一种茶叶籽酚类化合物的定性方法技术

本发明专利技术公开了一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于采用超高效液相色谱‑四级杆‑飞行时间串联质谱法鉴定，茶叶籽粉进行前处理后通过超高效液相色谱‑四级杆‑飞行时间串联质谱检测得到总离子流色谱图及提取特征离子色谱图，通过Q‑TOF定性软件计算离子对应的化合物的和精确分子量，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定，碰撞诱导未知化合物裂解，根据离子的裂解情况推断茶叶籽中酚类化合物种类。本方法与现有酚类化合物定性方法相比具有无需标准品、分析灵敏度高、选择性好的优点。

A qualitative method for phenolic compounds in tea seeds

The invention discloses a qualitative method of tea seed phenolic compounds, characterized by tandem mass spectrometry identification four rod flight time ultra performance liquid chromatography, pretreatment of tea seed powder by ultra performance liquid chromatography four rod tandem time-of-flight mass spectrometry detection total ion chromatography map feature extraction and ion chromatogram, Q compounds through TOF qualitative software to calculate the corresponding ion and accurate molecular weight, elemental composition and accurate molecular weight according to preliminary identification of unknown compounds, collision induced cracking of unknown compounds, according to the types of ions of phenolic compounds in tea seed cracking situation. Compared with the existing qualitative methods of phenols, the method has the advantages of no standard product, high sensitivity and good selectivity.

【技术实现步骤摘要】
一种茶叶籽酚类化合物的定性方法
本专利技术涉及酚类化合物的定性研究领域，尤其涉及一种茶叶籽酚类化合物的定性方法。
技术介绍
茶树(CamelliaSinensisO.Ktze)为山茶科山茶属植物，起源于我国云贵高原。茶树叶子、果实等植物材料富含茶多酚。酚类化合物是植物中一种重要的次生代谢产物，其分子结构中含有若干个酚性羟基基团，一般分为酚酸类、黄酮类、单宁类、黄烷醇类和苷类等。儿茶素类是山茶属植物的特征酚物质，属于黄烷醇类化合物，一般存在于该属植物的花、茎、叶和果实中。研究表明，植物酚类化合物是一种天然抗氧化剂，能清除人体内的NO和ROS自由基，抑制氧化酶活性和激活抗氧化酶体系。另有报道表明，酚类化合物能有效抑制细菌和真菌的生长，同时可以抑制癌细胞增殖，降低致癌诱变剂的活性。目前，国内外对茶叶籽酚类化合物组成的研究报道不多，主要集中于对酚类物质提取工艺的优化和总酚含量测定，其中应用最为广泛的分析技术为紫外分光光度法，而对酚类化合物组成的定性则采用UHPLC技术。显然，目前的分析方法需依赖已知的标准品，具有一定的局限性；同时，液相色谱技术灵敏度不高，难以用于微量物质的鉴定。
技术实现思路
为了解决茶叶籽酚类定性问题，本专利技术的目的在于提供一种无需标准品、分析灵敏度高、选择性好的茶叶籽酚类定性方法。为实现上述目的，本专利技术提供一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOF-MS)鉴定。一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法鉴定。所述鉴定包括以下步骤：样品前处理：称取茶叶籽粉置于锥形瓶中，加入提取液摇匀、震荡提取、离心，收集上层澄清液，沉淀物重复提取，合并上清液旋蒸浓缩至干后得到提取物，提取物用有机溶液溶解得到溶解液，溶解液经有机膜过滤，密封冷藏得到待分析液；离子色谱图的获得：设置相应的液相色谱条件和质谱条件，通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法对前处理中获得的待分析液进行检测，得到总离子流色谱图及提取特征离子色谱图；茶叶籽提取物化学成分的初步鉴定：分析检测所获得的总离子流色谱图及提取特征离子色谱图，计算该特征离子对应的未知化合物的元素组成和精确分子量，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定；诱导裂解：选择离子丰度>106cps的分子离子峰对未知化合物进行碰撞诱导裂解，通过裂解所得的二级质谱得到未知化合物相应的碎片离子；茶叶籽提取物化学成分判断：根据未知化合物的裂解情况和裂解所得的碎片离子推断提取物中酚类化合物种类。所述样品前处理步骤中的提取液为乙醇水溶液，优选，提取液选取醇类溶液提取效果好，但是甲醇等醇溶液具有一定毒性，选取环境友好的50％乙醇水溶液(v/v)作为提取液，乙醇溶液浓度低于50％时，萃取效果较差；浓度高于50％时，有机溶剂含量太高。所述样品前处理步骤中的溶解液为甲醇水溶液，优选，50％甲醇水溶液(v/v)溶解效果及分离效果最佳，甲醇溶液浓度低于50％时，溶解效果差；浓度高于50％时，分离效果差。所述样品前处理步骤中的震荡提取为60℃振荡提取1h，温度低于60℃，提取效果差，温度高于60℃，有机化合物容易发生氧化反应；振荡时间高于1h，提取效果变化不明显，且有机化合物容易发生氧化反应；低于1h，提取效果差。所述样品前处理步骤中的离心为转速4000rpm离心10min，旋蒸浓缩为在35℃下旋蒸浓缩至干；离心时间少于10min，离心效果差，高于10min，离心效果变化不明显；浓缩温度低于35℃，浓缩不彻底，温度高于35℃，有机物容易发生反应。进一步的，所述样品前处理为：准确称取茶叶籽粉于锥形瓶中，加入20-30倍茶叶籽粉重量体积比(g/ml)的50％乙醇水溶液v/v摇匀，于60℃下振荡提取1h后，在4000rpm转速下离心10min，收集上层澄清液，继续向剩余沉淀物中加入8-10倍茶叶籽粉重量体积比(g/ml)的50％乙醇水溶液v/v清洗，离心收集上清液，重复提取1-3次，合并上清液于35℃下旋蒸浓缩至干后，用50％甲醇水溶液v/v定容至0.25倍茶叶籽粉重量体积比(g/ml)得到溶解液，溶解液经0.2μm有机滤膜过滤得到待分析液，密封冷藏待分析。所述色谱图的获得步骤中的液相色谱条件为：色谱柱为AgilentEclipsePlus-C18，100mm×2.1mm，1.8μm；流动相：A为0.1％甲酸水溶液v/v，B为0.1％甲酸乙腈溶液v/v；梯度洗脱：0-5min：5％-10％B，5-7min：10％-20％B，7-9min：20％B，9-10min：20％-50％B，10-12min：50％B，12-13min：50％-5％B，13-15min：5％B；以上百分含量均为体积比；流速0.4mL/min；柱温30℃；进样量2.0μL；平衡时间3min。进一步的，所述离子色谱图的获得步骤中的质谱条件为：一级质谱，采用鞘流电喷雾双喷源，在负离子扫描方式下进行数据采集，参比离子m/z为112.9855和980.0163，干燥气为高纯N2，毛细管电压4000V，雾化气压力30psig，碎裂电压140V，干燥气温度190℃，干燥气流速9L/min，鞘气温度350℃，鞘气流速10L/min，离子扫描范围m/z100～1100；二级质谱，采用鞘流电喷雾双喷源，在负离子扫描方式下进行数据采集，参比离子m/z为112.9855和980.0163，干燥气为高纯N2，毛细管电压4000V，雾化气压力30psig，碎裂电压140V，干燥气温度190℃，干燥气流速9L/min，鞘气温度350℃，鞘气流速10L/min，离子扫描范围m/z100～1100；碰撞能量设定为10～40eV。所述茶叶籽提取物化学成分的初步鉴定为，首先提取总离子流色谱图中主要色谱峰对应的特征质谱离子，通过QualitativeAnalysis离线分析软件提取该特征质谱离子对应的色谱图，通过Q-TOF定性软件计算该特征质谱离子对应的化合物的元素组成和精确分子量，通过查阅参考文献汇总山茶属植物酚类化合物的基础信息，将未知化合物的元素组成与山茶属植物酚类化合物的基础信息进行比对，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定。所述参考文献为：1.牛研,王书芳.LC-Q-TOF-MS和LC-IT-MSn分析当归芍药散中化学成分[J].中草药，2014，45(8)：1056～10622.Vallverdú-QueraltA,EstruchR,Lamuela-RaventosRM.BioactivecompoundspresentintheMediterraneansofrito[J].FoodChemistry,2013,141(4):3365-72.3.刘国强,董静,王弘,等.EGC/GC和EGCG/GCG的ESI-IT-TOF质谱裂解规律研究[J].质谱学报,2009,30(05):287-294.4.Gómez-RomeroM,ZurekG,SchneiderB,etal.Automatedidentificationofphenolicsinplant-derivedfoodsbyusinglibrary本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，采用超高效液相色谱‑四级杆‑飞行时间串联质谱法鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法鉴定。2.权利要求1所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述鉴定包括以下步骤：样品前处理：称取茶叶籽粉置于锥形瓶中，加入提取液摇匀、震荡提取、离心，收集上层澄清液，沉淀物重复提取，合并上清液旋蒸浓缩至干后得到提取物，提取物用有机溶液溶解得到溶解液，溶解液经有机膜过滤，密封冷藏得到待分析液；离子色谱图的获得：设置相应的液相色谱条件和质谱条件，通过超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法对前处理中获得的待分析液进行检测，得到总离子流色谱图及提取特征离子色谱图；茶叶籽提取物化学成分的初步鉴定：分析检测所获得的总离子流色谱图及提取特征离子色谱图，计算该特征离子对应的未知化合物的元素组成和精确分子量，依据元素组成和精确分子量对未知化合物进行初步鉴定；诱导裂解：选择离子丰度>106cps的分子离子峰对未知化合物进行碰撞诱导裂解，通过裂解所得的二级质谱得到未知化合物相应的碎片离子；茶叶籽提取物化学成分判断：根据未知化合物的裂解情况和裂解所得的碎片离子推断提取物中酚类化合物种类。3.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的提取液为乙醇水溶液，优选，50％乙醇水溶液v/v。4.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的溶解液为甲醇水溶液，优选，50％甲醇水溶液v/v。5.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的震荡提取为60℃振荡提取1h。6.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理步骤中的离心为转速4000rpm离心10min，旋蒸浓缩为在35℃下旋蒸浓缩至干。7.权利要求2所述茶叶籽酚类化合物的定性方法，其特征在于，所述样品前处理为：准确称取茶叶籽粉于锥形瓶中，加入20-30倍茶叶籽粉重量体积比50％乙醇水溶液v/v摇匀，于60℃下振荡提取1h后，在4000rpm转速下离心10min，收集上层澄清液，继续向剩余沉淀...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖国银，刘芸，林立毅，徐敦明，孙婷，王晓琴，张志刚，吕美玲，
申请(专利权)人：厦门出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：福建,35