一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法技术

本发明专利技术是一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法，包括（1）酪蛋白凝胶的制备；（2）对待测物质进行蛋白酶活性的鉴定。酪蛋白凝胶制备时将酪蛋白加入到NaOH溶液，溶解成悬浊液后灭菌，加无菌蒸馏水混匀；取转谷氨酰胺酶溶解于水中，过滤；将酪蛋白溶液与酶溶液混匀，注入层析柱导液硬质塑料管内，形成酪蛋白凝胶。本发明专利技术通过将待测物溶液直接与酪蛋白凝胶共孵育，观察酪蛋白凝胶是否溶解，判断某种物质是否具有蛋白酶活性。本发明专利技术方法具有低成本、直观、简便的特点，为鉴定蛋白酶活性提供了极大方便。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种活性鉴定方法，特别是。
技术介绍
蛋白酶（proteinase或proteolytic enzymes),是水解蛋白质肽键的一类酶的总称。蛋白酶广泛存在于动物、植物和微生物中，种类繁多，活性多样。在医学、食品、工业等领域中有重要应用价值。从各种生物样本中筛选活性更高、更独特的蛋白酶一直是一个重要的研究领域。如何从众多的生物样本中快速、简便地筛选出具有蛋白酶活性的样本是一个需要不断研究的问题。 目前，蛋白酶活性鉴定主要有以下方法：1，使用特殊底物，通过蛋白酶作用释放有强光吸收的物质，经过分光光度法鉴定待测物是否有蛋白酶活性。例如，使用异硫氰酸突光素（fluorescein isothiocyanate)标记的酪蛋白为底物，蛋白酶作用后释放异硫氰酸突光素，在485 nm光波下有强吸收峰（Twining, Sally S. Fluoresceinisothiocyanate-Iabeled casein assay for proteolytic enzymes. AnalyticalBiochemistry, 1984，143(1) : 30本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）酪蛋白凝胶的制备：称取6 g酪蛋白，加入到30 mL质量浓度为 0.8% 的NaOH溶液中，微波炉中中等火力溶解成悬浊液，然后放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30 min，取出后再加入10 mL无菌蒸馏水，混匀得酪蛋白溶液；称取8 g转谷氨酰胺酶，溶解于20 ml水中，过滤除菌得酶溶液；将酪蛋白溶液与10 ml酶溶液混匀，注入外径2.0 mm、内径1 mm的层析柱导液硬质塑料管内，25 ℃保温过夜，形成酪蛋白凝胶，置于‑20 ℃长期保存；使用时，按一定长度切断装有酪蛋白凝胶的导管，直接放入待测物溶液中；或者使用注射器推注空气于装有...

【技术特征摘要】
1.一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)酪蛋白凝胶的制备:称取6g酪蛋白，加入到30 mL质量浓度为0.8%的NaOH溶液中，微波炉中中等火力溶解成悬浊液，然后放入高压蒸汽灭菌锅中121°C灭菌30 min，取出后再加入10 mL无菌蒸馏水，混匀得酪蛋白溶液；称取8 g转谷氨酰胺酶，溶解于20 ml水中，过滤除菌得酶溶液；将酪蛋白溶液与10 ml酶溶液混匀，注入外径2.0 _、内径I _的层析柱导液硬质塑料管内，25 °〇保温过夜，形成酪蛋白凝胶，置于-20 °C长期保存；使用时，按一定长度切断装有酪蛋白凝胶的导管，直接放入待测物溶液中；或者使用注射器推注空气于装有酪蛋白凝胶的导管，将酪蛋白凝胶条推出后使用； (2)对待测物质进行纤维蛋白溶解活性的鉴定:通过将待...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦豫良，
申请(专利权)人：淮海工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32