一种大豆多功能降糖肽的制备方法技术

为了扩大大豆的应用范围，提升其药食两用价值，本发明专利技术记载了一种大豆多功能降糖肽的制备方法，包括以下步骤：将大豆除杂并磨粉，并提取大豆分离蛋白；将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2‑5％(w/v)的溶液，搅拌均匀，沸水浴保温10‑15min，冷却至室温；并调节溶液pH和温度至蛋白水解酶的最适pH和最适温度，加入蛋白水解酶使E/S为6000U/g。在蛋白质水解过程中，滴加NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至反应到终点，并记录消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8‑20min灭酶后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。本发明专利技术属于多肽制备领域，具有降低血糖和降血压的作用和抗氧化活性。

【技术实现步骤摘要】
一种大豆多功能降糖肽的制备方法
本专利技术属于多肽制备领域，具体而言，涉及一种大豆多功能降糖肽的制备方法。
技术介绍
糖尿病被称为健康杀手，对人体造成很大的威胁。目前对糖尿病只能治疗，未能治愈，糖尿病患者长期高血糖会引起一系列并发症，慢性心血管疾病、慢性肾衰竭及视网膜损伤等而丧失生命。据统计73.6％糖尿病患者患有高血压病症，且机体的氧化对糖尿病患者病情的恶化起到了促进作用。研究表明，通过抑制体内产生的促进葡萄糖吸收的酶(α-葡萄糖苷酶和DPP-IV酶)，可间接阻止葡萄糖进入血液循环而引起高血糖。酶的抑制源于生物反应，因而目标聚集在天然动植物蛋白中的生物活肽，这种小肽相比于原蛋白质具有多种生物活性，无复杂空间结构，理化性质稳定，且分子链段小，易于人体吸收，为治疗糖尿病提供了安全、有效的新途径。相比于成本价格高昂，有严重副作用或毒性的合成试剂，探索天然和安全的抗糖尿病药物才是治疗Ⅱ型糖尿病的有效途径之一。生物体内存在着种类繁多的能够调节机体正常生命活动或者具有一些较为特殊的生理活性的肽段，选用恰当的蛋白酶对其水解，一些存在于蛋白质长链中的未处于活性状态的生物活性肽就会得以释放。活性肽分子量偏小且化学结构特别，可以与某些引发重要疾病的调节酶的活性位点内的氨基酸作用，产生抑制效果。例如抑制α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶、抑制血管紧张素转换酶(ACE)、抑制二肽基肽酶IV(DPP-IV)。我国是大豆的故乡，已有5000年的种植历史，大豆中富含蛋白质，含量高达40％，还含有卵磷脂等促进脑部发育的有效成分，具有极高的营养价值和应用价值。水解大豆得到的活性肽所含必需氨基酸与大豆蛋白质完全一致，且含量丰富，更适于人体的消化吸收机制；对比大豆蛋白质，活性肽各种理化及生理性质优势更为突出；但目前存在对大豆提取物化学成分研究相对单一、制备过程复杂、产物溶解性低的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种大豆多功能降糖肽的制备方法。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种大豆多功能降糖肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，利用大豆粉提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2-5％(w/v，质量/体积)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10-15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值和温度至蛋白水解酶的最适pH值和最适温度，加入一定量的蛋白水解酶，使E/S为6000U/g；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反应终点，并记录不同时刻消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8-20min灭酶，后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。进一步的，在步骤一中，大豆分离蛋白的提取方法采用碱提酸沉法。优选的，在步骤二中，所述蛋白水解酶为碱性蛋白酶，所述碱性蛋白酶的最适pH值为9.0-11.0，最适温度为40-60℃，酶解时间为6-10h。优选的，在步骤二中，所述蛋白水解酶为胰蛋白酶，所述胰蛋白酶的最适pH值为6.0-8.0，最适温度为40-60℃，酶解时间为6-10h。优选的，在步骤二中，所述蛋白水解酶为木瓜蛋白酶，所述木瓜蛋白酶的最适pH值6.0-9.0，最适温度为50-70℃，酶解时间为6-10h。进一步的，在步骤四中，所述NaOH溶液的浓度为0.5mol/L。进一步的，所述大豆多功能降糖肽具有α-葡萄糖苷酶和二肽基肽酶IV抑制活性，以及血管紧张素转换酶的抑制活性，在降低血糖的同时，还具有降压的作用和抗氧化活性。本专利技术相对于现有技术的有益效果是：本专利技术记载了一种简便可行的大豆多功能降糖肽的制备方法，其制备工艺单纯，操作条件温和，最大程度的保留了大豆降糖肽的降糖活性，保证了产品的安全性；本专利技术的制备过程操作简便，成本低，适合工业化生产。本专利技术制备的大豆多功能降糖肽具有较高的安全性、同时具有降压及抗氧化活性以及良好的胃肠稳定性和良好的降糖活性，可以作为天然降糖药物及保健品，很好的用于药品及食品行业；极大的丰富了大豆有效成分的研究范围，提升了其药食两用价值。附图说明图1为大豆多功能降糖肽的浓度对α-葡萄糖苷酶抑制率的影响图；图2为不同浓度大豆多功能降糖肽自由基捕获能力图和总还原能力图；图3为大豆多功能降糖肽在不同的消化过程中对降血糖活性酶的抑制率影响图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术做详细的介绍。具体实施方式一：本实施方式披露了一种大豆多功能降糖肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，采用碱提酸沉法提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2-5％(w/v，质量/体积)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10-15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值为9.0-11.0，温度为40-60℃，加入一定量的碱性蛋白酶，使E/S为6000U/g，酶解时间为6-10h；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加0.5mol/L的NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反应终点，并记录不同时刻消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8-20min灭酶，后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。具体实施方式二：本实施方式披露了一种大豆多功能降糖肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，采用碱提酸沉法提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2-5％(w/v，质量/体积)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10-15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值为6.0-8.0，温度为40-60℃，加入一定量的胰蛋白酶，使E/S为6000U/g，酶解时间为6-10h；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加0.5mol/L的NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反应终点，并记录不同时刻消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8-20min灭酶，后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。具体实施方式三：本实施方式披露了一种大豆多功能降糖肽的制备方法，包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，采用碱提酸沉法提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2-5％(w/v，质量/体积)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10-15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值为6.0-9.0，温度为50-70℃，加入一定量的木瓜蛋白酶，使E/S为6000U/g，酶解时间为6-10h；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加0.5mol/L的NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大豆多功能降糖肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，利用大豆粉提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2‑5％(w/v)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10‑15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值和温度至蛋白水解酶的最适pH值和最适温度，加入一定量的蛋白水解酶，使E/S为6000U/g；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反应终点，并记录不同时刻消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8‑20min灭酶，后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。

【技术特征摘要】
1.一种大豆多功能降糖肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：将大豆除杂并磨粉，得到大豆粉，利用大豆粉提取大豆分离蛋白；步骤二：将大豆分离蛋白用去离子水配制成浓度为2-5％(w/v)的溶液，充分搅拌均匀后，沸水浴保温10-15min，冷却至室温，得到大豆分离蛋白溶液；步骤三：调节大豆分离蛋白溶液的pH值和温度至蛋白水解酶的最适pH值和最适温度，加入一定量的蛋白水解酶，使E/S为6000U/g；步骤四：在蛋白质水解过程中，分别在反应的不同时刻，向反应体系中滴加NaOH溶液，维持pH值恒定在初始pH值处，直至pH恒定，即达到反应终点，并记录不同时刻消耗的NaOH的体积，计算蛋白质的水解度；水解度达到平稳后，迅速将反应体系置于沸水中加热8-20min灭酶，后冷却至室温，离心收集上清液，冷冻干燥得到大豆多功能降糖肽。2.根据权利要求1所述的一种大豆多功能降糖肽的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王荣春，董宇婷，张英春，程翠林，何胜华，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23