一种菊苣叶绿体转化体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种安全、环保的菊苣叶绿体转化体系的建立方法，包括如下步骤：（1）菊苣叶片外植体的高频再生体系建立；（2）一种安全、环保的菊苣叶绿体定点整合表达载体的构建；（3）基因枪轰击法转化菊苣外植体，经三轮抗性筛选获得叶绿体转基因株系。本发明专利技术采用一种新型的安全选择标记基因PMI替代传统的抗生素标记基因aadA，构建叶绿体定点整合表达载体，建立菊苣的叶绿体转化体系，该体系具有筛选效率高、外源基因表达水平高、转基因植株的生物安全性强等优点。本发明专利技术不但拓宽了叶绿体转化的受体种类，而且为进一步通过该方法对菊苣进行遗传改良，或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗、医用蛋白等搭建技术平台。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种安全、环保的菊苣叶绿体转化体系的建立方法，包括如下步骤：（1）菊苣叶片外植体的高频再生体系建立；（2）一种安全、环保的菊苣叶绿体定点整合表达载体的构建；（3）基因枪轰击法转化菊苣外植体，经三轮抗性筛选获得叶绿体转基因株系。本专利技术采用一种新型的安全选择标记基因PMI替代传统的抗生素标记基因aadA，构建叶绿体定点整合表达载体，建立菊苣的叶绿体转化体系，该体系具有筛选效率高、外源基因表达水平高、转基因植株的生物安全性强等优点。本专利技术不但拓宽了叶绿体转化的受体种类，而且为进一步通过该方法对菊苣进行遗传改良，或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗、医用蛋白等搭建技术平台。【专利说明】
本专利技术涉及一种安全、环保的菊苣叶绿体遗传转化体系的建立方法，属于植物基因工程
。
技术介绍
1996年，首例转基因农作物产业化应用，之后全球转基因技术研究与产业应用快速发展，与此同时，转基因的沉默现象及标记基因的生物安全性成为人们普遍关心的问题。具体来说，主要包括“基因逃逸”和抗生素标记基因的使用给环境和生物带来的潜在安全性问题两个方面。因此，建本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菊苣叶绿体转化体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：（1）菊苣叶片外植体的再生体系建立菊苣种子经灭菌消毒后接种在MS培养中萌发，以幼苗真叶为外植体，外植体在分化培养基上经器官发生途径直接分化不定芽，不定芽转接到生根培养基中生根；所述的分化培养基组成为：MS+1.5?mg/L?6?BA+0.4?mg/L?NAA+30?g/L?蔗糖；所述的生根培养基组成为：1/2?MS+0.2?mg/L?NAA+30?g/L?蔗糖；（2）菊苣叶绿体定点整合表达载体pJBCM的构建菊苣叶绿体定点整合表达载体pJBCM包括菊苣叶绿体基因组的同源重组片段rps12及trnV?16srDNA、PMI筛选标记基因表达...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉华，巩智刚，周海鹏，徐芳，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：