一种Poly (A)聚合酶活性测定方法技术

本发明专利技术公开了一种非放射性的Poly(A)聚合酶活性测定方法，所述方法包括：首先根据单链模板合成引物，然后进行PAP酶催化的加尾反应，反应完成后与单链模板退火，随后在足量没有3’-5’外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完成后反应体系中双链DNA的相对量，并利用该检测结果推导出Poly(A)聚合酶活性程度，其中所用单链模板上引物3’方向上的碱基不是t。本发明专利技术的方法不采用放射性元素，没有放射性污染，操作步骤简单快速，灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
一种PoIy(A)聚合酶活性测定方法
本专利技术属于生化
，具体来说涉及一种Poly(A)聚合酶活性测定方法。
技术介绍
Poly(A)聚合酶（Poly(A)polymerase，PAP)是一种特殊的RNA聚合酶。该酶可不 依赖模板特异性的催化三磷酸腺甘（ATP)，逐个聚合至单链RNA片段的3'-0H端上，其反应 方程式为：

【技术保护点】
一种Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根据单链模板合成引物，然后进行PAP酶催化的加尾反应，反应完成后与单链模板退火，随后在足量没有3’‑5’外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完成后反应体系中双链DNA的相对量，并通过该检测结果推导出Poly (A)聚合酶活性程度，其中所用单链模板上引物3’方向上第一位的碱基不是t。

【技术特征摘要】
1. 一种Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，所述方法包括：首先根据单链模 板合成引物，然后进行PAP酶催化的加尾反应，反应完成后与单链模板退火，随后在足量没 有3'-5'外切酶活性的DNA聚合酶存在下进行聚合反应生成双链DNA，最后测定聚合反应完 成后反应体系中双链DNA的相对量，并通过该检测结果推导出Poly (A)聚合酶活性程度， 其中所用单链模板上引物3'方向上第一位的碱基不是t。2. 如权利要求1所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法，其特征在于，反应体系中双链 DNA的相对量是利用仅与双链DNA或仅与单链DNA结合的荧光染料，利用荧光法检测得到 的，并且双链DNA的相对量是以荧光强度表示的。3. 如权利要求2所述的Poly (A)聚合酶活性测定方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓昱，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32