芽孢保护剂、应用及微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种芽孢保护剂、应用及微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法，芽孢保护剂，包括氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。本发明专利技术提供的芽孢杆菌保护剂能保护已经萌发的芽孢，使其70℃以内的灭菌温度下仍能继续在培养基中生长，从而保证了后续对微生物肥料中芽孢菌含量的检测准确性。

【技术实现步骤摘要】
芽孢保护剂、应用及微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法
本专利技术涉及微生物肥料检测领域，特别地，涉及一种芽孢保护剂、应用及微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法。
技术介绍
现有技术中，对微生物肥料中活菌数的检测一直沿用农业部的检测标准。检测方法为：将菌剂制品通过稀释，将稀释到一定浓度的菌液接入预先制备好的平板检测培养基中，培养后，对培养基中的菌落数进行肉眼观察计数，从而计算得出产品的含菌数。为了保证检测的准确性，需根据肥料中所含菌种类，分别选择对应的培养基进行培养。对微生物肥料中各种以芽孢形式存在的细菌含量的检测结果常出现较大偏差。这主要是因为检测时各类芽孢菌的芽孢还未萌发，检测出的总菌数中不含这些以芽孢形式存在的细菌的数量，从而降低了微生物肥料中实际的含菌量。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种芽孢保护剂、应用及微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法，以解决现有技术中微生物肥料中以芽孢形式存在的芽孢含量无法准确获知的技术问题。为实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种芽孢保护剂，包括氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。进一步地，由氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸组成。进一步地，由氯化钠浓度为8.5％的生理盐水以及用量为生理盐水用量4wt.％的聚天冬氨酸组成。根据本专利技术的另一方面还提供了一种上述的芽孢保护剂在灭菌处理中的应用。进一步地，包括以下步骤：将含芽孢萌发菌体的待处理物分散于芽孢保护剂中，得到菌悬液；在70～80℃下对菌悬液进行灭菌处理。根据本专利技术的另一方面还提供了一种微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法，包括以下步骤：1)将待检测肥料分散于如上述的芽孢保护剂中，配置成菌悬液；2)对菌悬液在70～80℃下水浴15分钟进行灭菌处理，得到灭菌悬液；3)将灭菌悬液接种至芽孢培养基中，培养后形成菌落，根据芽孢培养基上所形成菌落数量计数后，得出待检测肥料的含菌量。进一步地，芽孢培养基为由胰蛋白胨4.0～6.0g/L、酵母浸粉2.0～3.0g/L、葡萄糖0.5～1.5g/L、七水硫酸镁0.2～1g/L、氯化钠0.5～1.5g/L、碳酸钙0.5～1.5g/L、磷酸氢二钾2.0～3.0g/L、硫酸锰0.01g/L、TTC0.01g/L和琼脂16～20g/L组成。进一步地，芽孢培养基为由胰蛋白胨5.0g/L、酵母浸粉2.5g/L、葡萄糖1.0g/L、七水硫酸镁0.5g/L、氯化钠1.0g/L、碳酸钙1.0g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硫酸锰0.01g/L、TTC0.01g/L和琼脂16g/L组成。进一步地，菌悬液中还包括1～2滴/L分散剂。进一步地，分散剂为吐温或OP-10。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的芽孢杆菌保护剂能保护已经萌发的芽孢，使其70℃以内的灭菌温度下仍能继续在培养基中生长，从而保证了后续对微生物肥料中芽孢菌含量的检测准确性。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将对本专利技术作进一步详细的说明。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。本专利技术提供的芽孢杆菌保护剂包括氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。现有技术中聚天冬氨酸多被用作肥料增效剂，可以强化作物对N，P，K及微量元素的全面吸收，效果显著，适用于多种作物和土壤。而本专利技术通过试验发现将其用于分散含芽孢的待检测样品，能保护其中以及已经萌发的芽孢菌种，防止其在后续去除其他杂菌的加热过程中失活，而无法在培养阶段继续生长，从而影响检测所得含菌数的准确性。通过添加此比例的聚天冬氨酸后，能对分散于其中的待测物料中所含已经萌发的芽孢菌体起到保护作用。聚天冬氨酸因含有肽键和羧基等活性基团的结构特点，具有极强的螯合、分散、吸附等作用，且配伍性极佳。具体的机理不得而知，猜测可能是由于聚天冬氨酸能附着于萌发后的芽孢菌体表面，阻挡高温对菌体的损伤。作为70℃的萌发芽孢菌体保护剂十分的有效。生理盐水有维持细胞正常渗透压的作用，从而起到保护芽孢菌的作用。二者联合使用起到对萌发芽孢菌体的保护作用。优选由氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸组成。更有选此时该保护剂对芽孢菌萌发菌体的保护效果较优。经过70℃下水浴15分钟后，萌发菌体存活率可达到80％以上。更优选的由氯化钠浓度为8.5％的生理盐水以及用量为生理盐水用量4wt.％的聚天冬氨酸组成。此时经过70℃下水浴15分钟后，萌发芽孢菌体存活率可达到90％以上。优选保护剂的保护条件为70～80℃下水浴15分钟。此温度和水浴时间下，保护剂能有效保护萌发芽孢菌体，同时能将待检测物料中的其他非芽孢萌发菌体杀灭。起到提高检测结果准确性的作用。本专利技术另一方面还提供了一种上述的芽孢保护剂在灭菌处理中的应用。包括以下步骤：将含芽孢萌发菌体的待处理物分散于芽孢保护剂中，得到菌悬液；在70～80℃下对菌悬液进行灭菌处理。本专利技术提供的芽孢保护剂通过对芽孢萌发菌体起到保护作用，保护其分散成为菌悬液后再70～80℃下不被杀灭。优选分散步骤包括在200r/分钟的摇床上振荡60分钟。在此条件下进行分散能提高菌体的分散均匀性。防止局部菌体浓度过高导致的萌发菌体受损死亡。本专利技术另一方面还提供了一种微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法，包括以下步骤：1)将待检测肥料分散于如前述的芽孢保护剂中，配置成菌悬液；2)对菌悬液在70～80℃下水浴15分钟进行灭菌处理，得到灭菌悬液；3)将灭菌悬液接种至芽孢培养基中，培养后形成菌落，根据芽孢培养基上所形成菌落数量计数后，得出待检测肥料的含菌量。采用该方法能有效检测微生物肥料中芽孢类细菌的数量，如固氮类芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、侧胞芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等等菌种。采用该方法结合上述芽孢保护液，能有效保护微生物肥料中已经萌发的芽孢体避免在灭菌过程中被杀灭。同时灭菌过程能保证将菌悬液中的其他菌体杀灭。在分散带检测肥料时可以在其中加入分散剂。分散剂的加入量为1～2滴/L。分散剂能将菌悬液中的抱团菌体分散开，防止抱团后稀释过程中无法将其有效分开，而导致检测结果不准确。分散剂可以为常用的各类分散剂，优选为吐温或OP-10(烷基酚聚氧乙烯醚)。分散效果较优。经过灭菌处理的菌悬液需要按常规方法进行稀释。稀释倍数根据待检测肥料中菌种数量进行按常规方法进行选择。可参考平板培养法中的稀释方法进行。之后将灭菌后的菌悬液接种至芽孢培养基中。优选芽孢培养基为由胰蛋白胨4.0～6.0g/L、酵母浸粉2.0～3.0g/L、葡萄糖0.5～1.5g/L、七水硫酸镁0.2～1g/L、氯化钠0.5～1.5g/L、碳酸钙0.5～1.5g/L、磷酸氢二钾2.0～3.0g/L、硫酸锰0.01g/L、TTC0.01g/L和琼脂16～20g/L组成。按此比例制得的芽孢培养基具有促进菌悬液中未萌发芽孢萌发的作用。尤其还能有利于得到芽孢保护液保护的芽孢萌发体进一步萌发生长。该培养基中胰胨、酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；七水硫酸镁、氯化钠维持均衡的渗透压和增强细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芽孢保护剂，其特征在于，包括氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为所述生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种微生物肥料中产芽孢菌含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将待检测肥料分散于芽孢保护剂中，配置成菌悬液；2)对所述菌悬液在70～80℃下水浴15分钟进行灭菌处理，得到灭菌悬液；3)将所述灭菌悬液接种至芽孢培养基中，培养后形成菌落，根据芽孢培养基上所形成菌落数量计数后，得出所述待检测肥料的含菌量；所述芽孢保护剂包括氯化钠浓度为8～10％的生理盐水以及用量为所述生理盐水用量1～5wt.％的聚天冬氨酸；所述芽孢培养基为由胰蛋白胨4.0～6.0g/L、酵母浸粉2.0～3.0g/L、葡萄糖0.5～1.5g/L、七水硫酸镁0.2～1g/L、氯化钠0.5～1.5g/L、碳酸钙0.5～1.5g/L、磷酸氢二钾2.0～3.0g/L、硫酸锰0.01g/L、TTC0.01g/L和琼脂16～20g/L组成。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述芽孢培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑锦华，陈剑，黄旭明，李庆红，谭欢，袁新荣，苏红，
申请(专利权)人：湖南豫园生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43