一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX‑ALL1，于2017年10月25日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2017232。该细胞株为原代建株的人急性B淋巴细胞白血病细胞株，是具高致瘤性的人急性B淋巴细胞白血病细胞株。该细胞株为复发难治人急性淋巴细胞白血病的研究和生物医药研发提供新的细胞模型，可用于建立人源化急性淋巴细胞白血病动物模型、急性淋巴细胞白血病发生机制及复发难治机制研究平台、急性淋巴细胞白血病新药研发和筛选平台和急性淋巴细胞白血病免疫学及微生物学研究平台等。在探索人急性淋巴细胞白血病发病机制、复发难治机制和药物研发应用中有广阔的前景和较大的实用价值。

Human acute B lymphoblastic leukemia cell line and its application

The invention provides a human acute B lymphoblastic leukemia cell line HXEX ALL1, which was preserved in the Chinese typical culture preservation center in October 25, 2017, and the preservation number is CCTCC NO:C2017232. The cell line is a primary human acute B lymphoblastic leukemia cell line. It is a human acute B lymphoblastic leukemia cell line with high tumorigenicity. The cell line provides a new cell model for the research of relapsed and refractory human acute lymphoblastic leukemia and the research and development of biological medicine. It can be used to establish the animal model of humanized acute lymphoblastic leukemia, the mechanism of acute lymphoblastic leukemia and the research platform for the mechanism of relapse refractory, and the development and development of new drugs for acute lymphoblastic leukemia. Screening platform and immunology and microbiology research platform for acute lymphoblastic leukemia. It has broad prospects and practical value in exploring the pathogenesis, relapse and refractory mechanism and drug research and application of human acute lymphoblastic leukemia.

【技术实现步骤摘要】
一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株及其应用
本专利技术属于微生物动物细胞系领域，特别涉及一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株及其应用。
技术介绍
急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia,ALL）是一组源于B系或T系淋巴前体细胞或淋巴母细胞的恶性克隆性疾病，是儿童期最常见的恶性肿瘤，严重威胁儿童健康，甚至生命。近年来，儿童急性淋巴细胞白血病的发病呈上升趋势。急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）约占儿童ALL的85%。虽然，近50年，儿童急性淋巴细胞白血病的预后取得了飞跃式的进展，5年生存率从1960s的10%提高到90%，5年无事件生存率超过80%，但仍有10～20%的患者难治、复发，预后差，且5年后仍有患者因急性淋巴细胞白血病复发或第二肿瘤而死亡，而白血病复发难治的机制尚不清楚。因此，难治复发白血病的治疗是目前临床关注的重点。白血病细胞株在白血病的基础和临床研究中具有重要作用。源于患者的永生化白血病细胞株可以长期保存、稳定增殖，供世界各国研究者使用，采用细胞株可进行体外分子免疫、分子遗传学研究并构建动物模型进行体内研究，能深入探索白血病发生、发展和转归的机制，辅助临床早期诊断、治疗并进行药物筛选，有重要的临床和研究价值。目前，国际通用的白血病和淋巴瘤细胞株有637株，源自中国的仅4株。需要更多的能用于急性B淋巴细胞白血病相关研究的细胞株。
技术实现思路
本专利技术旨在为急性B淋巴细胞白血病的相关研究提供一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX-ALL1，于2017年10月25日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：C2017232。该细胞株为原代建株的人急性B淋巴细胞白血病细胞株，该细胞株的原代细胞分离自一位急性B淋巴细胞白血病的6岁男性患儿（就诊于四川大学华西第二医院儿童血液肿瘤科），二次复发时的骨髓单个核细胞，体外接种后，通过条件培养，筛选扩增得到，形态比较均一、悬浮生长，在体外稳定无限传代，与患者白血病细胞同一来源，具高致瘤性的人急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX-ALL1。该急性B淋巴细胞白血病细胞株可用于建立人源化急性B淋巴细胞白血病动物模型。急性B淋巴细胞白血病细胞株在筛选或评估治疗急性B淋巴细胞白血病药物中的应用。在急性B淋巴细胞白血病发生机制研究中的应用。复发难治急性淋巴细胞白血病发生机制研究中的应用。在建立急性淋巴细胞白血病免疫学及微生物学研究平台中的应用。该细胞株具有以下生物学特性：经STR检测和细胞免疫表型分析，其结果如下表1和表2所示，通过表1和表2结果证实：HXEX-ALL1细胞与患者白血病细胞为同一来源，免疫分型为Pro-B。表1患者骨髓HXEX-ALL1AmelogeninX，YX，YCSF1PO11，1311，13D13S31711，1111，11D16S53910，1110，11D5S8187，107，10D7S82010，1210，12TH019，99，9TPOX8，98，9vWA16，1716，17PentaE5，195，19PentaD9，119，11D2S44111，11.311，11.3D2S133818，2418，24D3S135815，1515，15D6S104312，1912，19D8S117913，1513，15D10S124813，1413，14D12S39118，2018，20D18S5113，2313，23D19S43314，1514，15D21S1129，3329，33FGA24，2624，26表2：抗原（CD）患者初诊HXEX-ALL1B系标记CD10阳性阳性CD19阳性阳性CD20阴性阴性CD22阳性阳性cCD79a阳性阳性cIgM阴性阴性sIgM阴性阴性T系标记CD2阴性阴性CD3阴性阴性CD5阳性阳性CD7阴性阴性cCD3阴性阴性髓系标记CD13阴性阴性CD33阴性阴性CD117阴性阴性其他CD34部分阳性阴性HLA-DR阳性阳性HXEX-ALL1细胞在RPMI1640完全培养基中悬浮生长，可形成集落，轻吹散开，多数细胞呈单细胞生长，圆形，形态比较均一，体外培养生长良好，按5×105/ml密度接种，2～3天传代一次，已经体外连续培养超过8个月，传代超过90代，群体倍增超过180代，连续传代过程中细胞形态比较均一、增殖动力学稳定、遗传学特征稳定，状态良好；经液氮或超低温冻存、复苏后性状不变，为一株永生化细胞株。采用MTT和台盼蓝染色细胞计数法绘制HXEX-ALL1细胞的生长曲线，计算细胞倍增时间为26～32小时，增殖速率稳定，可见分裂相，分裂后细胞仍呈圆形、悬浮生长；证实细胞株具有增殖动力学稳定性。采用PI染色法证实，HXEX-ALL1具有细胞周期稳定性，多次检测细胞免疫分型证实细胞具有免疫学稳定性。采用甲基纤维素半固体培养实验证实HXEX-ALL1细胞株具有高半固体克隆形成能力。HXEX-ALL1细胞全基因组测序显示，在HXEX-ALL1细胞标本发现3,357,771个单核苷酸多态性，847,741个插入缺失，3,093个拷贝数变异，6,896个结构变异；全基因组测序证实HXEX-ALL1细胞与患者白血病细胞为同一克隆来源，具有del(9)(p22)遗传学异常。本专利技术可应用于建立人源化急性B淋巴细胞白血病动物模型：细胞株HXEX-ALL1具有高致瘤性，将HXEX-ALL1细胞接种NOD/SCID小鼠，接种NOD/SCID小鼠后5天即可在皮下触及肿块，11天后肿块迅速生长，致瘤率100%，且成瘤细胞与体外培养的HXEX-ALL1细胞来源一致。本专利技术可应用于筛选或评估治疗急性B淋巴细胞白血病药物，通过向HXEX-ALL1细胞培养基中添加不同化疗药物，观察细胞生长增殖、死亡、周期等改变，获得初步有效的候选药物，再将候选药物用于上述急性B淋巴细胞白血病动物模型，检测药物的体内作用，观察动物的一般情况、存活时间、肿瘤大小改变以及药物作用后机体内凋亡、坏死及其它相关信号通路的改变等情况，从而对候选药物进行疗效评估和机制分析。本专利技术可应用于急性B淋巴细胞白血病发生机制研究，采用蛋白组学、全基因组学以及代谢组学的方法对HXEX-ALL1细胞进行分析，试图寻找特异的致病基因、蛋白或代谢物质，从而深入探讨白血病发病机制。本专利技术可应用于复发难治急性淋巴细胞白血病发生机制研究，HXEX-ALL1细胞源于一名男性急性B淋巴细胞白血病患儿第二次复发的骨髓白血病细胞，该患儿初诊时危险度分级为低危，可采用蛋白组学和全基因组学方法对HXEX-ALL1细胞和患儿初诊时的白血病细胞进行分析，比较其差异蛋白和基因的表达，探索其复发、难治的发生机制。本专利技术可应用于建立急性淋巴细胞白血病免疫学研究平台，将NK细胞、CAR-T或者其它免疫抗体、配体等应用于HXEX-ALL1细胞及其人源化动物模型，探讨免疫治疗对白血病细胞生长、机体免疫和白血病发展和转归的影响。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种中国汉族儿童急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX-ALL1。该细胞株的建立丰富了血液肿瘤细胞系的种类，尤其是中国汉族来源细胞系的种类，为复发难治人急性淋巴细胞白血病的研究和生物医药研发提供新的细胞模型，可用于建立人源化急性淋巴细胞白血病动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株，其细胞名称是人急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX‑ALL1，保藏编号为：CCTCC NO：C2017232。

【技术特征摘要】
1.一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株，其细胞名称是人急性B淋巴细胞白血病细胞株HXEX-ALL1，保藏编号为：CCTCCNO：C2017232。2.根据权利要求1所述的一种人急性B淋巴细胞白血病细胞株，其特征在于：所述细胞株为高致瘤性中国汉族儿童急性B淋巴细胞白血病细胞株。3.权利要求1所述的人急性B淋巴细胞白血病细胞株在建立人源化急性B淋巴细胞白血病动物模型中的应用。4.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾玲，朱易萍，张鸽，杨荣，张研乐，孙舒雯，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：四川,51