一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法技术

本发明专利技术公开一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法，包括下述步骤：步骤1，农杆菌菌种的活化培养；步骤2，山葵无菌苗的获得；步骤3，山葵子叶的预培养；步骤4，山葵子叶的遗传转化；步骤5，山葵毛状根的快速增殖。其由发根农杆菌成功诱导山葵子叶实现遗传转化，获得了大量含有次生代谢产物、生长迅速、遗传稳定和能快速生长的毛状根。

【技术实现步骤摘要】
一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法
本专利技术涉及山葵遗传转化
，特别公开一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法。
技术介绍
山葵(WasabijaponicaMatsum)又名山嵛菜、山菜，为十字花科山嵛菜属多年生半阴生草本植物。山葵植物中含有一种芥子苷类的物质，在植物体被磨碎时，该物质在芥子苷酶的作用下水解形成异硫氰酸酯类化合物，其中尤以丙烯基异硫氰酸酯含量最高，约占89％～94％；另外，山葵植物还含有大量的氨基酸和各种人体需要的微量元素。由于山葵含有丰富的异硫氰酸酯类化合物和大量的人体需要的氨基酸和微量元素，其不仅具有强烈的辛辣味和特殊的香辛味，而且还具有免疫调节、抗菌、抗癌、抗氧化、抗血小板聚集等多种作用，是国际上公认的极为稀缺和珍贵的药食同源植物，被称为“绿色黄金”。与其广泛的应用形成鲜明的对比，山葵资源十分有限，这是因为山葵植物的生长发育对环境有极为苛刻的要求，山葵适于在海拔高度为1000～2000米、温度范围为8～l8℃的潮湿凉爽的林中小溪生长。山葵生育温度一旦超过30℃易发生软腐病、黑心病、白粉病和病毒病，其中以软腐病和黑已病最为严重；但低于-3℃时又易受冻害；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1，农杆菌菌种的活化培养：将发根农杆菌在YEB固体培养基上划线后，放在26～30℃的温度条件下进行暗培养24～36h后，挑取单菌落接入YEB液体培养基中，并于25～30℃振荡培养1～2天后，用于外植体浸染；步骤2，山葵无菌苗的获得：将山葵种子放在超净工作台上，先用75％的酒精消毒20～40s，再用0.1％升汞消毒3～8min，无菌水冲洗2～5次后，剥去种皮接种在培养基上培养，获得山葵无菌苗；步骤3，山葵子叶的预培养：切取山葵无菌苗展开的子叶作为外植体，接种于预培养基上，并进行预培养；步骤4，山葵子叶的遗传转化：选取预培养后的山葵...

【技术特征摘要】
1.一种以山葵子叶为外植体的遗传转化方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1，农杆菌菌种的活化培养：将发根农杆菌在YEB固体培养基上划线后，放在26～30℃的温度条件下进行暗培养24～36h后，挑取单菌落接入YEB液体培养基中，并于25～30℃振荡培养1～2天后，用于外植体浸染；所述的农杆菌为发根农杆菌A4或R1000，浸染山葵子叶外植体的菌液OD600＝0.1～0.3；步骤2，山葵无菌苗的获得：将山葵种子放在超净工作台上，先用75％的酒精消毒20～40s，再用0.1％升汞消毒3～8min，无菌水冲洗2～5次后，将消毒后的山葵种子剥去种皮并接种在MS+6-BA0.5～4mg·L-1+NAA0.5～2mg·L-1+蔗糖20～50g·L-1+琼脂3.5～4.5g·L-1的培养基上，并在22～28℃，光强1000～2000lx,每天光照8～12h的条件下培养，获得山葵无菌苗；步骤3，山葵子叶的预培养：切取山葵无菌苗刚展开1-4d的子叶作为外植体，接种于预培养基上，并进行预培养，预培养基是MS+2，4-D1～2mg·L-1+KT0.1～0.5mg·L-1+腺嘌呤10～20mg·L-1+蔗糖20～50g·L-1+琼脂5～7g...

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃华，任三军，孙雁霞，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：四川;51