一种具有良好热稳定性的葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种具有良好热稳定性的葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法，包括将单体、葡萄糖氧化酶和交联剂制成混合溶液作为水相，将表面活性剂加入到不溶于水的非极性或弱极性有机溶剂中，溶解后作为油相；在搅拌条件下，将水相逐滴加入到油相中，持续搅拌，得透明稳定的微乳液体系，向微乳液体系中加入引发剂，使得单体在微乳液的水相液滴中原位地聚合和交联，并将葡萄糖氧化酶包裹在其中，形成纳米凝胶，凝胶的三维网状结构可以对葡萄糖氧化酶实现多点、多面的固定化。即使高温时葡萄糖氧化酶的两个亚基间的相互作用力减弱，也不会分离。因此可以有效防止由亚基解离引起的不可逆的酶结构变化。

【技术实现步骤摘要】
一种具有良好热稳定性的葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法
本专利技术涉及一种纳米凝胶的制备方法，尤其涉及一种葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法，属于功能高分子材料、纳米材料、酶固定化

技术介绍
葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase)广泛地分布于生物体内，它能够专一地催化葡萄糖生成葡萄糖酸以及过氧化氢，并在此过程中消耗氧气。因而被应用于食品、饲料、医药等领域中，起到去除葡萄糖、脱氧、杀菌、测定葡萄糖浓度等作用。通常，葡萄糖氧化酶需要保存在低温环境中，以保证其酶活性。但是很多涉及葡萄糖氧化酶的应用难以避免地要在较高温度下储存、运输、实施，因此提高葡萄糖氧化酶的热稳定性是一个亟待解决的技术问题，它具有重要的应用价值和大量的实际需求。提高葡萄糖氧化酶热稳定性的技术难点在于，它是一种具有四级结构的蛋白质。具体来说就是，葡萄糖氧化酶分子中存在两个亚基，其在高温环境中的变性是由亚基的解离开始的，即两个亚基之间的相互作用力减弱，彼此逐渐分离。亚基解离会进一步引起各种结构变化，令葡萄糖氧化酶失去正确的组装结构，从而失去活性。这造成葡萄糖氧化酶的热失活过程比其它单亚基酶要复杂，那么提高其热稳定性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有良好热稳定性的葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)称取单体、交联剂和葡萄糖氧化酶溶解于MES缓冲溶液中制得混合溶液作为水相，其中，所述单体是指N‑异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N'‑二甲氨基乙酯或二者的衍生物中的任意一种；2)将表面活性剂加入到不溶于水的非极性或弱极性有机溶剂中，溶解后作为油相；3)在搅拌条件下，将水相逐滴加入到油相中，持续搅拌，得透明稳定的微乳液体系，控制水相与油相的体积比为1：5‑1：50，且微乳液中W0值为20；4)向步骤3)所得的微乳液体系中加入水溶性的引发剂，引发聚合反应并进一步交联，控制反应温度为20‑30℃，反应时间为0.5‑4h...

【技术特征摘要】
1.一种具有良好热稳定性的葡萄糖氧化酶纳米凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)称取单体、交联剂和葡萄糖氧化酶溶解于MES缓冲溶液中制得混合溶液作为水相，其中，所述单体是指N-异丙基丙烯酰胺、甲基丙烯酸N,N'-二甲氨基乙酯或二者的衍生物中的任意一种；2)将表面活性剂加入到不溶于水的非极性或弱极性有机溶剂中，溶解后作为油相；3)在搅拌条件下，将水相逐滴加入到油相中，持续搅拌，得透明稳定的微乳液体系，控制水相与油相的体积比为1：5-1：50，且微乳液中W0值为20；4)向步骤3)所得的微乳液体系中加入水溶性的引发剂，引发聚合反应并进一步交联，控制反应温度为20-30℃，反应时间为0.5-4h,形成包裹有葡萄糖氧化酶的纳米凝胶，所述引发剂包括还原组份和氧化组份，所述还原组分是指亚硫酸盐和亚铁盐中的任意一种，所述氧化组分是指过硫酸盐、过氧化氢中的一种；5)聚合反应结束后，向反应体系中加入MES缓冲溶液，打破反应体系中的油水平衡，冷藏静置，待油水界面清晰后去除油相，将水相转移进透析袋中，将透析袋中的产品至于MES缓冲溶液中透析48h以上，以去除表面活性剂和残余单体，即得葡萄糖氧化酶纳米凝胶；其中，所述MES缓冲溶液是指2-(N-吗啡啉)乙磺酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶倩，柏良久，李桂英，薛众鑫，王文香，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37