促红细胞生成素模拟肽化学二聚体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及促红细胞生成素模拟肽化学二聚体及其用途。特别地，本发明专利技术涉及式(I)所示的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体，或其可药用盐，以及包含所述促红细胞生成素模拟肽化学二聚体或其可药用盐的组合物。本发明专利技术还涉及所述促红细胞生成素模拟肽化学二聚体或其可药用盐的用途。本发明专利技术的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体或其可药用盐具有较好的促红细胞生成活性。

【技术实现步骤摘要】
促红细胞生成素模拟肽化学二聚体及其用途
本专利技术涉及促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、其制备方法、含有它的药物组合物，以及所述促红细胞生成素模拟肽化学二聚体在预防或治疗以缺乏促红细胞生成素或红细胞缺少或缺陷为特征的疾病中的用途。
技术介绍
促红细胞生成素（EPO）是一种造血生长因子（Hematopoieticgrowthfactor，HGF），是红细胞生成过程所必须的一种糖蛋白。含有165个氨基酸，分子量约为30.4kD，40%的分子量为糖基化修饰结果，糖基化位点分别是24,38,83位的天冬酰胺侧链氨基N-糖基化及126位丝氨酸侧链羟基O-糖基化。在人体中，EPO主要是在肾脏和胎儿的肝中产生的，由肾小管的管周毛细血管内皮细胞合成并释放。EPO作为一种细胞因子在骨髓造血组织中发挥促进红细胞生成的作用，从而提高血红蛋白的浓度，以保证足够的氧气从肺运输到需氧组织。正常情况下，EPO的生成与组织中氧气浓度成反比关系，组织缺氧时，EPO生成增多，以保证各组织器官得到足够的氧气供给。当血浆EPO浓度在10-25mU/mL范围内，即可维持血红蛋白的正常水平（12-17g/dL），半衰期约为5h。EPO除了能够在造血组织促进红细胞的生成，在非造血组织器官中也发挥着重要作用，如促进一些组织器官的生长发育，参与心血管形成、修复及心肌膜损伤修复过程，EPO还参与大脑对神经元损伤的应答过程及伤口愈合过程。在红细胞生成过程中，首先由骨髓产生造血祖细胞，在多种细胞因子的作用下形成粒细胞（Granulocyte，G）-幼红细胞（Erythroid，E）-单核细胞（Monocyte，M）-巨核细胞（Megakaryocytic，M）的集落形成单位，再经过爆式红系集落形成单位（Erythroidburst-formingunits，BFUe），进一步分化为红细胞系集落形成单位（CFUe）。EPO结合到CFUe表面的EPO受体（EPOR），形成幼红细胞，幼红细胞进一步分化为网状细胞，最后形成红细胞。这个过程不仅需要铁、叶酸、维生素B12等营养物质，还需要许多细胞因子的参与，而EPO是红细胞生成过程中最主要的调控因子。因此，缺乏EPO，就容易引发贫血症。多种继发性贫血症都是由于细胞因子EPO生成不足而引起的。研究表明，EPO可以用于治疗多种原因导致的贫血（戴肖岚，陈晓农，重组人类促红细胞生成素治疗贫血研究进展，浙江临床医学2004年9月第6卷第9期，827-828）。20世纪80年代，对继发性贫血治疗方法的研究才逐渐引起重视，通过对其病理生理学的研究，研制了一些红细胞生成刺激因子（Erythropoietic-stimulatingAgents，ESAs）类药物，主要是EPO受体激动剂。自此，EPO药物一直是药物研究的一个热点，EPO产品的销量持续处于销售量最好药物的第四位，并且EPO市场仍在持续增长。ESAs类药物在继发性贫血的治疗市场上已经占有了主导地位。1996年，采用噬菌体展示技术用一些由随机肽序列组成的组合库对EPO受体进行扫描，得到了许多与内源性EPO没有序列相关性的短肽，这些短肽能结合EPO受体，引发一系列信号转导，促进相应细胞系的增殖，并且作用机制与EPO相同。但是这些短肽中半数有效浓度（EC50）最小的为200nM，远高于同时测得的EPO的EC50（20pM），另外，它们的体内稳定性也较差，因此，不能满足成药条件。然而，这些肽序列的发现却为后续研究起到了指导作用。在中国专利201210170307.7中，其中式（1a）具有良好的促进红细胞、血红蛋白和网织红细胞增殖的作用。由于EPO受体是通过配体诱导的EPO受体的二聚化而激活，1999年，OdedLivnah从晶体结构证实，配体（即本文中的促红细胞生成肽）的二聚化构象也是激动EPO受体产生生物学效应的关键所在(Science1999，283：987-990)。因此，为了进一步提高序列（1a）的活性，本专利技术在中国专利201210170307.7的基础上，通过化学手段，获得基于序列（1a）的化学二聚体，提供了一种生物活性更高的促红细胞生成素模拟肽及其可药用盐。
技术实现思路
本专利技术人令人惊奇地发现，对单链促红细胞生成模拟肽进行化学二聚化后，得到的促红细胞生成素模拟肽具有活性更高的EPO受体激动活性。本专利技术基于上述发现而得以完成。专利技术概述本专利技术第一方面提供了具有以下式(I)所示的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、或其可药用盐，其中各符号如本文所述。本专利技术第二方面提供制备本专利技术第一方面所述促红细胞生成素模拟肽二聚体、或其可药用盐的方法。本专利技术第三方面提供了本专利技术第一方面任一项所述促红细胞生成素模拟肽二聚体、或其可药用盐在制备药物中的用途。本专利技术第四方面提供一种药物组合物，其包含本专利技术第一方面所述促红细胞生成素模拟肽二聚体、或其可药用盐，以及任选的药学可接受的载体。本专利技术第五方面提供了在有需要的受试者中激活EPO受体的方法以及治疗EPO及其受体活性低下相关疾病或症状的方法。本专利技术第六方面提供作为EPO受体激动剂或者EPO及其受体活性低下相关的疾病或症状的预防和/或治疗剂的本专利技术第一方面所述促红细胞生成素模拟肽二聚体、或其可药用盐。本专利技术第七方面提供了用于在有需要的受试者中激活EPO受体的组合物，或者用于预防和/或治疗与EPO及其受体活性低下相关的疾病和/或症状的组合物，其包含本专利技术第一方面所述促红细胞生成素模拟肽二聚体、或其可药用盐。专利技术详述本专利技术第一方面提供了具有以下式(I)所示的促红细胞生成素模拟肽、或其可药用盐，其中，P为促红细胞生成模拟肽：其中C-末端的Lys侧链氨基分别与连接臂形成酰胺键；n，m为1至5之间的任一整数（例如为1、2、3、4、5）；R为H，或者R为β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、或L型-或D型-的天然氨基酸或其衍生物，其羧基与N形成酰胺结构。根据本专利技术第一方面任一项所述的促红细胞生成素模拟肽、或其可药用盐，其选自：以上各式所示化合物中，各种氨基酸或非天然氨基酸所表示的含义是，如未特指手性，均为L-型，氨基酸符号按照通用规定表述，非天然氨基酸符号在说明书中进行了说明。在本专利技术中，所述连接臂是指其中R、n、m的定义同式（I）。在本专利技术中，所述天然氨基酸包括丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、脯氨酸（Pro）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）、蛋氨酸（Met）、甘氨酸（Gly）、丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）、半胱氨酸（Cys）、酪氨酸（Tyr）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酰胺（Gln）、赖氨酸（Lys）、精氨酸（Arg）、组氨酸（His）、天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）。根据本专利技术第二方面任一项所述的方法，所述促红细胞生成素模拟肽化学二聚体是按以下步骤制备的：(1)以Rink-酰胺树脂为固相载体，以HBTU-HOBt为缩合剂，根据待获得的促红细胞生成素模拟肽的氨基酸序列，以Fmoc保护的相应氨基酸为原料，按标准的Fmoc固相多肽合成方法合成肽树脂；(2)然后以三氟乙酸：苯甲硫醚：间甲酚：乙二硫醇：水的混合物(例如此五者的体积比为8.25:0.5:0.5:0.25:0.5)为裂解液，在0-40°C下使肽脱除保护基并本文档来自技高网...

【技术保护点】
式(I)所示的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、或其可药用盐：其中，P为促红细胞生成模拟肽：其中C‑末端的Lys侧链氨基分别与连接臂形成酰胺键；n，m为1至5之间的任一整数；R为H，或者R为β‑丙氨酸、γ‑氨基丁酸、或L型‑或D型‑的天然氨基酸或其衍生物，其羧基与N形成酰胺结构。

【技术特征摘要】
1.促红细胞生成素模拟肽化学二聚体，其选自：SEQ－01:SEQ－02：或其可药用盐。2.权利要求1的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、或其可药用盐在制备作为EPO受体激动剂的药物中的用途。3.权利要求1的促红细胞生成素模拟肽化学二聚体、或其可药用盐在制备用于预防和/或治疗以缺乏促红细胞生成素或红细胞缺少或缺陷为特征的疾病、或与EPO或EPO受体活性低下相关的疾病和/或症状的药物中的用途。4.权利要求3的用途，其中所述以缺乏促红细胞生成素或红细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘克良，梁远军，许笑宇，颜玲娣，董华进，宫泽辉，冯思良，郄建坤，贾启燕，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11