一种分离生育酚同系化合物的方法技术

本发明专利技术提供了一种生育酚同系化合物的分离方法，所述方法包括如下步骤：(1)将一种或多种极性溶剂与一种或多种非极性溶剂充分混合后静置分相，获得上相溶剂和下相溶剂；(2)将生育酚混合物溶解于所述步骤(1)获得的上相溶剂，作为待分离样品；(3)以所述步骤(1)获得的上相溶剂作为固定相，以所述步骤(1)获得的下相溶剂作为流动相，通过高速逆流色谱对步骤(2)的待分离样品进行分离，得到生育酚各同系化合物与流动相的混合液；其中，所述生育酚各同系化合物分别为α-生育酚，(β+γ)-生育酚和δ-生育酚；(4)去除所述步骤(3)获得的生育酚各同系化合物与流动相的混合液中的流动相溶剂，获得生育酚各同系化合物产品。

【技术实现步骤摘要】
一种分离生育酚同系化合物的方法
本专利技术属于脂类加工领域，具体涉及一种从天然混合生育酚中分离生育酚同系化合物的方法。
技术介绍
天然维生素E(学名生育酚)是一种混合物，它包括α-、β-、δ-、γ-生育酚和与上述四种生育酚相对应的生育三烯酚共计8种化合物，具有清除自由基、抗癌、抗心血管疾病、提高免疫力和抗衰老的作用。生育酚的各同系化合物之间结构差异很小。如图1所示，其基本结构均由一个6-色满醇(6-hydroxylschroman)和在色满环的2′位具有一个被取代的饱和C16侧链组成。根据甲基在色满醇的苯环上的位置和数量不同，可分为α-、β-、γ-、δ-生育酚四种不同的化合物：其中，α-生育酚在苯环上具有3个甲基(R1＝-CH3，R2＝-CH3)，分子式为C29H50O2，分子量为430.71；β-生育酚(R1＝-CH3，R2＝-H)和γ-生育酚(R1＝-H，R2＝-CH3)在苯环上各有两个甲基，二者为同分异构体，分子式为C28H48O2，分子量为416.68；δ-生育酚在苯环上具有一个甲基(R1＝-H，R2＝-H)，其分子式为C27H46O2，分子量为402.65。生育酚同系化合物的基本结构如下所示：在各同系化合物中，α-生育酚的生物活性最强，因此，人们对其生理活性的研究报道比较广泛。近年来研究者发现，非α-生育酚也具有比较独特的生理功能，例如Jiang等人(JiangQ，WongJ，FyrstH等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，2004，101(51)：17825-17830)发现γ-生育酚可以抑制乳腺癌和肺癌细胞的增殖，而α-生育酚没有此项功能。闵军霞等人(闵军霞、郭俊生、赵法等，卫生研究，2003，32(4)：343-345)发现维生素E的各同系化合物诱导肝癌细胞凋亡的作用不同，其效应排序为δ-生育酚>γ-生育酚>α-生育酚，显示δ-生育酚具有潜在的抗肝癌临床应用前景。由此可以看出，随着非α-生育酚的生育酚同系化合物在生物医学和药理学的重要性的揭示，将引发开发研究非α-生育酚的生育酚同系化合物作为药物或功能补充食品的热潮，而高纯度生育酚同系化合物产品的分离制备和其应用范围的拓展也会成为生育酚产品开发的新趋势。由于α-、β-、γ-、δ-四种生育酚化合物在分子结构上相差很小，采用一般的分离方法往往只能得到这四种化合物同时存在的混合生育酚，难以获得高纯度的生育酚各同系化合物。为了从生育酚混合物获得高纯度的生育酚各同系化合物，目前多利用它们在结构上的微小差异，采用树脂柱分离的方法进行分离。专利申请CN103012352A公开了利用阴离子交换树脂，以混合生育酚为原料，分离制备天然维生素E各同系化合物的方法，该方法将含量为50％的混合生育酚溶解于一定比例的溶剂，配成上柱液后，上柱，在离子交换树脂柱中停留1h-10h后，再采用不同的溶剂对柱进行洗脱并进行减压蒸馏去除溶剂，分别得到d-(β+γ)生育酚和d-δ生育酚。该方法仅分离得到d-(β+γ)生育酚和d-δ生育酚，却未能对d-α生育酚进行有效分离；并且，所获得的d-(β+γ)生育酚和d-δ生育酚体纯度较低、分离也不完全。专利CN102432584B公开了一种利用反相层析柱对50％的混合生育酚进行分离的方法。在该方法中，原料经一次上柱，即得到3种生育酚同系化合物，然而由于该方法采用成本较高的反相填料柱，且对操作条件的要求较高，很容易因物料处理条件的微小差异而使得分离效果产生波动，因此不易在工业中操作实施。专利申请CN101220018A公开了一种生育酚同系化合物的分离方法，以50-100％的混合生育酚为原料，采用四区八柱的模拟移动床色谱系统(simulatedmovingbedchromatography，SMBC)，以正己烷等为流动相，以硅胶等为固定相对物料进行分离。该方法需要在固定相和流动相间将混合生育酚进行多次吸附和洗脱，按照不同的洗脱顺序得到四种生育酚同系化合物。并且，该方法需要在不同时间对区间阀门进行切换，而且不能一次性获得所分离的同系化合物，操作复杂，设备成本高，该分离方法的工业化存在难度。综上所述，涉及生育酚同系化合物分离的现有方法均采用填料作为固定相进行分离，需要进行吸附、解吸、洗脱的操作，操作上相对复杂。固定相存在的不可逆吸附的问题给所分离样品造成损耗。此外，固定相使用一定时间就需要进行再生操作，并且，经过一定时间的使用之后，即使再生程序也不能恢复至最初的分离效果，只能废弃填料，从而增加了工业运行成本。另一方面，上世纪80年代由美国国立卫生院的YoichiroIto博士提出的高速逆流色谱(High-SpeedCounterCurrentChromatography，HSCCC)已被应用于多种天然产物的分离纯化过程。高速逆流色谱基于液液分配的基本原理，不采用任何固态的支撑物(如柱填料、吸附剂、亲和剂、板床、筛膜等)，其固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附。该方法具有无样品的损失和污染、高效、快速和大制备量分离等优点。特别地，对于天然产物复杂混合物中特定成分的高纯度分离纯化，高速逆流色谱技术具有以下优势：(1)分离效率高：分配分离在旋转运动中进行，两相溶剂都被剧烈振动的离心力场甩成微小的颗粒，待分离的样品各组分会在两相微粒的极大表面上分配，并能在这些颗粒震荡与对流的环境中有效传递，实现上万次高效连续的溶剂萃取过程，达到充分分离与纯化。这样的一步分离就能够将复杂体系中的特定成分分离到98％以上。(2)使用成本低：分离过程不是吸附与淋洗，而是对流穿透的过程，因此不使用填料，与使用填料的制备柱色谱相比可以节省昂贵的填料费用。并且，在大规模生产中可实现溶剂的回收再利用，运行使用的后续投入很低。(3)制备量大：由于不使用固相填料，没有填料在柱内的占空体积，柱内空间全部是有效空间，从而负载能力强、制备量大。(4)回收率高：由于无不可逆吸附，避免了污染、变性和填料失活造成的样品损失，样品的回收率高。(5)洁净环保：整个实验生产过程可以封闭进行，避免溶剂挥发造成的环境污染及对操作人员的身体伤害。(6)工艺放大好：在小型仪器上摸索的工艺条件易于在大型仪器和生产过程中实现。本领域尚未有利用HSCCC技术对生育酚同系化合物的混合物进行分离的报道。另外，根据本专利技术的方法实现了生育酚混合物中α-生育酚、(β+γ)-生育酚和δ-生育酚的高纯度、理想分离。
技术实现思路
为解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种生育酚同系化合物的分离方法，所述方法包括如下步骤：(1)将一种或多种极性溶剂与一种或多种非极性溶剂充分混合后静置分相，获得上相溶剂和下相溶剂；(2)将生育酚混合物溶解于所述步骤(1)获得的上相溶剂，作为待分离样品；(3)以所述步骤(1)获得的上相溶剂作为固定相，以所述步骤(1)获得的下相溶剂作为流动相，通过高速逆流色谱对步骤(2)的待分离样品进行分离，得到生育酚各同系化合物与流动相的混合液；其中，所述生育酚各同系化合物分别为α-生育酚，(β+γ)-生育酚和δ-生育酚；(4)去除所述步骤(3)获得的生育酚各同系化合物与流动相的混合液中的流动相溶剂，获得生育酚各同系化合物产品。具体而言，本专利技术是通过如下技术方案实现的：本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生育酚同系化合物的分离方法，所述方法包括如下步骤：(1)将一种或多种极性溶剂与一种或多种非极性溶剂充分混合后静置分相，获得上相溶剂和下相溶剂；(2)将生育酚混合物溶解于所述步骤(1)获得的上相溶剂，作为待分离样品；(3)以所述步骤(1)获得的上相溶剂作为固定相，以所述步骤(1)获得的下相溶剂作为流动相，通过高速逆流色谱对步骤(2)的待分离样品进行分离，得到生育酚各同系化合物与流动相的混合液；其中，所述生育酚各同系化合物分别为α‑生育酚，(β+γ)‑生育酚和δ‑生育酚；(4)去除所述步骤(3)获得的生育酚各同系化合物与流动相的混合液中的流动相溶剂，获得生育酚各同系化合物产品。

【技术特征摘要】
1.一种生育酚同系化合物的分离方法，所述方法包括如下步骤：(1)将一种或多种极性溶剂与一种或多种非极性溶剂充分混合后静置分相，获得上相溶剂和下相溶剂；其中，所述极性溶剂为选自于由乙腈、乙酸、乙酸乙酯、丙酮、碳数1-4的低级醇和水组成的组，所述碳数1-4的低级醇为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、仲丁醇或叔丁醇；所述非极性溶剂为选自于由正庚烷、正己烷、正戊烷和石油醚组成的组；(2)将生育酚混合物溶解于所述步骤(1)获得的上相溶剂，作为待分离样品；(3)以所述步骤(1)获得的上相溶剂作为固定相，以所述步骤(1)获得的下相溶剂作为流动相，通过高速逆流色谱对步骤(2)的待分离样品进行分离，得到生育酚各同系化合物与流动相的混合液；其中，所述生育酚各同系化合物分别为α-生育酚，(β+γ)-生育酚和δ-生育酚；(4)去除所述步骤(3)获得的生育酚各同系化合物与流动相的混合液中的流动相溶剂，获得生育酚各同系化合物产品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述极性溶剂为碳数1-2的低级醇和水的混合溶剂，所述碳数1-2的低级醇为甲醇或乙醇。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述非极性溶剂为正庚烷或正己烷。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述非极性溶剂为正庚烷或正己烷，且所述极性溶剂为碳数1-2的低级醇和水的混合溶剂，所述碳数1-2的低级醇为甲醇或乙醇。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述非极性溶剂、碳数1-2的低级醇和水的比例为(5-30):(5-30):(0....

【专利技术属性】
技术研发人员：赵抒娜，林旭琦，王满意，林海龙，车夏宁，曹玉平，蒋一鸣，陈学兵，周学晋，
申请(专利权)人：中粮集团有限公司，中粮营养健康研究院有限公司，中粮天科生物工程天津有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11