一种化合物及其分离方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种新化合物及其分离方法和应用，其化学结构是为：

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物领域，具体涉及新化合物及其分离方法和应用。
技术介绍
香加皮为萝摩科植物杠柳的干燥根皮，是一种传统中药，具有悠久的药用历史。有祛风湿、强筋骨的功效，用于风寒湿痹，腰膝酸软，心悸气短，下肢浮肿。中医将其主要用于治疗心力衰竭和风湿性关节炎。主产于河北、山西、河南、山东4省，以山西、河南产量为最大。药理研究表明其具有抗肿瘤、强心、抗炎、免疫调节等作用，同时具有诱导细胞分化和促进神经生长因子的作用。据文献报道香加皮化学成分主要有C21甾类、强心苷类、醛类，以及萜类。因为中药所含有的药物成分是极其复杂的，如何能够更深入详尽的分析香加皮的具体化学成分并研究它们的具体药理作用，这对于将来临床上精确的控制用药量，避免其他药物的干扰，这对于医学界是具有深远意义的。
技术实现思路
本专利技术目的是提供了一种新化合物，同时也提供了从香加皮中分离该化合物的方法和应用，该方法操作简单，在抗心肌缺血方面有不错的效果。本专利技术所采用的技术方案是：一种新化合物，有抗心肌缺血的作用，有化学结构式为。所述新化合物的分离方法由以下步骤组成：A、提取：称取香加皮，用8-10倍量70%乙醇加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压回收乙醇至药液无醇味，加水稀释药液至浓度为0.3-0.6kg生药/L，过滤，得滤液；B、大孔吸附树脂纯化：将步骤A所得滤液上大孔吸附树脂，依次以水、10%、30%、50%、70%和95%乙醇梯度洗脱，流速为10ml/min，每个浓度洗脱4倍柱体积，将95%乙醇洗脱液浓缩，干燥，回收溶剂得到浸膏；C、制备HPLC分离：将步骤B所得浸膏用甲醇溶解后过0.45μm滤膜，以制备HPLC分离纯化，得到目标化合物。所述步骤B的大孔吸附树脂优选为AB-8型大孔吸附树脂。所述步骤C中色谱柱为C18柱，规格为20mm×250mm，5μm，流动相：甲醇-水，梯度洗脱：0~10min，40~50%甲醇，10~30min，50%甲醇，30~50min，50~60%甲醇，50~60min，60~90%甲醇，60~65min，90~40%甲醇，65~75min，40%甲醇，进样体积为400μL，收集保留时间RT=29min的洗脱液，浓缩，重结晶得到目标化合物。作为优选方式，所述分离方法由以下步骤组成：A、提取：称取香加皮，用8-10倍量70%乙醇加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压回收乙醇至药液无醇味，加水稀释药液至浓度为0.3-0.6kg生药/L，过滤，得滤液；B、大孔吸附树脂纯化：将步骤A所得滤液上AB-8型大孔吸附树脂，依次以水、10%、30%、50%、70%和95%乙醇梯度洗脱，流速为10ml/min，每个浓度洗脱4倍柱体积，将95%乙醇洗脱液浓缩，干燥，回收溶剂得到浸膏；C、制备HPLC分离：将步骤B所得浸膏用甲醇溶解后过0.45μm滤膜，以制备HPLC分离纯化，色谱柱为C18柱，规格为20mm×250mm，5μm，流动相：甲醇-水，梯度洗脱：0~10min，40~50%甲醇，10~30min，50%甲醇，30~50min，50~60%甲醇，50~60min，60~90%甲醇，60~65min，90~40%甲醇，65~75min，40%甲醇，进样体积为400μL，收集保留时间RT=29min的洗脱液，浓缩，重结晶得到目标化合物。本专利技术取得的技术进步是：本专利技术分离新化合物的方法，原料易得，是从香加皮中提取分离得到的，且具体步骤简单易操作；所得到的新化合物还未见报道，这对于中药有效成分的研究具有十分重要的意义。本专利技术的新化合物为白色粉末，由正离子高分辨质谱确定其分子式为C43H70O14（[M+NH4+]m/z测得值：828.5136，计算值：828.5110，误差：3.14ppm），香草醛-浓硫酸反应由红色变为紫色，Liebermann-Burchard反应阳性。推测其可能为甾体类化合物。根据13C-NMR说明其苷元为21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，21-四醇-20-酮。13C-NMR在δ95.0-103.0之间有3个糖基端基碳的共振信号：δ102.8，δ101.2，δ97.2，HSQC实验指明1H-NMR中相应的三个糖基端基质子共振信号为：δ4.58（dd，J=1.8Hz，9.6Hz），δ4.78（dd，J=1.8Hz，9.6Hz），δ4.84，因此推断该化合物为21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，21-四醇-20-酮的三糖苷，从偶合常数可知，糖链中三个糖都以β苷键连接，通过比较化合物1的苷元部分与21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，21-四醇-20-酮[4]，可以观察到苷化位移效应：C-2（+0.3ppm），C-3（+7.56ppm）和C-4（-3.54ppm），表明糖链连接在C-3羟基上。1H-NMR图谱表明该化合物分子式中有四个OCH3：δ3.36(3H，s)，δ3.41(3H，s)，δ3.42(3H，s)，δ3.42(3H，s)，一个双键质子：δ5.41（1H，m），13C-NMR图谱也表明有一个双键和一个羰基（δ210.0）。HSQC和HMBC图谱上显示苷元的C-3（δ79.1）上所连质子（δ3.49）与在δ97.2的糖基端基碳相关，同时该端基碳上的质子δ4.84与苷元的C-3（δ79.1）及糖的δ36.4碳相关，HSQC给出与δ36.4的碳相连的质子为δ1.57和δ2.15，HMBC显示这两个质子与δ97.2和δ78.6的碳有远程相关，同δ78.6有远程相关的质子还有OCH3的质子，HSQC给出与δ78.6相连的质子为δ3.84，HMBC显示这个质子与δ83.9的碳有远程相关，HSQC给出与δ83.9的碳相连的氢为δ3.27，与δ83.9的质子有远程相关的碳还有δ70.0和δ101.2（另一个糖基的端基碳）的碳，而与δ70.0的碳有远程相关的氢为δ1.18（3H，d，J=4.8Hz）的质子，HSQC显示该质子与δ18.4的CH3碳相关，如此找出了糖链上内测糖的全部1H-NMR和13C-NMR（δ97.2，36.4，78.6，83.9，70.0，18.4，58.4）数据，经与β-D-加拿大麻糖对比，推断该糖为β-D-加拿大麻糖，且其C-4位上的羟基与中间糖基的端基碳δ101.2相连成苷。同理，找出了中间糖上的全部1H-NMR和13C-NMR数据，并推断该糖也为β-D-加拿大麻糖。根据HSQC、HMBC推测出第三个糖结构与β-D-加拿大麻糖相似，HSQC给出与δ81.6、δ77.0、δ73.3的碳相连的质子分别为δ3.79、δ2.96、δ3.26，HMBC显示δ2.96（1H，m，J=9.0Hz）的氢与δ81.6和δ73.3的碳有远程相关，根据其偶合常数说明3、4、5位的氢都处于α键上，推断该糖为β-D-夹竹桃糖。并且无剩余单糖残基，所以为外侧糖。综合上述推断，该化合物确定为21-O-甲基-Δ5-孕甾烯-3β，14β，17β，21-四醇-20-酮-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新化合物，其特征在于所述化合物的化学结构式为。

【技术特征摘要】
1.一种新化合物，其特征在于所述化合物的化学结构式为
。
2.根据权利要求1所述的新化合物的分离方法，其特征在于所述方法由以下步骤组成：
A、提取：称取香加皮，用8-10倍量70%乙醇加热回流提取3次，每次2h，合并提取液，减压回收乙醇至药液无醇味，加水稀释药液至浓度为0.3-0.6kg生药/L，过滤，得滤液；
B、大孔吸附树脂纯化：将步骤A所得滤液上大孔吸附树脂，依次以水、10%、30%、50%、70%和95%乙醇梯度洗脱，流速为10ml/min，每个浓度洗脱4倍柱体积，将95%乙醇洗脱液浓缩，干燥，回收溶剂得到浸膏；
C、制备HPLC分离：将步骤B所得浸膏用甲醇溶解后过0.45μm滤膜，以制备HPLC分离纯化，得到目标化合物。
3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于：所述步骤B的大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
4.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于：所述步骤C中色谱柱为C18柱，规格为20mm×250mm，5μm，流动相：甲醇-水，梯度洗脱：0~10min，40~50%甲醇，10~30min，50%甲醇，30~50min，50~60%甲醇，50~60min，60~90%甲醇，60~65min，90~40%甲醇，65~75min，40%甲醇，进样体积为400μL，收...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵韶华，刘敏彦，刘颖，梁俊卿，欧阳玥，李向军，王宗权，乔莉，李松，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13