一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法技术

技术编号:9927621 阅读:109 留言:0更新日期:2014-04-16 18:37
本发明专利技术公开了一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,包括以下步骤:步骤1)制备反应液;步骤2)将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min,浑浊为阳性;步骤3)提取临床分离分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,环境分离蜡样芽胞杆菌,以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸,多次进行反应,观察它们的阴阳性。本发明专利技术通过配制反应液,设计引物序列,能快速、准确的检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌,并及时采取相应的措施,减少了疾病的发生率。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了,包括以下步骤:步骤1)制备反应液;步骤2)将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min,浑浊为阳性;步骤3)提取临床分离分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,环境分离蜡样芽胞杆菌,以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸,多次进行反应,观察它们的阴阳性。本专利技术通过配制反应液,设计引物序列,能快速、准确的检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌,并及时采取相应的措施,减少了疾病的发生率。【专利说明】
本专利技术涉及疾病检测
,具体的说,是。
技术介绍
蜡样芽孢杆菌是芽孢杆菌属中的一种,1950年首次在挪威报告,会引起食物中毒,中毒者症状为呕吐、腹痛、腹泻,其中呕吐症状是由蜡样芽孢杆菌致吐(cereulide)毒素造成,并且该产物不是腊样芽胞杆菌的标准产物之一,腊样芽孢杆菌致吐(cereulide)毒素是一种由非核糖调控缩氨酸综合(NRPS)产生的即使在菌体内也是不常见的多肽。快速检测分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,对提高致病性蜡样芽胞杆菌的检测和诊断效率,确定有效治疗方案具有很大意义。
技术实现思路
本专利技术公开了,提高了分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的检测和诊断效率。为实现上述技术目的,达到上述技术效果,本专利技术通过以下技术方案实现: ,包括以下步骤: 步骤I)制备反应液 反应液组成及含量为 8u/ul Bst核酸聚合酶8u IOX耐热聚合酶反应缓冲液lX,MgS04 2mM4M甜菜碱IM IOmM d-NTP 混合液400 μ M 内引物 BC-FIP40umol BC-BIP40umol 外引物 BC-F35umol BC-B35umol标本核酸20ng 添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul; 步骤2)将上述反应液放入63°C烘箱进行反应30-60min,浑浊为阳性; 步骤3)提取临床分离分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,环境分离蜡样芽胞杆菌,以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸,多次进行反应,观察它们的阴阳性。进一步的,所述外引物BC-F3的序列为CTCTTGCATGCTTGGAATT。进一步的,所述外引物BC-B3的序列为CCTTCGCTTCTAATCCAACA。 进一步的,所述内引物BC-FIP的序列为 ACACACCAAGATATTGCGCAT-GATACAGTTCCAACTTTTAGATCG。进一步的,所述内引物 BC-BIP 的序列为 TTAGTGTGATGTTCGCACTTCAA-CTATTTGTCGCAATCACCGT。进一步的,所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。本专利技术的有益效果是: 本专利技术通过配制反应液,设计引物序列,能快速、准确的检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌,并及时采取相应的措施,减少了疾病的发生率。【具体实施方式】 下面将结合实施例,来详细说明本专利技术。,包括以下步骤: 步骤I)制备反应液【权利要求】1.,其特征在于,包括以下步骤: 2.根据权利要求1所述的高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于:所述外引物BC-F3的序列为CTCTTGCATGCTTGGAATT。3.根据权利要求2所述的高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于:所述外引物BC-B3的序列为CCTTCGCTTCTAATCCAACA。4.根据权利要求3所述的高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于:所述内引物BC-FIP的序列为ACACACCAAGATATTGCGCAT-GATACAGTTCCAACTTTTAGATCG。5.根据权利要求4所述的高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于:所述内引物 BC-BIP 的序列为 TTAGTGTGATGTTCGCACTTCAA-CTATTTGTCGCAATCACCGT。6.根据权利要求5所述的高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于:所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。【文档编号】C12Q1/04GK103725751SQ201210380431【公开日】2014年4月16日 申请日期:2012年10月10日 优先权日:2012年10月10日 【专利技术者】金京勋, 吕少波, 李苏杨 申请人:苏州四同医药科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1)制备反应液反应液组成及含量为8u/ul Bst核酸聚合酶                         8u10X耐热聚合酶反应缓冲液                1X,MgSO4 2mM4M 甜菜碱                                    1M10mM d‑NTP混合液                             400μM内引物   BC‑FIP                                   40umol   BC‑BIP                                   40umol外引物    BC‑F3                                   5umol    BC‑B3                                   5umol标本核酸                                     20ng添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;步骤2)将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30‑60min,浑浊为阳性;步骤3)提取临床分离分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,环境分离蜡样芽胞杆菌,以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸,多次进行反应,观察它们的阴阳性。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:金京勋吕少波李苏杨
申请(专利权)人:苏州四同医药科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1