重组猪流感病毒及其应用制造技术

本文公开了重组、嵌合型猪流感病毒，其包含来自多于一种流感病毒亚型的血凝素节段。本文还描述了制备重组流感病毒、包含该重组流感病毒的免疫原性组合物的方法、刺激针对流感病毒的免疫反应的方法以及治疗和预防流感病毒感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本文公开了重组、嵌合型猪流感病毒，其包含来自多于一种流感病毒亚型的血凝素节段。本文还描述了制备重组流感病毒、包含该重组流感病毒的免疫原性组合物的方法、刺激针对流感病毒的免疫反应的方法以及治疗和预防流感病毒感染的方法。【专利说明】重组猪流感病毒及其应用
本专利技术一般涉及流感病毒和免疫原性组合物以及治疗和预防流感感染的方法。具体来说，本专利技术涉及表达多于一种血凝素(HA)亚型的重组、嵌合型猪流感病毒。专利技术背景猪流感(SI)是由A型和C型流感病毒引起的猪的急性呼吸道疾病。A型流感病毒是节段化的负链RNA病毒，且可从多种其他动物宿主物种分离，包括鸟、人、马、鲸和貂。尽管整个流感病毒很少跨越物种屏障，但基因节段可以通过基因重排或遗传漂移过程跨越该屏障。猪支持人和鸟A型流感病毒的复制，并被假定为通过用作不同宿主物种特异性病毒间重排的“混合容器”在种间传播中起重要作用(Scholtissek, Eur.J.Epidemiol.(1994) 10:455-458)。这可能导致能跨越物种屏障传播至人的流感病毒的产生。流感病毒体包含含有单链RNA基因组的内部核糖核蛋白核心(螺旋形核衣壳)和内衬以基质蛋白(Ml)的外部脂蛋白包膜。A型流感病毒的基因组由8个节段化的负义单链RNA分子组成。每个节段都具有节段特异性RNA包装信号，其由5’端和3’端的非编码区和短的编码区组成。8个节段化的RNAs编码11种病毒蛋白，包括RNA依赖性RNA聚合酶蛋白(PB2、PB1和PA)以及形成核衣壳的核蛋白(NP);基质膜蛋白(Ml、M2);血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，其为从含脂包膜突出的两种表面糖蛋白；非结构蛋白(NSl)、核输出蛋白(NEP，也称为NS2)、促凋亡因子PB1-F2。HA对病毒结合和进入细胞至关重要，并且为主要的中和抗体靶标，然而NA在子代病毒释放中起作用，并且为病毒增殖所必需。基因组的转录和复制在核内发生，并且通过在质膜上出芽而发生组装。病毒可以在混合感染期间重排(reassort)基因。尽管存在可用的疫苗，多种猪流感病毒`(SIV)亚型在猪群体中仍持续传播。目前，HlNU H3N2和H1N2为在北美猪群体中引起疾病的主要亚型。H3N2亚型的SIVs通过人、鸟间的重排产生，并且典型的猪病毒正经历快速进化，且通常引起比典型的H1N1SIV更严重的疾病。当前的SIV疫苗并不提供针对多抗原SIV变体的交叉保护。因此，仍然需要开发治疗和预防猪流感感染的有效策略。专利技术概述本专利技术涉及具有来自两种或更多种SIVs亚型的HAs的重组、嵌合型流感病毒，以及其制备和使用方法。在优选的实施方案中，重组病毒缺失NA节段的全部或部分，以便阻止病毒增殖。因为NA为病毒增殖所必需，可以通过使病毒在唾液酸酶存在下生长而在培养物中提供NA的功能。可以将表达多于一种HA类型的重组病毒用于免疫原性组合物中以刺激针对流感病毒的免疫反应，以及用于治疗和预防流感病毒感染。因为存在来自不同SIVs亚型的HAs，可以将包含嵌合型流感病毒的组合物用来提供针对多种流感株的广泛覆盖。具体来说，本文的专利技术人发现包含Hl和H3，并且保留了 NA3’端和5’端病毒RNA特异性包装信号但缺少NA节段其余部分的嵌合型病毒，可在培养物中有效生长，并且在猪体内为减毒的，因为在猪体内不存在唾液酸酶。NA包装信号得到大量保留以用于有效包装。此类嵌合型构建物可以用作有效和安全的、活的减毒疫苗。因此，在一个实施方案中，本专利技术涉及包含来自多于一种流感亚型的多于一个血凝素(HA)节段(节段5)的重组、嵌合型猪流感病毒。具体来说，所述病毒包含来自第一流感亚型的节段1_5、7和8以及来自第二流感亚型的第二节段5。另外，所述第一流感亚型的神经氨酸酶(NA)节段(节段6)的全部或部分缺失，使得成为减毒病毒。 在某些实施方案中，第二节段5包含来自所述第一流感亚型的NA包装序列，其位于所述第二节段5的3’端以及任选地5’端。在其他的实施方案中，NA包装序列包含来自3’ NA UTR和3’ NA编码序列的3’ NA包装序列，以及任选地，来自5’ NA UTR和5’ NA编码序列的5’ NA包装序列。在另外的实施方案中，上述流感病毒来自A型流感病毒。在某些实施方案中，流感病毒包含来自HlNl亚型的HA节段和来自H3N2亚型的HA节段。在某些实施方案中，第一流感亚型为HlNl，如A/swine/Saskatchewan/18789/02。在其他实施方案中，第二流感亚型为 H3N2，如 A/Swine/Texas/4199-2/98。在其他实施方案中，本专利技术涉及包含来自HlNl流感亚型的节段1-5、7和8以及来自H3N2流感亚型的节段5的减毒、重组猪流感病毒。另外，来自HlNl流感亚型的节段6的全部或部分缺失，并且H3N2节段5侧翼为来自HlNl亚型的NA包装序列。所述包装序列包含来自3’ NA UTR和3’ NA编码序列的3’ NA包装序列以及来自5’ NA UTR和5’ NA编码序列的5’ NA包装序列。在某些实施方案中，HlNl亚型为A/swine/Saskatchewan/18789/02,并且 H3N2 亚型为 A/Swine/Texas/4199-2/98。在另外的实施方案中，本专利技术涉及包含任何一种上述重组病毒和药学可接受的赋形剂的组合物。在某些实施方案中，所述组合物还包含佐剂。在其他的实施方案中，本专利技术涉及诱发脊椎动物个体体内的免疫反应的方法，包括给予所述个体所述组合物。在其他的实施方案中，本专利技术涉及治疗或预防脊椎动物个体体内的流感感染的方法，包括给予所述个体治疗有效量的所述组合物个体。在其他的实施方案中，本专利技术涉及针对流感病毒给个体接种疫苗的方法，包括给予所述个体有效量的所述组合物个体。在某些实施方案中，所述个体为猪个体。在其他的实施方案中，本专利技术涉及这样的重组构建物，其包含:(a)猪流感H3N2亚型HA节段；和(b)位于所述H3N2HA节段的3’端以及任选地5’端的猪流感HlNl亚型NA包装序列。在某些实施方案中，所述H3N2HA节段侧翼为HlNlNA包装序列，所述包装序列包含来自3 ’ NAUTR和3 ’ NA编码序列的3 ’ NA包装序列以及来自5 ’ NA UTR和5 ’ NA编码序列的5’NA包装序列。在其他的实 施方案中，所述HlNl亚型为A/swine/Saskatchewan/18789/02,并且所述 H3N2 亚型为 A/Swine/Texas/4199-2/98。在另外的实施方案中，本专利技术涉及制备重组、嵌合型流感病毒的方法，包括用(a)包含来自HlNl流感亚型的节段1_5、7和8的单独的质粒；和(b)上述的重组构建物转染宿主细胞，以及在引起产生所述重组、嵌合型流感病毒的条件下培养所述宿主细胞。在其他的实施方案中，本专利技术涉及用以下物质转化的细胞:(a)包含来自HlNl流感亚型的节段1_5、7和8的单独的质粒；和(b)如上所述的重组构建物。在另外的实施方案中，本专利技术涉及制备组合物的方法，包括将任何上述的重组、嵌合型猪流感病毒与药学可接受的赋形剂组合。在其他的实施方案中，本专利技术涉及制备流感疫苗的方法，包括:(a)使任何一种上述的重组、嵌合型猪流感病本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：周岩，亚历山大·马斯克，
申请(专利权)人：萨斯喀彻温大学，
类型：
国别省市：