急性淋巴细胞白血病小鼠模型及建模方法技术

本发明专利技术提供了一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型及建模方法，涉及生物技术领域，制备方法如下：利用带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染经IL－7刺激的造血细胞；并将刺激后的造血细胞回输同系小鼠。具有建模过程简单易行、一步建立ph+ALL小鼠模型的优点。本发明专利技术提供的一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型将其分选出的BCR－ABL+B细胞二次回输同系小鼠无需照射处理，且表现与首次发病小鼠一致，模型稳定性良好，且具有提高受鼠的均一性，减少照射引起的受鼠意外死亡等风险。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型及建模方法。
技术介绍
急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种起源于淋巴细胞的B系或T系细胞在骨髓内异常增生的恶性肿瘤性疾病。异常增生的原始细胞可在骨髓聚集并抑制正常造血功能，同时也可侵及骨髓外的组织，如脑膜、淋巴结、性腺、肝等。我国曾进行过白血病发病情况调查，ALL发病率约为0.67/10万。在油田、污染区发病率明显高于全国发病率。ALL儿童期(0～9岁)为发病高峰，可占儿童白血病的70％以上。ALL在成人中占成人白血病的20％左右。ALL与其他白血病一样，白血病细胞的发生和发展起源在造血祖细胞或干细胞。目前，对于其病因及发病机制尚未完全清楚，但与一些危险因素有关：大约5％ALL与遗传因素相关，特别是一些有遗传倾向综合征的患者白血病发病率增高；电离照射作为人类白血病诱因之一已被肯定，但机制未明，特别在遭受核照射后的人群ALL发病明显增多。化学物质如苯及苯同类物、烷化剂被认为与人类白血病密切相关；所有ALL细胞都有获得性基因改变，包括染色体数目和结构易位、倒位、缺失、点突变及重复等变化。Ph染色体作为ALL最常见的染色体异常，已经成为ALL预后不良的标志。近年来随着酪氨酸激酶抑制剂的广泛应用，Ph染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)的疗效已经得到了明显改善，但复发仍然是Ph+ALL治疗失败的主要原因，严重影响患者的长期生存。因此，积极探索抗Ph+ALL白血病干细胞、研发新型药物以及生物靶向治疗对治疗Ph+ALL具有重要意义，也将会使更多的Ph+ALL患者受益。动物模型由于能够克服人体试验所导致的社会伦理道德和技术因素的制约，已经成为人类白血病发病机制研究以及新药研发和疗效评价的重要工具。小鼠在遗传学与造血系统等方面和人类十分相似，建立小鼠白血病模型以研究人类白血病的细胞分子生物学特性、生化免疫特征、病理生理改变、发病机制以及药物治疗和预后具有重要意义。因此，建立稳定均一的急性淋巴细胞白血病小鼠模型，是对白血病进行体内功能性研究的基础与关键。目前采用的急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法为将含有BCR－ABLp190融合基因的逆转录病毒感染经干细胞因子(SCF)、促血小板生成素(TPO)培养的造血干细胞，然后将其回输给同系小鼠，首次建模成慢性粒细胞性白血病(CML)表现，再通过分选CD19+细胞输注经7.5Gy的60Co照射后的同系小鼠，成立ph+ALL小鼠模型。但是该模型的建立需要经历两个阶段，首次成慢性粒细胞性白血病表现，只有通过流式分选出BCR－ABL+B细胞，二次回输经60Co照射的同系小鼠，才能发生Ph+ALL表现，其制备过程复杂。并且该模型建立过程中，二次回输BCR－ABL+B细胞的受鼠，必须接受7.5Gy的60Co照射的预处理，白血病细胞才能植入，受鼠才会发生Ph+ALL，致使受鼠的均一性得不到保证。因此，开发一种建模过程简单，受鼠均一性良好的急性淋巴细胞白血病小鼠模型，也日益成为研发的重点。
技术实现思路
本专利技术的第一个的目的在于提供一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法，以克服现有技术中存在的制备过程复杂的技术问题。本专利技术的第二个目的在于提供一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型，以克服现有技术中存在的二次回输受鼠均一性得不到保证技术问题。本专利技术提供的一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法，该方法包括：利用带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染经IL－7刺激的造血细胞，并将刺激后的造血细胞回输同系小鼠建立所述急性淋巴细胞白血病小鼠模型。进一步的，所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒为带有BCR－ABLP190的浓缩的逆转录病毒。进一步的，所述造血细胞为：用生物素标记的抗体标记BABL/c小鼠骨髓细胞经磁性分选获得富含造血细胞的谱系抗原阴性(Lin－)细胞和B细胞。进一步的，所述IL－7刺激的方法为：将所述造血细胞置于含10ng/mLIL－7及10％FBS的Opti－MEM培养基中培养过夜。进一步的，所述感染方法为：将所述IL－7刺激后的未贴壁细胞接种于retronection包被的24孔板内，加入所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒，37℃1000g离心2h后，常规培养24h。进一步的，所述同系小鼠为经60Co照射后的BABL/c小鼠。进一步的，所述60Co照射剂量为7.5Gy。进一步的，所述回输同系小鼠的方法为：将所述经7.5Gy的60Co照射后的BABL/c小鼠经尾静脉输注所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染经IL－7刺激的造血细胞，同时输注正常BABL/c小鼠骨髓细胞。进一步的，输注所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染后的造血细胞的数量为1×106－1.5×107个，输注所述正常BABL/c小鼠骨髓细胞的数量为5×106个；优选地，输注所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染后的造血细胞的数量为2×106个，输注所述正常BABL/c小鼠骨髓细胞的数量为5×106个。进一步的，本专利技术还提供了前述建模方法建立的急性淋巴细胞白血病小鼠模型。本专利技术提供的一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法，具有建模过程简单易行、一步建立ph+ALL小鼠模型的优点。本专利技术提供的一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型，模型稳定，且将其分选出的BCR－ABL+B细胞二次回输同系小鼠无需照射处理，表现与首次发病小鼠一致，具有提高受鼠的均一性，减少照射引起的受鼠意外死亡等风险的优点。附图说明图1为实施例1提供的Mig190组小鼠瑞－吉氏染色外周血涂片；图2A为实施例1提供的Mig190组小鼠外周血白细胞计数的中位数以及对比例1提供的MigR1组小鼠外周血白细胞计数的中位数，对比例2提供的TBI组小鼠外周血白细胞计数的中位数和对比例3提供的未处理组小鼠外周血白细胞计数的中位数；图2B为实施例1提供的Mig190组小鼠外周血血小板计数的中位数以及对比例1提供的MigR1组小鼠外周血血小板计数的中位数，对比例2提供的TBI组小鼠外周血血小板计数的中位数和对比例3提供的未处理组小鼠外周血血小板计数的中位数；图2C为实施例1提供的Mig190组小鼠外周血血红蛋白计数的中位数以及对比例1提供的MigR1组小鼠外周血血红蛋白计数的中位数，对比例2提供的TBI组小鼠外周血血红蛋白计数的中位数和对比例3提供的未处理组小鼠外周血血红蛋白计数的中位数；图3为实施例1提供的Mig190组小鼠的生存率以及对比例1提供的MigR1组小鼠的生存率，对比例2提供的TBI组小鼠的生存率和对比例3提供的未处理组小鼠的生存率；图4A为对比例1提供的MigR1组小鼠的肝组织病理切片HE染色结果；图4B为对比例1提供的MigR1组小鼠的脾组织病理切片HE染色结果；图4C为实施例1提供的Mig190组小鼠的肝组织病理切片HE染色结果；图4D为实施例1提供的Mig190组小鼠的脾组织病理切片HE染色结果；图5为定性PCR检测GFP和BCR－ABL融合基因在实施例1提供的Mig190组小鼠外周血，骨髓，肝和脾组织中的扩增水平与对比例3提供的未处理组小鼠外周血，骨髓，肝和脾组织中的扩增水平；图6为WesternBlot检测BCR－AB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法，其特征在于：该方法包括：利用带有BCR－ABL P190的逆转录病毒感染经IL－7刺激的造血细胞，并将刺激后的造血细胞回输同系小鼠建立所述急性淋巴细胞白血病小鼠模型。

【技术特征摘要】
1.一种急性淋巴细胞白血病小鼠模型的建模方法，其特征在于：该方法包括：利用带有BCR－ABLP190的逆转录病毒感染经IL－7刺激的造血细胞，并将刺激后的造血细胞回输同系小鼠建立所述急性淋巴细胞白血病小鼠模型。2.根据权利要求1所述的建模方法，其特征在于，所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒为带有BCR－ABLP190的浓缩的逆转录病毒。3.根据权利要求1所述的建模方法，其特征在于，所述造血细胞为：用生物素标记的抗体标记BABL/c小鼠骨髓细胞经磁性分选获得富含造血细胞的谱系抗原阴性(Lin－)细胞和B细胞。4.根据权利要求1所述的建模方法，其特征在于，所述IL－7刺激的方法为：将所述造血细胞置于含10ng/mLIL－7及10％FBS的Opti－MEM培养基中培养过夜。5.根据权利要求1所述的建模方法，其特征在于，所述感染方法为：将所述IL－7刺激后的未贴壁细胞接种于retronection包被的24孔板内，加入所述带有BCR－ABLP190的逆转录病毒，37℃100...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈翀，徐开林，祁娜，王雪，吴庆运，曾令宇，曹江，闫志凌，李振宇，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32