【技术实现步骤摘要】
一种以油脂为原料生产甲羟戊酸的方法及其构建的基因工程菌
本专利技术涉及一种经过遗传修饰的真养产碱杆菌，以及利用真养产碱杆菌发酵生产甲羟戊酸的方法。
技术介绍
甲羟戊酸代谢途径广泛存在于多种生物中，甲羟戊酸是甲羟戊酸代谢途径中一个重要的中间代谢物，可作为前体进一步合成多种具有重要生理功能的类异戊二烯化合物如异戊二烯、类胡萝卜素，辅酶Q10，青蒿素，紫杉醇等。作为类异戊二烯化合物的前体化合物，甲羟戊酸具备越来越重要的商业价值，目前可以通过微生物发酵法来生产甲羟戊酸。如可以在工程菌中表达甲羟戊酸代谢途径的重组酶来实现甲轻戍酸的发酵(Tabata et al., 2004BiotechnologyLetters, 26:1487-1491 ；Piteta et al., 2007Metabolic Engineering, 9:193-207),尽管上述研究利用不同的工程菌和不同的重组酶进行甲羟戊酸及其下游衍生物的发酵，但是均有一个共同点，就是以糖为原料进行发酵。从理论上来讲1.5分子的糖生成3分子的乙酰辅酶a，再生成I分子的甲羟戊酸，该过程中每生产I分子甲羟戊酸...
【技术保护点】
一种产甲羟戊酸的真养产碱杆菌，是降低真养产碱杆菌将油脂类底物合成PHA的能力，提高油脂类底物经乙酰辅酶A至甲羟戊酸的碳代谢流比率。
【技术特征摘要】
1.一种产甲羟戊酸的真养产碱杆菌，是降低真养产碱杆菌将油脂类底物合成PHA的能力，提高油脂类底物经乙酰辅酶A至甲羟戊酸的碳代谢流比率。2.如权利要求1所述真养产碱杆菌，其特征在于，是在敲除PhaCl基因的真养产碱杆菌中导入外源羟甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶基因和羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因。3.如权利要求1所述真养产碱杆菌，其特征在于，所述真养产碱杆菌为真养产碱杆菌Ralstonia eutropha H16,所述轻甲基戍二酸单酰辅酶A合成酶基因和轻甲基戍二酸单酰辅酶A还原酶基因来自于Enterococcus菌属，为原核苷酸序列或在原序列中引入一处或多处改变以适应在真养产碱杆菌中表达的需要。4.如权利要求3所述真养产碱杆菌，其特征在于，所述羟甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶基因和羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因来自粪肠球菌。5.权利要求1所述真养产碱杆菌用于发酵生产甲羟戊酸。6.如权利要求5所述方法，其特征在于，步骤如下: I)敲除真养产碱杆菌基因组上的PhaCl基因； 2 )将羟甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶基因和羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因引入穿梭质粒； 3)将步骤2)构建的穿梭质粒导入步骤I)经过步骤I)遗传修饰的真养产碱杆菌得到重组菌； 4)步骤3)得到的重组菌利用油脂发酵生产甲羟戊酸。7.如权利要求6所述方法，其特征在于，所述羟甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶基因和羟甲基戍二酸单酰辅酶A还原酶基因来自于Enterococcus菌属，为原基因序列或在原序列中引入一处或多处突变以适应在真养产碱杆菌中表达的需要。8.如权利要求7所述方法，其特征在于，所述真养产碱杆菌为真养产碱杆菌RalstoniaeutrophaH16。9.如权利要求6所述方法，其特征在于，具...
【专利技术属性】
技术研发人员：咸漠，邹慧斌，程涛，徐鑫，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：
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