本发明专利技术的目的是提供一株嗜热微生物突变菌株及其应用，本发明专利技术所提供的XS2-450(Geobacillus sp.)是通过对出发菌株Geobacillus sp.XS2进行常压室温等离子体诱变得到的，其保藏编号为CGMCC No.9430。本发明专利技术采用室温常压等离子体诱变方法获得Geobacillus sp.XS2-450，可大幅提高乳化剂的乳化活性，对甲苯，二甲苯的乳化活性高达100％；乳化稳定性好，静置30d仍能保持70-100％的乳化活性；菌株连续传代20次后乳化活性无明显下降。本技术发明专利技术对突变株Geobacillus sp.XS2-450进行了工业化放大生产，并应用于油田单井吞吐中试，使长庆油田刘55-4油井产油量提高12倍，采出液含水量降低70％以上,表现出了重大的经济价值和规模化应用的潜力。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术的目的是提供一株嗜热微生物突变菌株及其应用，本专利技术所提供的XS2-450(Geobacillus?sp.)是通过对出发菌株Geobacillus?sp.XS2进行常压室温等离子体诱变得到的，其保藏编号为CGMCC?No.9430。本专利技术采用室温常压等离子体诱变方法获得Geobacillus?sp.XS2-450，可大幅提高乳化剂的乳化活性，对甲苯，二甲苯的乳化活性高达100％；乳化稳定性好，静置30d仍能保持70-100％的乳化活性；菌株连续传代20次后乳化活性无明显下降。本技术专利技术对突变株Geobacillus?sp.XS2-450进行了工业化放大生产，并应用于油田单井吞吐中试，使长庆油田刘55-4油井产油量提高12倍，采出液含水量降低70％以上,表现出了重大的经济价值和规模化应用的潜力。【专利说明】一株活性嗜热菌突变株及其在驱油方面的应用
本专利技术属于活性微生物菌株的筛选和应用
，具体涉及一株嗜热微生物突 变菌株及其应用。
技术介绍
表面活性剂是一类两亲分子的总称，这类分子同时含亲水和亲油基团，在很低浓 度下就能显著降低溶剂表面张力或液-液界面张力或增加乳化体系的稳定性。表面活性剂 有多种活性，如乳化，表面吸附，溶解性，润湿性，发泡，去污等，广泛应用在皮革，化妆品，建 筑，石油工业，环境工程等领域。 由生物产生的表面活性剂称为生物表面活性剂（Biosurfactants)。生物表面活性 剂与化学表面活性剂相比，具有用量少、选择性好、无毒、无污染、可降解等优点。在环境治 理，微生物驱油等领域具有较大的应用潜质。生物表面活性剂中分子量大，起乳化作用并具 有稳定活性的称为生物乳化剂，主要包括多聚糖，蛋白，脂多糖，脂蛋白或者这些生物高聚 物的复杂混合物。生物乳化剂可以形成水包油（0/W)或者油包水（W/0)的乳状液，并使其 稳定。在较低的浓度下呈现出较好的乳化作用，并表现出一定的底物专一性。 目前代谢合成生物乳化剂的菌株在应用方面存在如下问题：1)活性不稳定，在实 际生产中活性下降严重；短时间内作用活性高，长时间作用活性下降；2)环境适应能力差， 生长温度范围窄，实际环境温度变化大，使菌株无法快速生长和表现活性；3)生物乳化剂 乳化活性强，但不能显著降低表面张力，导致单独使用驱油活性见效慢。因此，筛选具有应 用价值的产高活性、高稳定性生物乳化剂菌株具有重要的生产价值，如能将其与显著降低 表面张力的绿色生物表面活性剂复配应用，则会具有事半功倍的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株嗜热微生物突变菌株及其应用。即一种具有生长速度 快，遗传稳定性高，乳化剂活性稳定、耐受力好的菌株，从而弥补现有技术的不足。 本专利技术所提供的XS2-450 (Geobacillus pall idus)是通过对出发菌株 Geobacillus sp.XS2进行常压室温等离子体诱变（ARTP)得到的。已于2014年7月9日保 藏于位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心，保藏编号为：CGMCC No. 9430。 本专利技术还提供一种微生物复合驱油的方法，驱油剂主要由三部分组成：微生物发 酵液，发酵培养基和生物表面活性剂鼠李糖脂。 其中所用微生物发酵液即为Geobacillus pall idus XS2-450发酵培养所得，活菌 数为5xl09cfu/ml左右； 发酵培养基是以2 %葡萄糖为碳源，0.3 %硝酸钠为氮源，包含磷酸根离子 0. 54%，硫酸根离子0. 055%，钾离子0. 66%，铁离子0. 005%，镁离子0. 05%，钙离子 0.005% ;鼠李糖脂复配后的质量百分比分数为1%。 本专利技术采用室温常压等离子体诱变方法获得Geobacillus pallidus XS2-450,可 大幅提高乳化剂的乳化活性，对甲苯，二甲苯的乳化活性高达100% ;乳化稳定性好，静置 30d仍能保持70-100%的乳化活性；菌株连续传代20次后乳化活性无明显下降。本技术发 明对突变株Geobacillus pallidus XS2-450进行了工业化放大生产，并应用于油田单井吞 吐中试，使长庆油田刘55-4油井产油量提高12倍，采出液含水量降低70%以上，表现出了 重大的经济价值和规模化应用的潜力。 【专利附图】【附图说明】 图1 :突变株XS2-450进行常压低温等离子体诱变筛选时的存活曲线。 图2 :发酵不同时间突变株XS2-450与原始菌株乳化活性的对比。 图3 :突变株XS2-450发酵24h的发酵液对不同烃类的乳化活性。 图4 :突变株XS2-450发酵24h的发酵液对四种烃类的乳化稳定性。 【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的菌株及复合驱油方法进行详细的描述。 实施例1 本实施例说明将原始菌株进行等离子体诱变的方法。 其中所使用的培养基配方（w/v): 固体平板LB(Luria-Bertani)培养基：氯化钠10%，胰蛋白胨10%，酵母提取物 5%，琼脂 2%，pH 7. 5。 液体LB培养基：氯化钠10%，胰蛋白胨10%，酵母提取物5%，pH7. 5。以原始菌 株Geobacillus pallidusXS2进行等离子体诱变的具体方法如下： 1、制备原始菌株 Geobacillus pallidusXS2 菌悬液 原始菌株Geobacillus pallidusXS2是本实验室从中国甘肃玉门油田鸭儿峡油藏 分离筛选到的一株嗜热地芽孢杆菌；为地芽孢杆菌属XS2菌株（Geobacillus pallidus)， 该菌株的保藏号为CGMCC No. 8338,于2013年10月15日保藏位于北京市朝阳区北辰西路 1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。 从固体LB平板上挑取原始菌株Geobacillus pallidusXS2的单克隆接种于液体LB中进行 摇床活化培养，培养温度60°C，摇床转速200rpm，50ml三角瓶，装液量为15-20ml，培养时间 8-12h，得到对数生长期、活力高的菌液，稀释至细胞浓度0D_ = 1-1. 3,得到待诱变的菌悬 液。 2、制备样品载片 取上一步骤制备得到的菌悬液10μ1，滴加在灭菌冷却后的载片上，载片直径 10_，然后将载片置于无菌超净工作台，自然风干至无明显液滴，全部操作在无菌条件下进 行。 3、等离子诱变操作 利用等离子体诱变系统进行操作。以氦气为放电气体，射频功率100W，气体流量 10SLM，选取处理时间0s，15s，30s，45s，60s，90s进行等离子体诱变，每次处理一个载片。诱 变后，用生理盐水将载体上的细胞洗脱下来，绘制存活曲线。 实验结果如附图1所示。为提高获得高乳化活性和生长能力较强菌株的几率，根 据预实验结果选取45s为后续筛选的诱变辐照时间，此时细胞的存活率为3. 08%。 实施例2 本实例说明产高活性生物乳化剂菌株的筛选方法。 其中所使用的培养基配方（w/v): 固体平板LB(Lur本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株嗜热地芽孢杆菌，其特征在于，所述的地芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.9430。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄志勇，董大媛，王兴彪，蔡明昱，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12
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