一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法，其特点是：A）对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化；B）同时用多个0.5ml离心管接收流出组分；C）用Bindingbuffer清洗柱；使纯化样品进入柱内，连续接收流出组分；D）使用Bindingbuffer清洗柱，连续接收流出组分；E）使用Elutionbuffer洗脱柱，连续接收流出组分；F）每个收集管中取50μl分别加入384孔板中。本方法利用酶标仪，对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值，进而检测其IgG含量，并得到最终纯化组分曲线，可替代自动检测器描述整个过程纯化。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，其特点是：A）对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化；B）同时用多个0.5ml离心管接收流出组分；C）用Bindingbuffer清洗柱；使纯化样品进入柱内，连续接收流出组分；D）使用Bindingbuffer清洗柱，连续接收流出组分；E）使用Elutionbuffer洗脱柱，连续接收流出组分；F）每个收集管中取50μl分别加入384孔板中。本方法利用酶标仪，对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值，进而检测其IgG含量，并得到最终纯化组分曲线，可替代自动检测器描述整个过程纯化。【专利说明】
本专利技术涉及一种生物制备中的实验方法，特别是涉及，主要应用于实验室内抗体(蛋白)制备，可以代替检测器制备纯化曲线。
技术介绍
紫外检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。其特点:使用面广(如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)；灵敏度高；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。酶标仪实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同，可以同时对几十或上百个样品进行检测。微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板，板上有多排大小均匀一致的小孔，微孔板上每个小孔可盛放10-100微升的溶液。可以快速、平行检测大量的样品。蛋白质纯化是生物实验的基础技术，实验室内经常制备少量纯化抗体用于实验应用。由于样品量少，多采用注射器加压的手动进样方式代替进样泵，并且一般不需检测器检测流出各组分。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术的上述不足，公开。本专利技术在少量制备抗体时，可以代替实验室昂贵的纯化设备，用手动的方法绘制整个纯化过程曲线图谱。本专利技术利用实验室常用仪器一酶标仪，以蛋白A亲和柱纯化兔抗乙脑病毒多克隆抗体为例对每个洗脱组分在280nm波长下检测其吸收值，进而检测其IgG含量，并得到最终纯化组分曲线，替代自动检测器描述整个过程纯化。本专利技术给出的技术方案是:这种纯化抗体中制备纯化曲线的方法，其特征在于有以下步骤。A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化，选择纯化柱的体积是1ml。B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分，每个管内收集0.2ml流出组分。C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱，清洗5个柱体积(取最后I个柱体积的流出组分作为实验空白)。D)使用注射器注射Iml待纯化样品进入柱内，连续接收流出组分。C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱，连续接收流出组分。E)使用3个柱体积的Elution buffer洗脱柱,连续接收流出组分。F)每个收集管中取50 μ I分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡)；设定平衡柱的流出组分为空白。同时设定酶标仪波长280nm。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是。本专利技术在少量制备抗体时，可以代替实验室昂贵的纯化设备，用手动的方法直接绘制整个纯化过程曲线图谱，不必使用专用设备绘制纯化曲线。【专利附图】【附图说明】图1是亲和纯化抗体的曲线。【具体实施方式】下面结合附图和实施例对本专利技术给出的技术方案做出进一步说明。这种纯化抗体中制备纯化曲线的方法有以下步骤。A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化。选择纯化柱的体积是1ml。B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分，每个管内收集0.2ml流出组分。C)首先平衡柱:用Binding buffer清洗柱，清洗5个柱体积(取最后I个柱体积的流出组分作为实验空白)。D)使用注射器注射Iml待纯化样品进入柱内，连续接收流出组分。C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱，连续接收流出组分。E)使用3个柱体积的Elution buffer洗脱柱,连续接收流出组分。F)每个收集管中取50 μ I分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡)；设定平衡柱的流出组分为空白。同时设定酶标仪波长280nm。亲和纯化检测A280数据列表。I 篡輕mmm【权利要求】1.，其特征在于有以下步骤: A)对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化，选择纯化柱的体积是 Iml ； B)同时用多个0.5ml离心管接收流出组分，每个管内收集0.2ml流出组分； C)首先平衡柱:用Bindingbuffer清洗柱,清洗5个柱体积(取最后I个柱体积的流出组分作为实验空白)； D)使用注射器注射Iml待纯化样品进入柱内，连续接收流出组分； C)使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱，连续接收流出组分； E)使用3个柱体积的Elutionbuffer洗脱柱,连续接收流出组分； F)每个收集管中取50μ I分别加入384孔板中.(此板需适合紫外检测,加样时避免产生气泡)；设定平衡柱的流出组分为空白，同时设定酶标仪波长280nm。【文档编号】G01N21/33GK103926207SQ201310015275【公开日】2014年7月16日 申请日期:2013年1月16日 优先权日:2013年1月16日 【专利技术者】高旭哲, 张玥, 刘畅, 战辛 申请人:辽宁成大生物股份有限公司本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种纯化抗体中制备纯化曲线的方法，其特征在于有以下步骤：A）对经过饱和硫酸铵沉淀的兔抗乙脑病毒血清选用蛋白A柱纯化，选择纯化柱的体积是1ml；B）同时用多个0.5ml离心管接收流出组分，每个管内收集0.2ml流出组分；C）首先平衡柱：用Binding buffer清洗柱，清洗5个柱体积（取最后1个柱体积的流出组分作为实验空白）；D）使用注射器注射1ml待纯化样品进入柱内，连续接收流出组分；C）使用5个柱体积的Binding buffer清洗柱,连续接收流出组分；E）使用3个柱体积的Elution buffer 洗脱柱，连续接收流出组分；F）每个收集管中取50μl分别加入384孔板中.（此板需适合紫外检测，加样时避免产生气泡）；设定平衡柱的流出组分为空白，同时设定酶标仪波长280nm。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高旭哲，张玥，刘畅，战辛，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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