一种银杏叶提取物的制备方法及其有效成分的测定方法技术

本发明专利技术一种银杏叶提取物的制备方法，准备不同时期每株取100片代表性的银杏叶片，进行烘干粉碎，通过正交设计或响应面法优化由颗粒大小，溶剂种类，溶剂浓度，料液比、超声提取功率、温度、提取时间的因子组成提取体系提取，萃取、洗脱、真空减压回收溶剂得粗提取物，然后进行双蒸水溶液离心得大孔树脂吸附纯化物，将大孔树脂吸附纯化物分为三部分，第一部分得到银杏叶片提取物银杏黄酮类化合物，第二部分得到银杏叶片提取物银杏萜内酯类化合物，第三部分得到银杏酚酸类化合物。本发明专利技术还提供了银杏叶提取物有效成分的测定方法，对银杏叶提取物银杏黄酮类化合物、银杏萜内酯类化合物、银杏酚酸类化合物采用流动相溶解RP‑HPLC进行检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种银杏叶提取物的制备方法及其有效成分的测定方法。
技术介绍
目前在现有技术中银杏栽培过程中由于不能对银杏叶提取物进行制备和测定，导致无法对银杏的制备进行有效管理。
技术实现思路
本专利技术提供了一种银杏叶提取物的制备方法及其有效成分的测定方法，它可以对银杏的栽培进行有效管理。本专利技术采用了以下技术方案：一种银杏叶提取物的制备方法，其特征是它包括以下步骤：准备不同时期每株取100片代表性的银杏叶片，进行烘干粉碎，通过正交设计或响应面法优化由颗粒大小，溶剂种类，溶剂浓度，料液比、超声提取功率、温度、提取时间的因子组成提取体系提取，萃取、洗脱、真空减压回收溶剂得粗提取物，然后进行双蒸水溶液离心得大孔树脂吸附纯化物，将大孔树脂吸附纯化物分为三部分，第一部分经过乙醇洗脱、解吸、真空减压回收乙醇得到银杏叶片提取物EGb1，EGb1为银杏黄酮类化合物，第二部分经过洗脱，乙醇解吸，真空减压回收乙醇，然后再通过甲醇溶液和无水硫酸液酸钠进行离心，酸性氧化铝柱吸附甲醇洗脱真空减压后得到银杏叶片提取物EGb2，EGb2为银杏萜内酯类化合物，第三部分进行洗脱，再通过氢氧化钠解吸，再通过正己烷萃取真空解压回收正己烷得到EGb3，EGb3为银杏酚酸类化合物。银杏叶片为银杏种实正常采收时的新鲜外种皮或银杏成熟叶片，将银杏叶片进行干燥粉碎的银杏外种皮或银杏叶1g，取石油醚按料液比1：10（w/v）50℃水浴回流脱脂3次，再经过50%-60%乙醇，料液比为1：10（w/v）60℃回流提取4次，每次30min，提取液合并过滤后减压浓缩回收有机溶剂，真空冷冻干燥，粉碎得到含黄酮类、内酯类及酚酸类化合物的银杏叶提取物,然后得到正己烷萃取酚酸类成分，得去除酚酸类成分后得银杏叶提取物,最后通过大孔吸附树脂纯化含黄酮类和内酯类化合物的银杏叶提取物。本专利技术还公开了一种对权利要求1中所述银杏叶提取物有效成分的测定方法，其特征是它包括以下步骤：对银杏叶提取物银杏黄酮类化合物、银杏萜内酯类化合物、银杏酚酸类化合物采用流动相溶解RP-HPLC进行检测，RP-HPLC检测是根据样品中每种成分有效成分的峰面积代入绘制的标准曲线中得到样品中每种有效成分的含量。本专利技术具有以下有益效果：：采用了以上技术方案后，本专利技术对银杏叶不同时期的黄酮类化合物、萜内酯类化合物、聚戊烯醇及银杏酸、白果亚酸和氢化白果酸的变化差异与相关分析及其形成特性研究，进一步提高银杏制备的安全性、优质性和高效性。具体实施方式本专利技术公开了一种银杏叶提取物的制备方法，它包括以下步骤：准备不同时期每株取100片代表性的银杏叶片，进行烘干粉碎，通过正交设计或响应面法优化由颗粒大小，溶剂种类，溶剂浓度，料液比、超声提取功率、温度、提取时间的因子组成提取体系提取，萃取、洗脱、真空减压回收溶剂得粗提取物，然后进行双蒸水溶液离心得大孔树脂吸附纯化物，将大孔树脂吸附纯化物分为三部分，第一部分经过乙醇洗脱、解吸、真空减压回收乙醇得到银杏叶片提取物EGb1，EGb1为银杏黄酮类化合物，第二部分经过洗脱，乙醇解吸，真空减压回收乙醇，然后再通过甲醇溶液和无水硫酸液酸钠进行离心，酸性氧化铝柱吸附甲醇洗脱真空减压后得到银杏叶片提取物EGb2，EGb2为银杏萜内酯类化合物，第三部分进行洗脱，再通过氢氧化钠解吸，再通过正己烷萃取真空解压回收正己烷得到EGb3，EGb3为银杏酚酸类化合物，银杏叶片为银杏种实正常采收时的新鲜外种皮或银杏成熟叶片，将银杏叶片进行干燥粉碎的银杏外种皮或银杏叶1g，取石油醚按料液比1：10（w/v）50℃水浴回流脱脂3次，再经过50%-60%乙醇，料液比为1：10（w/v）60℃回流提取4次，每次30min，提取液合并过滤后减压浓缩回收有机溶剂，真空冷冻干燥，粉碎得到含黄酮类、内酯类及酚酸类化合物的银杏叶提取物,然后得到正己烷萃取酚酸类成分，得去除酚酸类成分后得银杏叶提取物,最后通过大孔吸附树脂纯化含黄酮类和内酯类化合物的银杏叶提取物，本专利技术还公开了一种银杏叶提取物有效成分的测定方法，其特征是它包括以下步骤：对银杏叶提取物银杏黄酮类化合物、银杏萜内酯类化合物、银杏酚酸类化合物采用流动相溶解RP-HPLC进行检测，RP-HPLC检测是根据样品中每种成分有效成分的峰面积代入绘制的标准曲线中得到样品中每种有效成分的含量。本专利技术以乙醇为提取溶液，采用正交设计选择溶液浓度、料液比、提取时间和提取温度、建立优化提取体系，超声提取、经提取液合并、过滤，石油醚萃取、减压浓缩至浸膏状，得到银杏提取物。1、对黄酮类化合物含量：以槲皮素、异鼠李素、山奈黄素等黄铜苷元为标样和乙醇为提取溶液，采用正交设计选择溶剂浓度、料液比、提取时间和提取温度，建立优化提取体系，超声提取，减压浓缩至膏状，得到银杏叶提取物EGb1，EGb1为银杏黄酮类化合物，EGb1经过60%乙醇溶解，用石油醚萃取去除叶绿素等脂类物质，用正己烷萃取去除银杏酚酸类物质，得到EGb2，EGb2为银杏萜内酯类化合物，再经过加水沉淀，离心，用ADS-17大孔树脂对上清液吸附、洗脱纯化，得到黄酮类化合物，采用HPLC检测，由色谱图中槲皮素、山奈黄素、异鼠李素的峰面积分别计算出各黄酮苷元的含量，采用三因子法计算出样品中黄酮类化合物的含量。2、对萜内酯类化合物以银杏内酯A（GA）、银杏内酯B（GB）、银杏内酯C（GC）、白果内酯（BB）为标样和乙醇为提取溶剂，经70%乙醇、料液比1：15，80℃超声波提取、减压浓缩得到膏状粗提取GBb1，再经石油醚萃取去除叶绿素等脂类物质、正己烷萃取去除银杏酚酸类物质，减压浓缩，得到GBb2，再经ADS-17大孔树脂去除多糖、蛋白质等物质，过酸性氧化铝柱去除黄酮类化合物，得到GBb3，采用HPLC检测检测萜内酯类化合物的含量。3、聚戊烯醇类化合物含量以漆树酸为标样和乙醇为提取溶剂，采用响应面法选择溶剂浓度、料液比、提取时间和提取温度，用design-expert软件优化提取方案，建立优化提取体系，分别超声提取晒干处理和烘干处理的银杏外种皮酚酸类化合物，浓缩至膏状，得银杏外种皮提取物EGBE，甲醇溶液定容，稀释。过滤，采用HPLC检测酚酸类化合物含量。以聚戊烯醇C85、C90、C95为标样和正己烷为提取溶剂，5%NaOH-MeOH为皂化剂，采用响应面法选择溶剂浓度，料液比、提取时间和提取温度，用design-expert软件优化提取方案，建立优化提取体系，超声提取，旋转蒸发浓缩，得银杏聚戊烯醇提取物，经硅胶吸附除杂装柱层析、石油醚—乙酸乙酯洗脱、纯化，旋转蒸发浓缩后溶解于正己烷中供HPLC检测检测聚戊烯醇化合物含量。4、银杏叶片花青素含量以矢车菊素为花青素标样和乙醇、甲醇、盐酸为提取溶剂，采用单因素选择溶剂浓度、溶剂酸度、料液比、提取温度、提取时间建立最佳提取体系提取花青素，采用HPLC测定银杏花青素含量，利用外标法计算出银杏花青素提取液的花青素含量。5、银杏酚酸类化合物含量以银杏总酸和漆树酸为标样和乙醇为提取溶剂，采用响应面法选择溶剂浓度、料液比、提取时间和提取温度，，用design-expert软件优化提取方案，建立优化提取体系，分别超声提取晒干处理和烘干处理的银杏外种皮酚酸类化合物，浓缩至膏状，得银杏外种皮提取物EGB本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种银杏叶提取物的制备方法，其特征是它包括以下步骤：准备不同时期每株取100片代表性的银杏叶片，进行烘干粉碎，通过正交设计或响应面法优化由颗粒大小，溶剂种类，溶剂浓度，料液比、超声提取功率、温度、提取时间的因子组成提取体系提取，萃取、洗脱、真空减压回收溶剂得粗提取物，然后进行双蒸水溶液离心得大孔树脂吸附纯化物，将大孔树脂吸附纯化物分为三部分，第一部分经过乙醇洗脱、解吸、真空减压回收乙醇得到银杏叶片提取物EGb1，EGb1为银杏黄酮类化合物，第二部分经过洗脱，乙醇解吸，真空减压回收乙醇，然后再通过甲醇溶液和无水硫酸液酸钠进行离心，酸性氧化铝柱吸附甲醇洗脱真空减压后得到银杏叶片提取物EGb2，EGb2为银杏萜内酯类化合物，第三部分进行洗脱，再通过氢氧化钠解吸，再通过正己烷萃取真空解压回收正己烷得到EGb3，EGb3为银杏酚酸类化合物。

【技术特征摘要】
1.一种银杏叶提取物的制备方法，其特征是它包括以下步骤：准备不同时期每株取100片代表性的银杏叶片，进行烘干粉碎，通过正交设计或响应面法优化由颗粒大小，溶剂种类，溶剂浓度，料液比、超声提取功率、温度、提取时间的因子组成提取体系提取，萃取、洗脱、真空减压回收溶剂得粗提取物，然后进行双蒸水溶液离心得大孔树脂吸附纯化物，将大孔树脂吸附纯化物分为三部分，第一部分经过乙醇洗脱、解吸、真空减压回收乙醇得到银杏叶片提取物EGb1，EGb1为银杏黄酮类化合物，第二部分经过洗脱，乙醇解吸，真空减压回收乙醇，然后再通过甲醇溶液和无水硫酸液酸钠进行离心，酸性氧化铝柱吸附甲醇洗脱真空减压后得到银杏叶片提取物EGb2，EGb2为银杏萜内酯类化合物，第三部分进行洗脱，再通过氢氧化钠解吸，再通过正己烷萃取真空解压回收正己烷得到EGb3，EGb3为银杏酚酸类化合物。2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐志扬，
申请(专利权)人：徐志扬，
类型：发明
国别省市：江苏;32