一种缢蛏酶解多肽的制备方法，其特征在于步骤为：将缢蛏去壳、洗净绞碎，按料液质量比1∶1～4加水匀浆，调节pH值至7～8；加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的加入量为缢蛏质量的0.2％～0.3％，酶解温度为60～70℃，酶解时间2～6小时；酶解后灭酶处理，再离心取上清液即为酶解液；将酶解液经超滤、G-25凝胶色谱柱层析、反相高效液相色谱洗脱得到所需的缢蛏酶解多肽。本发明专利技术制备工艺简单，制得的缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，缢蛏酶解多肽对羟自由基清除率、DPPH自由清除率及氧化还原力较高，可用于体外抗氧化，本发明专利技术制备工艺简单，制得的缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，在体外有显著的抗氧化作用，对于进一步研究与开发以缢蛏酶解多肽为基础的功能性食品和药物，提高缢蛏的经济价值具有重大意义。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】一种缢蛏酶解多肽的制备方法，其特征在于步骤为：将缢蛏去壳、洗净绞碎，按料液质量比1∶1～4加水匀浆，调节pH值至7～8；加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的加入量为缢蛏质量的0.2％～0.3％，酶解温度为60～70℃，酶解时间2～6小时；酶解后灭酶处理，再离心取上清液即为酶解液；将酶解液经超滤、G-25凝胶色谱柱层析、反相高效液相色谱洗脱得到所需的缢蛏酶解多肽。本专利技术制备工艺简单，制得的缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，缢蛏酶解多肽对羟自由基清除率、DPPH自由清除率及氧化还原力较高，可用于体外抗氧化，本专利技术制备工艺简单，制得的缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，在体外有显著的抗氧化作用，对于进一步研究与开发以缢蛏酶解多肽为基础的功能性食品和药物，提高缢蛏的经济价值具有重大意义。【专利说明】一种能够抗氧化的缢蛏多肽的制备方法及应用
本专利技术属于海洋功能食品类，具体是一种能抗氧化的海洋功能食品及其制备方法。
技术介绍
海洋贝类资源丰富且富含许多生理活性物质，因而逐渐被广泛研究和应用。缢蛏(Sinonovacula constricta)俗名経子，属瓣觸纲、异齿亚纲、帘蛤目、灯塔蛤科、纟益経属，在我国沿海均有分布，产量较大，为我国四大养殖贝类之一.科学养鱼，2005 (I):4-6.]，缢蛏肉味鲜美，营养丰富，富含人体生命活动所需的各种必需氨基酸、不饱和脂肪酸等营养物质，食品科学，2008，29 (11) =548-551 ；Remacha, Trivino A，Anadon.Reproductive cycle of the razor clam Solen marginat us(Pulteney 1799)inSpain:acomparative study in three different locations, Journal of shellfishresearch, 2006, 25 (3):869-876 ;安贤惠，几种纟益経的营养性和健康性分析评价，海洋湖沼通报,2005(4):99-103 ;李太武，林叶，苏秀榕，不同群体缢蛏营养成分的多元性分析，食品科学，2008,29(11):548-551 ;林叶，苏秀榕，孙蓓等，不同种群缢蛏氨基酸及脂肪酸比较研究，食品科学，2006，27 (12):675-678]。缢蛏性寒、可补阴去邪热，治烦闷、冷痢、热痢、妇人产后虚损、虚热等症，具有较高的药用食用价值.中国海洋药物，200 2，85 (I):35.;苏晶，苏明翥编著，水产品药用巧治百病.沈阳:辽宁科学技术出版社，2000，187.];缢蛏的活性成分还具有较高的研究价值，如雷晓凌等，药物生物技术，2004，11(3) =146-149]，对缢蛏肉的酶解条件进行研究，发现提取得到的糖胺聚糖对体外培养的HL-60细胞均有一定抑制作用，且随着用量增加抑制作用增强。活性多肽由于具有敏感性高、稳定性好及副作用少等优点，已被用作抗氧化药物开发的一个重要来源。研究已经证实，食物蛋白通过蛋白酶酶解方式，可以得到功能多样的活性多肽.水产科学，2008，27 (7):370.]。对于缢蛏，在抗氧化方面的研究还很少，特别是利用酶解技术提取多肽在抗氧化方面的研究并未见报道。本研究通过正交实验确定胰蛋白酶水解缢蛏的最佳酶解条件，并研究酶解多肽的体外抗氧化活性，为该领域的进一步研究提供科学依据，并且对于进一步研究与开发以缢蛏酶解多肽为基础的功能性食品和药物，提高缢蛏的经济价值具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的第一个技术问题是提供一种缢蛏酶解多肽的制备方法，以DPPH清除率为指标，通过正交实验进行酶解，获得DPPH清除率最大的酶解条件。在此酶解条件下进行酶解，得到缢蛏酶解多肽，具有制备工艺简单、易操作等特点。本专利技术所要解决的第二个技术问题是提供一种缢蛏酶解多肽的应用，缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，具有体外抗抗氧化的作用。本专利技术解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为:一种缢蛏酶解多肽的制备方法，其特征在于步骤为:I)前处理:将缢蛏去壳、洗净绞碎，按料液质量比1:1~4加水匀浆，调节pH值至7~8 ; 2)酶解:加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的加入量为缢蛏质量的0.2%~0.3%，酶解温度为60~70°C，酶解时间2~6小时；3)酶解后灭酶处理，再离心取上清液即为酶解液；4)将酶解液经超滤、G-25凝胶色谱柱层析后收集的各个洗脱峰浓缩后冷冻干燥，将干燥后得到的各个峰组分采用DPPH清除率进行抗氧化实验，确定目标肽所在的洗脱峰，并对该峰大量收集，浓缩并冷冻干燥；5)最后，采用反相高效液相色谱进行洗脱纯化得到所需的缢蛏酶解多肽。作为优选，所述步骤I)的料液质量比1: 2，pH值为8。作为优选，所述步骤2)的蛋白酶为胰蛋白酶，蛋白酶的加入量为900U/g，酶解温度为30°C，酶解时间6小时。作为改进，所述步骤3)的灭酶处理是在80~95°C，加热10~15min，离心是在5000 ~7000r/min 下离心 10 ~20min。再改进，所述步骤4)的超滤是将酶解液加入超滤杯，用3KD的超滤膜进行超滤，收集3KD分子量以下的酶解液，进行冷冻干燥；G-25凝胶色谱柱层析的具体步骤为:采用湿法装柱，柱高为80cm，直径为2.6cm,装柱完毕后用去离子水进行平衡，样品的浓度为200mg/mL，每次上样量为3mL，洗脱液为去离子水，洗脱速度为2.3mL/min，蛋白检测仪280nm进行检测，对各洗脱峰分别进行收集，浓缩后冷冻干燥，将干燥后得到的各个峰组分采用DPPH清除率进行抗氧化实验，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该峰大量收集，浓缩并冷冻干燥；最后，所述步骤5)的反相高效液相色谱洗脱纯化的具体工艺参数为:色谱条件:C18反相柱；柱型:10 X 250mm ；乙腈/水为流动相，流速为0.8mL/min,上样体积为20 μ L，检测波长220nm ;洗脱条件:乙腈浓度为15%，洗脱20min。本专利技术解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为:一种根据上述制备方法得到的缢蛏酶解多肽在体外抗氧化的应用。与现有技术相比，本专利技术的优点在于:通过正交实验确定最佳酶解条件，以DPPH清除率为指标，通过正交实验进行酶解，获得DPPH清除率最大的酶解条件。本专利技术制备工艺简单，制得的缢蛏酶解多肽敏感性高、稳定性好及副作用少，在体外有显著的抗氧化作用，对于进一步研究与开发以缢蛏酶解多肽为基础的功能性食品和药物，提高缢蛏的经济价值具有重大意义。【专利附图】【附图说明】图1是S印hadex G25凝胶色谱柱峰谱图；图2是高效液相检测缢蛏酶解多肽纯度图3是缢蛏酶解液的DPPH自由基清除率图4是缢蛏酶解液的还原力图5是缢蛏酶解液的羟自由基清除率【具体实施方式】以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。1.材料与仪器1.1主要材料与试剂 缢蛏购自浙江省舟山市南珍市场；胰蛋白酶，美国SIGMA公司；DPPH、邻二氮菲、硫酸亚铁、双氧水、铁氰化钾，北京亚太恒信生物科技有限公司其余试剂均为分析纯。1.2主要仪器DS-1型高速组织捣碎机，上海标本模型厂；BSA124S型电子天平，德国Sartorius AG公司；本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种缢蛏酶解多肽的制备方法，其特征在于步骤为： 1)前处理：将缢蛏去壳、洗净绞碎，按料液质量比1：0～4加水匀浆，调节pH值至7.0～8.5； 2)酶解：加入蛋白酶进行酶解，蛋白酶的加入量600U/g～1200U/g，酶解温度为30～45℃，酶解时间2～8小时； 3)酶解后灭酶处理，再离心取上清液即为酶解液； 4)将酶解液经超滤、G‑25凝胶色谱柱层析后收集的各个洗脱峰浓缩后冷冻干燥，将干燥后得到的各个峰组分采用DPPH清除率进行抗氧化实验，确定目标肽所在的洗脱峰，并对该峰大量收集，浓缩并冷冻干燥； 5)最后，采用反相高效液相色谱进行洗脱纯化得到所需的缢蛏酶解多肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄芳芳，丁国芳，杨最素，郁迪，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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