本发明专利技术公开了一种胰高血糖素样肽－１突变体多肽及其制备方法、药物组合物和其应用，所述突变多肽由胰高血糖素样肽－１突变体Ｎ末端添加含有Ｃｙｓ的延长多肽而成，并且所述突变多肽自身折叠成二硫键，所述胰高血糖素样肽－１突变多肽用于制备治疗糖尿病、治疗和／或预防肥胖症的药物组合物。针对临床上ＧＬＰ－１类似物在体内存留时间较短，需要每天注射给药的缺限，提供一种半衰期较长的ＧＬＰ－１突变体多肽，该ＧＬＰ－１突变体多肽半衰期较长，不需要每天给患者注射，能够有效地提高患者的依从态度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种糖尿病相关的药物领域，具体而言，本专利技术涉及一种延长的胰高血糖素样肽-1的体内半衰期的胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法、药物组合物和其应用。
技术介绍
糖尿病是一种遗传因素和多种环境因素相关联的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合症。由于糖尿病还伴随着诸多并发症，现已成为仅次于恶性肿瘤和心血管疾病之后的第三大健康杀手。1984年，胰高血糖素样肽-KGlucagon-like ρ印tide-l，GLP-l)被发现，它是一种具有30个氨基酸的肠降血糖素，具有促进胰岛素分泌和生物合成，抑制胰高血糖素的分泌，促进胰岛细胞增殖，抑制胰岛细胞凋亡，保存细胞对血糖的敏感性等多种生理功能。GLP-I与其受体结合后能够增加细胞内cAMP浓度并激活蛋白激酶A(PKA)，通过 cAMP/PKA激酶通路增强细胞内胰岛素基因的转录和翻译，并提高对葡萄糖刺激信号的敏感性，从而增加胰岛素分泌量。GLP-I还通过与细胞上的胰高血糖素样肽-1受体(GLP-IR)作用抑制胰高血糖素的分泌，或者间接通过促进胰岛素和生长抑素的分泌来抑制胰高血糖素的分泌。GLP-I作为降血糖药物受到限制的主要原因是GLP-I在体内能够迅速的被二肽基肽酶-IV(DPP-IV)所降解而失去活性。肠促胰岛素类似物(Exendin-4)是一条39个氨基酸组成的直链多肽，最初由南美巨蜥的唾液分离获得。它与人源GLP-I序列有53%的同源性。Exendin-4同样能够和GLP-I 受体结合，产生促进胰岛素分泌等生理作用，且Exendin-4的N端第二个氨基酸为甘氨酸， 能够耐受血浆中DPP-IV的分解，故Exendin-4被吸收入血后的半衰期较长(tl/2 = 2.4小时)；C端比GLP-I多9个氨基酸，结构上形成了“色氨酸笼” ("Trp-cage")，能够和GLP-I 受体更紧密的结合。由于GLP-I为人源多肽，没有Exendin-4的免疫源性问题，根据其设计的GLP-I类似物在临床试验中副作用较为轻微，已成为设计用于治疗2型糖尿病的GLP-I受体激动剂的理想原型，开发潜力巨大。2010年，诺和诺德公司以GLP-I为原型设计的Liraglutide (中文名利拉鲁肽，商品名Victoza )在美国上市，因其良好的临床效果、较低的副作用以及更好的患者依从度(一天注射一次)赢得了广泛关注，从而掀起了 GLP-I受体激动剂的开发热潮。虽然现在上市的Liraglutide等GLP-1受体激动剂延长了半衰期，但仍需患者每天注射药物，在药物使用舒适度上仍有改进空间。因此有必要进一步提高GLP-I类多肽药物的体内半衰期，提高患者依从度。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种提衰期较长的胰高血糖素样肽-1突变体多肽。本专利技术的另一个目的是提供上述多肽的制备方法，此外，还提供上述多肽在制备治疗糖尿病和肥胖症的药物中的应用。本专利技术的又一个目的是提供一种以GLP-I突变体多肽作为有效成分的药物组合物。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是一种胰高血糖素样肽-1突变体多肽，所述胰高血糖素样肽-1突变体多肽是在SEQ ID NO 1序列多肽的N端加入能形成二硫键的延长多肽形成的突变体，所述的突变体的结构通式如下X1 (ni) -C-X2 (n2) -C-X3 (n3) SEQ ID NO 1其中上述序列氨基酸残基&指代甘氨酸(Glycine)，丙氨酸(Alanine)，缬氨酸 (Valine)，亮氨酸(Leucine)或异亮氨酸(Isoleucine), H1指代上述X1氨基酸的数目，Ii1 = 1 5 ；上述序列氨基酸残基&指代甘氨酸(Glycine)，丙氨酸(Alanine)，缬氨酸 (Valine)，亮氨酸(Leucine)或异亮氨酸(Isoleucine)，n2指代上述&氨基酸的数目，n2 = 1 5 ；上述序列氨基酸残基&指代甘氨酸(Glycine)，丙氨酸(Alanine)，缬氨酸 (Valine)，亮氨酸(Leucine)或异亮氨酸(Isoleucine)，n3指代上述&氨基酸的数目，n2 = 1 5 ；所述的胰高血糖素样肽-1突变体，多肽内的两个半胱氨酸形成二硫键。所述的胰高血糖素样肽-1突变体多肽选自SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3、SEQ ID N04、SEQ ID NO 5、SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8 或 SEQ ID NO 9 中的任一种。一种上述的胰高血糖素样肽-1突变体多肽的制备方法，该方法包括胰高血糖素样肽-1突变多肽经多肽合成仪固相制备后，加入50-100mM的二硫基苏糖醇DTT或β -巯基乙醇进行变性，而后于4 °C缓慢氧化或通入氧气形成二硫键。一种药物组合物，所述的组合物含有上述的胰高血糖素样肽-1突变体多肽。还含有含一种或多种药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体选自水溶性填充剂、PH调节剂、稳定剂、注射用水或渗透压调节剂。所述水溶性填充剂选自以下的一种或几种甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖或半乳糖；所述pH调节剂为生理可接受的酸、碱和/或盐；所述稳定剂为选自以下的一种或几种EDTA_2Na、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、碳酸钠、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸钠或三羟甲基氨基甲烷；所述渗透压调节剂选自氯化钠和/或氯化钾。所述pH调节剂选自以下的一种或几种非挥发性酸枸橼酸、磷酸、乳酸、酒石酸或盐酸；碱氢氧化钾、氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铵；盐碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵盐、碳酸氢钠、碳酸氢钾或碳酸氢铵盐；所述药物组合物为注射剂。所述注射剂为冻干粉针或溶液注射剂。所述的胰高血糖素样肽-1突变体多肽用于治疗和/或预防糖尿病和/或肥胖症的药物组合物中的应用。本专利技术的有益效果是针对临床上GLP-I类似物在体内存留时间较短，需要每天注射给药的缺限，提供一种半衰期较长的GLP-I突变体多肽，该GLP-I突变体多肽半衰期较长，不需要每天给患者注射，能够有效地提高患者的依从态度。附图说明图1本专利技术所述的GLP-I突变多肽在小鼠体内的降血糖功能实验的结果示意图。 具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细说明本专利技术提供一种胰高血糖素样肽-1突变体多肽，本专利技术中涉及的突变体的结构通式如下X1 (ni) -C-X2 (n2) -C-X3 (n3) SEQ ID NO 1即 \ (ni) -C-X2 (n2) -C-X3 (n3) 7HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAffLVKGRG36其中，上述序列氨基酸残基&指代甘氨酸(Glycine)，丙氨酸(Alanine)，缬氨酸 (Valine)，亮氨酸(Leucine)或异亮氨酸(Isoleucine)0 Ii1指代上述&氨基酸的数目，H1 =1 5。上述序列氨基酸残基&指代甘氨酸(Glycine)，丙氨酸(Alanine)，缬氨酸 (Valine)，亮氨酸(Leucine)或异亮氨酸(Isoleucine)0 n2指代上述&氨基酸的数目，n2 =本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种胰高血糖素样肽－１突变体多肽，其特征在于，所述胰高血糖素样肽－１突变体多肽是在ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ １序列多肽的Ｎ端加入能形成二硫键的延长多肽形成的突变体，所述的突变体的结构通式如下：Ｘ１（ｎ１）－Ｃ－Ｘ２（ｎ２）－Ｃ－Ｘ３（ｎ３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ １其中：上述序列氨基酸残基Ｘ１指代甘氨酸（Ｇｌｙｃ ｉｎｅ），丙氨酸（Ａｌａｎｉｎｅ），缬氨酸（Ｖａｌｉｎｅ），亮氨酸（Ｌｅｕｃｉｎｅ）或异亮氨酸（Ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ），ｎ１指代上述Ｘ１氨基酸的数目，ｎ１＝１～５；上述序列氨基酸残基Ｘ２指代甘氨酸（Ｇｌｙｃ ｉｎｅ），丙氨酸（Ａｌａｎｉｎｅ），缬氨酸（Ｖａｌｉｎｅ），亮氨酸（Ｌｅｕｃｉｎｅ）或异亮氨酸（Ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ），ｎ２指代上述Ｘ２氨基酸的数目，ｎ２＝１～５；上述序列氨基酸残基Ｘ３指代甘氨酸（Ｇｌｙｃ ｉｎｅ），丙氨酸（Ａｌａｎｉｎｅ），缬氨酸（Ｖａｌｉｎｅ），亮氨酸（Ｌｅｕｃｉｎｅ）或异亮氨酸（Ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ），ｎ３指代上述Ｘ３氨基酸的数目，ｎ２＝１～５；所述的胰高血糖素样肽－１突变体，多肽内的两个半胱氨酸形成二硫键。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李瑛，
申请(专利权)人：天津拓飞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：12
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