一对多肽及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一对多肽及其编码基因和应用，所述的一对多肽由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由17个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸。本发明专利技术可实现在细胞或个体水平上对猪A20基因进行准确敲除或修饰，以解析猪A20基因的功能、构建猪A20基因突变库或获得相关疾病模型，为猪育种及医药研发服务。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一对多肽及其编码基因和应用，所述的一对多肽由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由17个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸。本专利技术可实现在细胞或个体水平上对猪A20基因进行准确敲除或修饰，以解析猪A20基因的功能、构建猪A20基因突变库或获得相关疾病模型，为猪育种及医药研发服务。【专利说明】一对多肽及其编码基因和应用
本专利技术属于基因工程
，具体而言，涉及一对多肽及其编码基因与应用，尤其涉及一对特异识别猪A20基因的多肽及其编码基因和应用。
技术介绍
A20属于抗凋亡基因家族，除具有抗凋亡的作用外，它也是NF κ B信号通路一个重要的抑制因子。而且，相对于其它NFk B抑制因子而言，Α20具有其自身独特的优势，一方面可克服ΙκΒα促凋亡的缺点，另一方面也不存在P65RHD发挥功能的入核门槛(即P65RHD须进入核内方可发挥抑制作用)。人Α20目前已成功应用于异种供体用转基因猪制作(Oropeza et al.，2009)，其抗内皮细胞凋亡、抗炎症的作用在个体水平得到了验证。因此，A20基因可作为猪抗病育种及异种移植研究的一个重要候选基因。在细胞或个体水平上对猪A20基因进行敲除或修饰，可解析猪A20基因的功能，为猪育种及医药研发服务。转录激活子样效应因子核酸酶(transcriptionactivator-like effectornucleases,TALENs)技术是一个高效的基因打靶新工具。转录因子激活效应物家族中有一种蛋白(TALEs)能够识别、结合DNA。TALE与DNA序列特异性结合主要是由TAL结构内34个恒定氨基酸序列介导。将TALEs与Fokl核酸内切酶的切割域相连接，形成TALENs，从而可以实现对基因组DNA序列的精确修饰。TALENs是一种异源二聚体分子(两单位的TALEDNA结合结构域融合到一单位的催化性结构域)，能够切割两个相隔较近的序列，从而使得特异性增强。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一对特异识别猪A20基因的多肽及其编码基因和应用。本专利技术利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子(TALE)能够特异性地识别猪A20基因。本专利技术还利用这对转录激活子样效应因子构建获得的一对转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)，能够对猪A20基因进行准确、高效地靶向修饰。具体地，本专利技术的目的是这样实现的:一对特异识别猪A20基因的多肽(命名为特异多肽对)，由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由17个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽甲中的16个双连氨基酸依次如下:序列表的序列3自N末端第12-13位氨基酸残基、第46-47位氨基酸残基、第80-81位氨基酸残基、第114-115位氨基酸残基、第148-149位氨基酸残基、 第182-183位氨基酸残基、第216-217位氨基酸残基、第250-251位氨基酸残基、第284-285位氨基酸残基、第318-319位氨基酸残基、第352-353位氨基酸残基、第386-387位氨基酸残基、第420-421位氨基酸残基、第454-455位氨基酸残基、第488-489位氨基酸残基和第522-523位氨基酸残基；所述多肽乙中的17个双连氨基酸依次如下:序列表的序列4自N末端第12-13位氨基酸残基、第46-47位氨基酸残基、第80-81位氨基酸残基、第114-115位氨基酸残基、第148-149位氨基酸残基、第182-183位氨基酸残基、第216-217位氨基酸残基、第250-251位氨基酸残基、第284-285位氨基酸残基、第318-319位氨基酸残基、第352-353位氨基酸残基、第386-387位氨基酸残基、第420-421位氨基酸残基、第454-455位氨基酸残基、第488-489位氨基酸残基、第522-523位氨基酸残基和第556-557位氨基酸残基。所述多肽甲的氨基酸序列具体可如序列表的序列2所示。所述多肽乙的氨基酸序列具体可如序列表的序列4所示。 本专利技术还保护一对DNA分子(命名为特异DNA分子对)，由编码所述多肽甲的DNA分子甲和编码所述多肽乙的DNA分子乙组成。所述DNA分子甲中，编码所述多肽甲的16个双连氨基酸的核苷酸依次如下:序列表的序列I自5’末端第34-39位核苷酸、第136-141位核苷酸、第238-243位核苷酸、第340-345位核苷酸、第442-447位核苷酸、第544-549位核苷酸、第646-651位核苷酸、第748-753位核苷酸、第850-855位核苷酸、第952-957位核苷酸、第1054-1059位核苷酸、第1156-1161位核苷酸、第1258-1263位核苷酸、第1360-1365位核苷酸、第1462-1467位核苷酸和第1564-1569位核苷酸。所述DNA分子乙中，编码所述多肽乙的17个双连氨基酸的核苷酸依次如下:序列表的序列3自5’末端第34-39位核苷酸、第136-141位核苷酸、第238-243位核苷酸、第340-345位核苷酸、第442-447位核苷酸、第544-549位核苷酸、第646-651位核苷酸、第748-753位核苷酸、第850-855位核苷酸、第952-957位核苷酸、第1054-1059位核苷酸、第1156-1161位核苷酸、第1258-1263位核苷酸、第1360-1365位核苷酸、第1462-1467位核苷酸、第1564-1569位核 苷酸和第1666-1671位核苷酸。所述DNA分子甲的核苷酸序列具体可如序列表中的序列I所示。所述DNA分子乙的核苷酸序列具体可如序列表中的序列3所示。本专利技术还保护所述特异多肽对在特异识别和靶向修饰猪A20基因中的应用。所述猪 A20 基因，其 NCBI Genne ID 为 392583951。本专利技术还保护所述特异多肽对在构建猪A20基因突变库中的应用。所述猪A20基因，其 NCBI Gene ID 为 392583951。与现有技术相比，本专利技术提供了特异识别猪A20基因的多肽对，并提供了该多肽对的编码基因。本专利技术可实现在细胞或个体水平上对猪A20基因进行准确敲除或修饰，以解析猪A20基因的功能、构建猪A20基因突变库或获得相关疾病模型，为猪育种及医药研发服务。【专利附图】【附图说明】图1为TALENs祀点设计结果示意图。图2为TALEN质粒对(左臂TALEN和右臂TALEN)转染猪PEF细胞60小时后提取DNA进行PCR扩增，将PCR产物克隆后的部分测序结果(突变序列)。 图3为TALEN质粒对的工作原理示意图。【具体实施方式】以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。以下实施例中，如无特殊说明，均采用低糖DMEM培养基培养细胞。FastTALE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一对多肽，由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽乙由17个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有一个双连氨基酸；所述多肽甲中的16个双连氨基酸依次如下：序列表的序列3自N末端第12‑13位氨基酸残基、第46‑47位氨基酸残基、第80‑81位氨基酸残基、第114‑115位氨基酸残基、第148‑149位氨基酸残基、第182‑183位氨基酸残基、第216‑217位氨基酸残基、第250‑251位氨基酸残基、第284‑285位氨基酸残基、第318‑319位氨基酸残基、第352‑353位氨基酸残基、第386‑387位氨基酸残基、第420‑421位氨基酸残基、第454‑455位氨基酸残基、第488‑489位氨基酸残基和第522‑523位氨基酸残基；所述多肽乙中的17个双连氨基酸依次如下：序列表的序列4自N末端第12‑13位氨基酸残基、第46‑47位氨基酸残基、第80‑81位氨基酸残基、第114‑115位氨基酸残基、第148‑149位氨基酸残基、第182‑183位氨基酸残基、第216‑217位氨基酸残基、第250‑251位氨基酸残基、第284‑285位氨基酸残基、第318‑319位氨基酸残基、第352‑353位氨基酸残基、第386‑387位氨基酸残基、第420‑421位氨基酸残基、第454‑455位氨基酸残基、第488‑489位氨基酸残基、第522‑523位氨基酸残基和第556‑557位氨基酸残基。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵金山，李和刚，张宝珣，李培培，江科，孙友德，戴正浩，杨培培，刘萌萌，曲明祥，
申请(专利权)人：青岛市畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37