一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法技术

本申请涉及病毒疫苗的技术领域，具体公开了一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法


[0001]本申请涉及病毒疫苗的
，具体涉及一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法
。

技术介绍

[0002]甲型肝炎是由甲型肝炎病毒
(HAV)
引起的一种急性传染病
。
甲型肝炎在流行地区多见于6个月龄后幼儿，随着年龄增长，易感性逐渐下降，所以甲型肝炎在成人中较少见
。
甲肝的流行具有周期性发生和季节性高峰的特征
。
每年冬季前后是甲肝的高发季节，每5‑
10
年呈现自然循环的流行高峰
。
甲肝严重威胁人民身体健康，影响劳动生产
。
[0003]甲肝疫苗可保护高危和易感人群，有效控制甲肝疾病的流行
。
凡是对甲肝病毒易感者，年龄在1周岁以上的儿童
、
成人均应接种
。
高质量的甲肝疫苗研制可预防疾病降低副反应
。
[0004]目前，市场上的甲肝疫苗主要有甲肝灭活疫苗和减毒活疫苗两大类，这两种疫苗都是通过侵入人体，引起人体的免疫反应，从而使人体产生免疫记忆，来达到免疫的效果
。
由于制备原理的不同，上述两种疫苗在有效性和安全性上存在差异
。
相对于甲肝减毒活疫苗，甲肝灭活疫苗具有更好的稳定性
。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本申请提供一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法
。
[0006]本申请提供了一种甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：接种病毒
、
病毒收获
、
浓缩
、
纯化
、
灭活；所述病毒收获的步骤为：将病毒增殖高峰期的细胞置于
0.1
‑
0.5
质量浓度％的
Triton X
‑
100
的
EDTA
溶液，于
25
‑
37℃
的温度下裂解，弃去
Triton X
‑
100
的
EDTA
溶液后，加入
PBS
缓冲液浸泡，浸泡液经过均质处理后，得到病毒收获液
。
[0007]本申请通过
TritonX
‑
100
联合高压均质技术高压均质处理后得到甲肝病毒收获液，病毒收获液的病毒滴度
、
抗原含量和安全性较高，且病毒收获液中的
TritonX
‑
100
残留量较小，符合药典规定的表面活性剂残留量要求
。
[0008]本申请使用表面活性剂
TritonX
‑
100
温和裂解细胞后，能够有效获得细胞内的甲肝病毒颗粒并降低细胞碎片的粒径，有效满足高压均质制备甲肝疫苗中细胞碎片太大造成颗粒堵塞均质机腔体，同时降低高压均质负荷，可有效保护均质机，提高均质机的使用寿命
。
均质是使悬浮液体系中的分散物微粒化
、
均匀化的处理过程，这种处理同时起降低分散物尺度和提高分散物分布均匀性的作用
。
[0009]优选地，所述
Triton X
‑
100
的
EDTA
溶液的浓度为
0.2
‑
0.4
质量浓度％
。
[0010]优选地，所述裂解温度为
28
‑
33℃。
[0011]在一个具体的实施方案中，所述裂解温度可以为
25℃、28℃、30℃、33℃、37℃。
[0012]在一些具体的实施方案中，所述裂解温度还可以为
25
‑
28℃、25
‑
30℃、25
‑
33℃、
28
‑
30℃、28
‑
37℃、30
‑
33℃、30
‑
37℃、33
‑
37℃。
[0013]优选地，所述裂解时间为
180
‑
300s。
[0014]在一个具体的实施方案中，所述裂解时间可以为
180s、240s、300s。
[0015]在一些具体的实施方案中，所述裂解时间还可以为
180
‑
240s、240
‑
300s。
[0016]优选地，所述均质处理的具体步骤为：压力
200
‑
600bar、
温度
10
‑
30℃、
流速
300
‑
500ml/min、
均质次数2‑4次
。
[0017]优选地，所述均质处理的具体步骤为：压力
400
‑
600bar、
温度
17
‑
23℃、
流速
350
‑
450ml/min、
均质次数2‑4次
。
[0018]优选地，所述接种病毒的具体步骤为：将甲肝病毒
SYX1
株毒种按照
0.05
‑
1.00MOI
比例感染
MRC
‑5细胞，于
37
±
0.5℃
培养至细胞生长丰满单层后，培养期间更换病毒维持液，培养固定周期至病毒增殖高峰期
。
[0019]优选地，所述灭活步骤为：将纯化后的病毒液经滤膜过滤，加入甲醛，于
37
±
0.5℃
搅拌灭活
。
[0020]优选地，甲型肝炎灭活疫苗的制备方法还包括以下步骤：将灭活后的病毒原液稀释，加入氢氧化铝佐剂充分混合均匀后，室温条件下吸附
25
‑
35min
，即为疫苗产品
。
[0021]另一方面，本申请还提供了一种甲型肝炎灭活疫苗，利用上述所述的制备方法获得
。
[0022]综上所述，本申请的技术方案具有以下效果：本申请制备人二倍体甲肝疫苗属于甲肝灭活疫苗，生产所用毒株系公司科研人员自主分离且经过
MRC
‑5细胞适应性培养，可满足生产要求且明显缩短生产周期，大大降低生产成本；病毒收获采用表面活性剂
TritonX
‑
100
联合高压均质技术的方法，无需添加胰酶消化就能达到病毒收获的目的
。
[0023]相较于传统胰酶消化
、
添加核酸酶
、
氯仿抽提及
PEG
浓缩法，本申请提供的制备方法可减少动物源性物质
、
有机溶剂等物质添加
、
避免残留，同时降本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：接种病毒
、
病毒收获
、
浓缩
、
纯化
、
灭活；所述病毒收获的步骤为：将病毒增殖高峰期的细胞置于
0.1
‑
0.5
质量浓度
%
的
Triton X
‑
100
的 EDTA 溶液，于
25
‑
37℃
的温度下裂解，弃去
Triton X
‑
100
的 EDTA 溶液后，加入
PBS
缓冲液浸泡，浸泡液经过均质处理后，得到病毒收获液
。2.
根据权利要求1所述甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述
Triton X
‑
100 的
EDTA 溶液的浓度为
0.2
‑
0.4
质量浓度
%。3.
根据权利要求1所述甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述裂解温度为
28
‑
33℃。4.
根据权利要求1所述甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述裂解时间为
180
‑
300s。5.
根据权利要求1所述甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，其特征在于，所述均质处理的具体步骤为：压力
200
‑
600bar、
温度
10
‑
3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文腰，李芳芳，廖辉，焦龙，甄祖刚，顾开龙，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：