一种提取制备泥炭黄腐殖酸的方法和药物应用技术

本发明专利技术公开泥炭黄腐殖酸的提取方法和药物应用；方法A：泥炭、极端嗜热(3-13CFU)、嗜压(5-11CFU)、嗜盐(6-12CFU)、嗜碱(7-13CFU)、嗜酸菌(3-10CFU)混合，条件一（10-130℃、0.05-0.18MPa）、二（5-75℃、0.05-0.12MPa）和三（5-65℃0.05-0.12MPa）处理1-2、1-3和1-2天；方法B：将泥炭和部分菌混合，条件一二1-2和1-3天，与嗜酸菌混合，条件三1-2天；方法C：将泥炭、极端嗜热菌和嗜压菌混合，条件一1-3天，与嗜盐、碱菌混合，条件二1-3天，与嗜酸菌混合，条件三1-2天。该方法得到的黄腐殖酸的纯度高。

【技术实现步骤摘要】
一种提取制备泥炭黄腐殖酸的方法和药物应用
本专利技术涉及提取制备泥炭黄腐殖酸的方法及其制得的产品和药物应用。
技术介绍
泥炭腐植酸属于沼泽植物遗体转变成的具有多组分、多级分、半胶体特性的生物高分子(摘自Biopolymers，[芬]Μ.霍夫里特[德]Α.斯泰因比歇尔主编，郭圣荣主译，化学工业出版社，现代生物技术与医药科技出版中心，2004.6第一版，第I卷木质素、腐殖质和煤)。含羧基、酚羟基、醌基等官能团的泥炭腐殖酸又可分级为黄腐殖酸、棕腐殖酸和黑腐殖酸。黄腐殖酸分子量较小，活性官能团较多。上世纪80-90年代北京海淀医院、同仁医院、黑龙江中医药大学附属医院、海军总医院和云南一平浪煤矿医院等，已有用泥炭、褐煤的腐殖酸用于临床试验的数据(摘自:成绍鑫，2007年化学工业出版社，腐植酸物质概论)，近几年也有相关的报道是关于腐殖酸用于胃粘膜保健、辅助治疗烫伤，口疮炎，小鼠造血系统障碍，对免疫反应和甲状腺功能的影响，以及用于抗HIV、癌症实验治疗的研究。但是由于黄腐殖酸结构的不确定性，造成了黄腐殖酸活性组分作为医药应用的瓶颈。在现有技术中，由于煤地质演变程度不同，造成矿化、风化过程后泥炭、褐煤和风化煤中含腐殖酸量的不同，现有分离黄腐殖酸的技术不能满足分离的要求。黄腐殖酸的分离始终是技术难点。现有技术中，分离黄腐殖酸的工艺一般是从水溶和酸溶性的黄腐殖酸、醇溶性的棕腐酸以及碱溶酸析性的黑腐酸中分离，离子交换树脂精制等。上述各方法普遍存在黄腐殖酸的提取量较少且分离得到的黄腐殖酸的纯度不高的缺陷。并且，上述方法中，低沸点的酮是不能用于制备药用级黄腐酸的，醇溶剂也存在挥发损失大，离子交换树脂精制过程树脂易污染、废水量大、不易工业化。 专利ZL02158189.4 (中国农业大学)以褐煤、风化煤及煤矸石为原料，采用微生物降解生产黄腐酸(黄腐殖酸)的方法，不产生污染环境的二次废料，经7-9天的发酵，产量比化学法高，但是该专利的原料不是泥炭，并且还存在发酵时间长，产品纯度低。这些缺陷，都极大地制约了黄腐殖酸分离及应用技术的发展。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服现有技术中黄腐殖酸的分离工艺中提取量较少，分离得到的黄腐殖酸的纯度不高，低沸点的醇溶剂挥发损失大，离子交换树脂精制过程树脂易污染，废水量大，不易工业化生产，而微生物降解的方法发酵时间长，产品纯度低等诸多缺陷，提供一种提取制备泥炭黄腐殖酸的方法及医药用途。本专利技术的提取制备黄腐殖酸的方法，节能减排，避免了工艺过程中的高温、高压、需要加入酸碱等溶剂或者在离子交换精制中产生酸碱废水的问题，无污染，操作简便，能够分离得到大量的黄腐殖酸，且得到的包括黄腐殖酸在内的有效物质的纯度达98%以上，分离的得到的黄腐殖酸中富含糖苷、氨基酸和核苷酸等物质。本案中，所述的黄腐殖酸又名黄腐植酸。本专利技术的目的在于，提供一种泥炭黄腐殖酸的提取方法；所述的提取方法为方法A、方法B和方法C中任一种；所述的方法A包括以下步骤:将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌混合均匀，依次保持第一处理条件1-2天，第二处理条件1-3天和第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可；所述的方法B包括以下步骤:(I)将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第一处理条件1-2天，再保持第二处理条件1-3天，得泥炭-菌的混合液；(2)将步骤(1)中所述的泥炭-菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可；所述的方法C包括以下步骤:(I)将泥炭的水溶液、极端嗜热菌和嗜压菌混合均匀，保持第一处理条件1-3天，再与嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第二处理条件1-3天，得泥炭-菌的混合液；(2)将步骤(1)中所述的泥炭-菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可；其中，所述的第一处理条件为:温度10_130°C和压力0.05-0.18MPa ;所述的第二处理条件为:温度5-75°C和压力0.05-0.12MPa ;所述的第三处理条件为:温度5_65°C和压力 0.05-0.12MPa ；所述的极端嗜热菌的添加量为3_13CFU/g泥炭；所述的嗜压菌的添加量为5-llCFU/g泥炭；所述的嗜盐菌的添加量为6-12CFU/g泥炭；所述的嗜碱菌的添加量为7-13CFU/g泥炭；所述的嗜酸菌的添加量为3-10CFU/g泥炭；所述的极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌均为处于对数期的菌株。以下针对上述内容做进一步的说明:本专利技术中，所述的对数期的各菌株的培养方法为:将各菌株置于培养基中培养至对数生长期，即可；其中，所述的培养基包括:黄腐殖酸2-10g、琼脂粉l-10g、蛋白胨l-5g和去离子水200-1000mL ;所述的培养的温度较佳地为10_38°C，更佳地为38°C ;所述的培养的压力较佳地为0.09-0.102MPa，更佳地为0.1MPa ;所述的培养较佳地为震荡驯化培养，所述的振荡培养的震荡速度较佳地为60-300rpm，更佳地为300rpm ;所述的各菌株培养至对数期后，较佳地按10倍体积扩增，所述的扩增时的培养基为本领域常规的培养基，所述的扩增时的培养基较佳地包括:黄腐殖酸2-10g、琼脂粉l-10g、蛋白胨l_5g和去离子水200-1000mL ;所述的扩增较佳地在种子罐中进行；所述的扩增较佳地为按1、I1、III三级扩增。所述的扩增后，菌株即可使用。本专利技术中，所述的泥炭较佳地包括:20%_60%的有机物、0%_10%的矿物质、0%_10%的无机物、0%_5%的重金属和15%-80%的水，所述百分比为占泥炭的质量百分比；其中，所述的有机物主要包括2%-15%的纤维素、1%-10%的半纤维素、1%_15%的木质素、15%-55%的腐殖酸和1%-5%的浙青，所述百分比为占所述的有机物的质量百分比；所述的无机物主要包括:5%-20%的粘土、25%-40%的石英和10%-20%的矿物杂质，所述百分比为占所述无机物的质量百分比。所述的泥炭较佳地为云南石屏泥炭、四川若尔盖泥炭、黑龙江桦林泥炭和吉林敦化泥炭中的一种或多种，更佳地为云南石屏泥炭。本专利技术中，所述的泥炭的粒径较佳地为60-200目，更佳地为60-80目。所述的泥炭的水溶液中的水溶液较佳地为去离子水。所述的泥炭的水溶液中的泥炭与水的质量比较佳地为(1:2)- (1:10)，更佳地为(1:5)- (1:10)。按照本领域常规，本专利技术中，所述的极端嗜热菌为最适生长温度在65°C以上，最低生长温度在40°C以上的微生物。所述的极端嗜热菌为本领域常规的极端嗜热菌，较佳地包括栖热袍菌(Thermotoga)、热棒菌(Pyrobaculum)和丁醇栖高温菌(Hyperthermus)中的一种或多种。所述的极端嗜热菌的添加量较佳地为每克泥炭添加6-10CFU。本专利技术中，所述的嗜压菌为本领域常规的嗜压菌，较佳地包括固氮螺菌(A.brasilense)、屈烧杆菌(Flexibacter)、生抱食纤维菌(Sporocytophaga)和圆杆菌(Cyclobacterium)中的一种或多种，更佳地为固氮螺菌(A.brasilense)。按照本领域常规，本专利技术中，所述的嗜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种泥炭黄腐殖酸的提取方法，其特征在于：所述的提取方法为方法A、方法B和方法C中任一种；所述的方法A包括以下步骤：将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌混合均匀，依次保持第一处理条件1?2天，第二处理条件1?3天和第三处理条件1?2天，去除杂质，脱水，即可；所述的方法B包括以下步骤：（1）将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第一处理条件1?2天，再保持第二处理条件1?3天，得泥炭?菌的混合液；（2）将步骤（1）中所述的泥炭?菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1?2天，去除杂质，脱水，即可；所述的方法C包括以下步骤：（1）将泥炭的水溶液、极端嗜热菌和嗜压菌混合均匀，保持第一处理条件1?3天，再与嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第二处理条件1?3天，得泥炭?菌的混合液；（2）将步骤（1）中所述的泥炭?菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1?2天，去除杂质，脱水，即可；其中，所述的第一处理条件为：温度10?130℃和压力0.05?0.18MPa；所述的第二处理条件为：温度5?75℃和压力0.05?0.12MPa；所述的第三处理条件为：温度5?65℃和压力0.05?0.12MPa；所述的极端嗜热菌的添加量为3?13CFU/g泥炭；所述的嗜压菌的添加量为5?11CFU/g泥炭；所述的嗜盐菌的添加量为6?12CFU/g泥炭；所述的嗜碱菌的添加量为7?13CFU/g泥炭；所述的嗜酸菌的添加量为3?10CFU/g泥炭；所述的极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌均为处于对数期的菌株。...

【技术特征摘要】
1.一种泥炭黄腐殖酸的提取方法，其特征在于:所述的提取方法为方法A、方法B和方法C中任一种； 所述的方法A包括以下步骤: 将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌混合均匀，依次保持第一处理条件1-2天，第二处理条件1-3天和第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可； 所述的方法B包括以下步骤: (1)将泥炭的水溶液、极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第一处理条件1-2天，再保持第二处理条件1-3天，得泥炭-菌的混合液； (2)将步骤(1)中所述的泥炭-菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可； 所述的方法C包括以下步骤: (1)将泥炭的水溶液、极端嗜热菌和嗜压菌混合均匀，保持第一处理条件1-3天，再与嗜盐菌和嗜碱菌混合均匀，保持第二处理条件1-3天，得泥炭-菌的混合液； (2)将步骤(1)中所述的泥炭-菌的混合液与嗜酸菌混合均匀，保持第三处理条件1-2天，去除杂质，脱水，即可； 其中，所述的第一处理条件为:温度10-130°C和压力0.05-0.18MPa ;所述的第二处理条件为:温度5-75°C和压力0.05-0.12MPa ;所述的第三处理条件为:温度5_65°C和压力0.05-0.12MPa ； 所述的极端嗜热菌的添加 量为3-13CFU/g泥炭；所述的嗜压菌的添加量为5-llCFU/g泥炭；所述的嗜盐菌的添加量为6-12CFU/g泥炭；所述的嗜碱菌的添加量为7-13CFU/g泥炭；所述的嗜酸菌的添加量为3-10CFU/g泥炭；所述的极端嗜热菌、嗜压菌、嗜盐菌、嗜碱菌和嗜酸菌均为处于对数期的菌株。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述的混合均匀的方法为将菌株以0.5-2L/h的流速流入泥炭的水溶液中，较佳地为将菌株以0.5-lL/h的流速流入泥炭的水溶液中。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述的第一处理条件中的温度为30-110°C;所述的第一处理条件中的压力为0.07-0.15MPa ;所述的将泥炭的溶液、极端嗜热菌和嗜压菌混合均匀后，保持第一处理条件2-3天； 所述的第二处理条件中的温度为10-70°C ;所述的第二处理条件中的压力为0.09-0.1lMPa ;在所述的第二处理条件下，混合体系中的pH较佳地为pH6.0-12.0,更佳地为 ρΗ7.0-12.0 ； 所述的第三处理条件的温度为15_60°C ;所述的第三处理条件的压力为0.1OMP ;在所述的第三处理条件下，混合体系中的PH较佳地为pH4.0-7.5。4.如权利要求1-3中任一项所述的提取方法，其特征在于:所述的对数期的各菌株的培养方法为:将各菌株置于培养基中培养至对数生长期，即可；其中，所述的培养基包括:黄腐殖酸2-10g、琼脂粉l-10g、蛋白胨l_5g和去离子水200-1000mL ;所述的培养的温度较佳地为10-38 °C，更佳地为38 °C ;所述的培养的压力较佳地为0.09-0.102MPa，更佳地为0.1MPa ;所述的培养较佳地为震荡驯化培养，所述的振荡培养的震荡速度较佳地为60-300rpm，更佳地为300rpm ;所述的各菌株培养至对数期后，较佳地按10倍体积扩增；所述的扩增时的培养基较佳地包括:黄腐殖酸2-10g、琼脂粉Ι-lOg、蛋白胨l_5g和去离子水200-1000mL ;所述的扩增较佳地在种子罐中进行；所述的扩增较佳地为按1、I1、III三级扩+?>曰ο5.如权利要求1-3中任一项所述的提取方法，其特征在于:所述的泥炭包括:20%-60%的有机物、0%_10%的矿物质、0%-10%的无机物、0%-5%的重金属和15%-80%的水，所述百分比为占泥炭的质量百分比；其中，所述的有机物主要包括2%-15%的纤维素、1%-10%的半纤维素、1%-15%的木质素、15%-55%的腐殖酸和1%_5%的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕伟东，杨俊佳，王桥山，周霞萍，刘强，
申请(专利权)人：云南联合药业有限责任公司，华东理工大学，
类型：发明
国别省市：