可生物降解的纳米复合疫苗、用于抑制乙型肝炎病毒复制和乙型肝炎病毒表面抗原分泌的方法技术

乙型肝炎病毒(HBV)疫苗包括以纳米复合物配制的HBV核心抗原(HBcAg)和/或HBV表面抗原(HBsAg)。纳米复合物含有壳聚糖和γ

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可生物降解的纳米复合疫苗、用于抑制乙型肝炎病毒复制和乙型肝炎病毒表面抗原分泌的方法


[0001]本专利技术涉及乙型肝炎病毒(HBV)疫苗，特别是涉及纳米复合疫苗。

技术介绍

[0002]即使在21世纪，乙型肝炎病毒(HBV)感染也是一个重要的公共卫生问题。人们通过接触受污染的体液(例如血液或精液)感染HBV。垂直感染、性传播和不安全的医疗行为是病毒传播的三大主要途径。血清学证据表明，已有20亿人被感染，超过3.5亿人为慢性感染病毒。世界卫生组织(WHO)还将病毒性肝炎纳入其主要公共卫生优先事项。急性HBV感染的结果取决于年龄。尽管大多数患者会从HBV感染中恢复，但进展为慢性感染的患者几乎终生都携带HBV。大约95％的婴儿、30％的1
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5岁儿童和不到5％的成人发展为慢性感染。慢性HBV感染会增加肝纤维化和肝细胞癌的风险。因此，HBV感染被公认为全球第十大死因。
[0003]人类中有8种主要的HBV基因型(A
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H)。基因型A和C流行于美国，基因型A流行于非洲。东亚的感染通常是基因型B和C，而南欧和印度的感染是基因型D。在这些HBV基因型中，C与肝纤维化的发展和肝细胞癌的风险增加有关。在HBV生命周期中，共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV DNA在肝细胞核内形成的结构。cccDNA可以稳定地存在于宿主细胞核中，作为病毒RNA转录的模板。此外，HBV DNA可以整合到宿主基因组中。
[0004]HBV蛋白被翻译以帮助复制周期。这些蛋白质中的一些被分泌到血液循环中并且可以被识别为血清学标志物。HBV表面抗原(HBsAg)和包膜抗原(HBeAg)是HBV当前或既往感染患者的两个主要生物标志物。急性HBV感染患者为HBeAg阳性(HBeAg+)，但在发展为慢性感染时转为阴性。使用针对HBc/e/sAg(即HBV核心、包膜或表面抗原)的特异性抗体(HBc/e/sAb)，可以清楚地确定感染的急性期或慢性期。所有HBV感染者都会产生HBcAb，大约80％的康复者(治愈感染)会产生HBsAb。HBsAg存在超过6个月被定义为慢性感染。具体来说，HBsAg
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HBsAb
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HBcAb
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HBVDNA
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患者为HBV感染者，HBsAg
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HBsAb
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HBcAb
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HBV DNA
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为康复者。大约80％的受感染成人发展为HBsAb(称为抗HBs血清转化)。接种过疫苗的人表示为HBsAg
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HBsAb
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HBcAb
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HBVDNA
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。
[0005]慢性HBV感染可分为4个阶段：HBeAg
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免疫耐受期、HBeAg
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免疫活性期、HBeAg
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无活性期和HBeAg
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免疫反应期。所有阶段均为HBsAg
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，用于区分这些阶段的其他血清学标志物取决于HBeAg和HBeAb、HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT；肝脏炎症的敏感标志物)水平和肝内坏死性炎症。HBeAg
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免疫耐受期的特点是HBeAb
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，DNA水平高，ALT正常，肝脏轻度炎症。ALT和肝脏炎症的增加意味着患者进入HBeAg阳性免疫活性期。此外，HBeAg丢失、HBeAb
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和DNA水平低代表HBeAg
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非活动期。这一阶段可能因先前的炎症而出现纤维化。一旦ALT和肝脏炎症升高，患者就进入HBeAg
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免疫反应期。总体而言，患者可以反复进入与宿主免疫相关的这些阶段。医学治疗通常遵循这些不同阶段的指标。
[0006]显然，慢性感染是由于宿主体内存在寄生的HBV。除了将病毒基因组整合到宿主基因组中外，病毒蛋白，尤其是HBsAg的免疫调节也起着重要作用。慢性HBV感染会产生大量仅
I511744中描述的纳米复合疫苗技术。简而言之，使用简单的电动力方法通过将带电聚合物溶液添加到另一种带相反电荷的聚合物溶液中而将HBcAg和/或HBsAg封装在纳米复合物中。在这些实施方式中，HBcAg和/或HBsAg是第一带电聚合物溶液中的包封免疫原。第一个带电聚合物溶液还含有带负电荷的聚
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γ
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谷氨酸(γ
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PGA)。γ
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PGA是可商购的(例如，MilliporeSigma Corporation，St.Louis，MO，U.S.A.)。任何合适的分子量范围的γ
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PGA都可以用于本专利技术的实施方式。在优选实施方式中，γ
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PGA具有约200kDa或更小的重均M.W.。第二带电聚合物溶液含有带正电荷的壳聚糖(CS)。壳聚糖可从许多商业来源获得。任何具有合适分子量范围和脱乙酰度的壳聚糖均可用于本专利技术的实施方式。在优选实施方式中，壳聚糖可具有约10
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100kDa的重均分子量(MW)。具有这种分子量的壳聚糖适合在保持蛋白质和肽药物生物活性的pH值下获得足够的溶解度。
[0013]本专利技术的实施方式可以使用任何合适浓度的抗原和纳米复合物组分。示例性浓度范围如下：在第一溶液中：HBc/sAg：2至0.5mg/ml和γ
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PGA：5
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20mg/ml，在第二溶液中：Cs：20至30mg/ml。纳米复合物(NC)可具有约+30mV至约+50mV的zeta电位和100nm至800nm的可调尺寸范围。这些带正电荷的HBc/s
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NC在预防和治疗HBV感染方面显示出不同寻常的治疗效果。
[0014]本专利技术的一个方面涉及HBV疫苗。根据本专利技术的一种实施方式的HBV疫苗包含配制在纳米复合物中的HBV核心抗原(HBcAg)和/或HBV表面抗原(HBc/sAg)。纳米复合物包含γ
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聚谷氨酸(γ
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PGA)和壳聚糖。通过将含有抗原蛋白的第一带电溶液与第二带电溶液混合来制备纳米复合物。各种组分的示例性浓度是：HBcAg和/或HBc/sAg在第一个带电溶液中约为2至0.5mg/ml并且γ
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PGA约为5
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20mg/ml，在第二带电溶液中壳聚糖约为20至30mg/ml。纳米复合物具有约+30mV至约+50mV的zeta电位。
[0015]本专利技术的另一方面涉及治疗或预防HBV感染的方法。根据本专利技术一种实施方式的方法包括向有需要的对象施用包含任何上述纳米复合疫苗的组合物。本领域技术人员会理解，“治疗中或处理中(treating)”或“治疗或处理(treatment)”是指减轻或消除症状，而在疫苗的上下文中“预防中(preventing)”或“预防(prevention)”是指诱导抗体形成或免疫反应，使得疾病状况不会发生或发生的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种乙型肝炎病毒(HBV)疫苗，包括：形成在纳米复合物中的HBV核心抗原(HBcAg)和/或HBV表面抗原(HBsAg)。2.如权利要求1所述的HBV疫苗，所述疫苗包含HBV核心抗原(HBcAg)和HBV表面抗原(HBsAg)。3.如权利要求1或2所述的HBV疫苗，所述纳米复合物包含γ
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聚谷氨酸(γ
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PGA)和壳聚糖。4.如权利要求1
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3中任一项所述的HBV疫苗，所述纳米复合物通过含有HBV核心抗原(HBcAg)和/或HBV表面抗原(HBsAg)和γ
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聚谷氨酸(γ
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PGA)的第一溶液制备，形成含有壳聚糖的第二溶液，并将第二溶液加入到第一溶液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文机，黄品谚，陈毓宏，吴彦纬，
申请(专利权)人：先知生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：