The invention discloses a combination of immobilized beta glucosidase granule and preparation method thereof, and belongs to the field of enzyme curing. The combination of polymer shell immobilized beta glucosidase particles including beta glucosidase cross-linked aggregates and crosslinked core; the preparation method is embedded combined immobilization method by crosslinking package, first in the water in oil emulsion system was prepared by particle cross-linked enzyme aggregates size uniform. Then the cross-linked enzyme aggregates surface chemical modification into groups of carbon carbon double bond, finally using vinyl monomers as raw materials, through free radical polymerization in situ by the combination of immobilized beta glucosidase particles. The invention has the advantages of simple operation, low cost, high enzyme recovery rate, strong enzyme stability, convenient recovery and reuse, and wide application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒及其制备方法
本专利技术属于酶的固定化
,涉及一种组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒及其制备方法。
技术介绍
β-葡萄糖苷酶是广泛存在于自然界中的一类水解酶,它能够水解糖苷和寡糖中非还原性末端的β-糖苷残基从而释放葡萄糖和相应的配基。另外,β-葡萄糖苷酶可催化逆水解反应和转糖基反应,并合成相应的糖苷类化合物。随着糖苷类化合物在医药、食品、日用化工工业上有着重要的应用和经济价值,以及与化学法相比酶法合成糖苷具有高选择性、条件温和、反应过程简单以及环保等众多优点。因此,利用β-葡萄糖苷酶催化各类糖苷的合成和应用受到越来越多的关注。但是β-葡萄糖苷酶催化各类糖苷的合成反应大多数需要在非水相体系和较高温度环境中进行,然而,天然β-葡萄糖苷酶的稳定性较差、易失活,导致催化效率低,限制了其工业化应用,因而增强β-葡萄糖苷酶的稳定性是当前急需解决的问题。交联酶聚集体是近些年发展起来的一种无载体固定化酶技术。它的制备通常分为沉淀和交联两步,首先利用蛋白沉淀剂(如中性盐、水溶性有机溶剂、非离子型高聚物等)将溶解状态的酶进行物理沉淀得到酶沉淀聚集体,随后利用交联剂(例如戊二醛)与酶聚集体分子上的氨基发生反应,从而得到不溶性固定化酶颗粒。该方法获得的固定化酶制备过程简单、酶活保留率高、具有良好的稳定性和重复操作性,但是多次重复利用后聚集体表面结构容易被破坏而造成酶活损失,在非水相催化过程中酶的稳定性也不够。酶的包埋技术是借助化学或者物理的方法将酶固定在某种载体中的过程,载体的形成可以通过化学的方法(如交联、聚合)、物理的方法(物理的凝胶化)或这两 ...
【技术保护点】
一种组合固定化β‑葡萄糖苷酶颗粒,其特征在于:包括核心与外壳,所述核心为交联β‑葡萄糖苷酶聚集体,所述外壳为交联的高分子聚合物,所述核心位于外壳内部,所述核心与所述外壳之间通过化学键链接。
【技术特征摘要】
1.一种组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒,其特征在于:包括核心与外壳,所述核心为交联β-葡萄糖苷酶聚集体,所述外壳为交联的高分子聚合物,所述核心位于外壳内部,所述核心与所述外壳之间通过化学键链接。2.一种组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将沉淀剂加入到蛋白浓度为10~50g/L的β-葡萄糖苷酶溶液中,振荡搅拌得到混合液;(2)向步骤(1)所得混合液中依次加入油相和乳化剂,磁力搅拌乳化1~3min,形成油包水体系后,在4~25℃下沉淀反应0.5~1h;(3)向步骤(2)所得产物中加入交联剂,磁力搅拌乳化1~3min,在4~25℃下交联反应1~3h,将反应得到的产物离心,洗涤,过滤,即得交联β-葡萄糖苷酶聚集体;(4)将步骤(3)得到的交联β-葡萄糖苷酶聚集体和能与β-葡萄糖苷酶表面氨基发生反应的且含有碳碳不饱和双键的酶修饰剂依次加入到pH值为4.0~7.0的缓冲溶液中,振荡搅拌,形成聚集体悬液,在4~25℃下反应0.5~6h后,置于截留分子量为12KDa的透析袋中透析12~24h;(5)向步骤(4)透析后的反应液中依次加入乙烯基单体和引发剂,在4~25℃下反应3~10h后,置于截留分子量为12KDa的透析袋中透析12~24h,离心收集沉淀,冷冻干燥,即得组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒。3.根据权利要求2所述的组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中沉淀剂为(NH4)2SO4、PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000中的一种;所述(NH4)2SO4的加入量为30~80%(w/v),所述PEG400、PEG1000、PEG6000、PEG8000的加入量分别为10~30%(w/v)。4.根据权利要求2所述的组合固定化β-葡萄糖苷酶颗粒的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中油相为大豆油、橄榄油、花生油、液体石蜡、菜籽油、色拉油、蓖麻油、丁酸乙酯、辛癸酸甘油酯、月桂酸乙酯、...
【专利技术属性】
技术研发人员:魏胜华,钱伟,孟娜,马小淋,周清华,柯文君,郭良昊,徐书春,王韩杰,
申请(专利权)人:安徽工程大学,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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