌2-3分钟，其余用纯化水补足到1000ml。 2.试剂2的制备： 在烧杯中加入500ml-700ml纯化水，加入M0PS08-10g，常温下搅拌3-5分钟，加入 MOPSO钠盐9-llg，常温下搅拌3-5分钟，加入聚乙二醇800040-60g，常温下搅拌3-5分钟， 加入4-氨基安替比林0. 05-0. 2g，常温下搅拌2-3分钟，加入过氧化物酶1-2KU，常温下搅 拌2-3分钟，加入胆固醇氧化酶0. 4-0. 8KU，常温下搅拌2-3分钟，加入叠氮钠0. 01-0. 02g， 常温下搅拌2-3分钟，其余用纯化水补足到1000ml。 3.本LDL-C检测试剂盒的使用 (1)检测仪器：本专利技术涉及的LDL-C检测试剂盒，适用于各类全自动生化分析仪。 (2)待测血清：不溶血血清，2_8°C可稳定一周，避免脂浊。 (3)具体检测程序如下表1 : 表1样本检测操作程序 计算结果：样品中的LDL-C含量（mmol/L) = Λ AT/ Λ AS X校准液浓度 参考值范围：中、老年人平均约2. 7-3. lmmol/L【具体实施方式】： 实施例1 1.试剂1的配制： 表2为本实例1配制的LDL-C检测试剂盒在外部条件相同的条件下，在日立7180 全自动生化分析仪上连续测定标准定值血清10次的结果数据。 表2准确度测定结果表 从表2可知，本实例1配制的LDL-C检测试剂盒准确度为：0. 69% 表3为本实例ILDL-C检测试剂盒在外部条件相同的条件下，在日立7180全自动 生化分析仪上连续测定质控血清20次的结果数据。 表3精密度测定结果表 从表3可知，本实例1配制的LDL-C检测试剂盒精密度为：0. 73% 表4为本实例ILDL-C检测试剂盒测定值与日本一化LDL-C检测试剂盒测定值的 对照表。 表4测定值对照表 从表4可知，本实例ILDL-C检测试剂盒测定值与日本一化LDL-C检测试剂盒测定 值的相关系数R 2为〇. 992,两者显示了极好的相关性。 实施例2 1.试剂1的配制： 表2为本实例2配制的LDL-C检测试剂盒在外部条件相同的条件下，在日立7180 全自动生化分析仪上连续测定标准定值血清10次的结果数据。 表2准确度测定结果表 从表2可知，本实例2配制的LDL-C检测试剂盒准确度为：0. 81 % 表3为本实例2LDL-C检测试剂盒在外部条件相同的条件下，在日立7180全自动 生化分析仪上连续测定质控血清20次的结果数据。 表3精密度测定结果表 从表3可知，本实例2配制的LDL-C检测试剂盒精密度为：0. 83% 表4为本实例2LDL-C检测试剂盒测定值与日本一化LDL-C检测试剂盒测定值的 对照表。 表4测定值对照表 从表4可知，本实例2LDL-C检测试剂盒测定值与日本一化LDL-C检测试剂盒测定 值的相关系数R2为〇. 991，两者显示了极好的相关性。【主权项】1. 一种采用联合遮蔽法制备的用于LDL-C检测的试剂盒，其特征在于：该试剂由分别 放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体、表面活 性剂1、胆固醇本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种采用联合遮蔽法制备的用于LDL‑C检测的试剂盒，其特征在于：该试剂由分别放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1含有金属氯化物、LDL‑C单克隆抗体、表面活性剂1、胆固醇脂酶；所述试剂2含有表面活性剂2、4‑氨基安替比林、过氧化物酶、胆固醇氧化酶。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王贤俊，郭二豪，郑蓓蕾，江新涛，
申请(专利权)人：王贤俊，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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