一种紫草酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种从丹参中大量制备紫草酸单体(98％)的方法，属于中药活性组分的分离纯化技术领域。该方法按照以下步骤进行：首先，采用水或者乙醇溶液提取丹参药材中的丹酚酸B、紫草酸等组分；第二，调节提取液pH至碱性，使丹参提取液中的丹酚酸B水解，生成紫草酸，增加其中紫草酸的含量；最后，采用大孔吸附树脂分离纯化紫草酸，得到纯度超过98％的紫草酸溶液，溶液进一步经过干燥得到紫草酸单体粉末。最终紫草酸的纯度超过98％，得率超过1％(以丹参干药材计算)。该工艺操作简单，易于放大，适用于紫草酸的大量工业制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药活性组分的分离纯化方法，尤其涉及一种从丹参中分离纯化紫草酸的方法。
技术介绍
丹参是一种临床常用的中药，广泛应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病和肿瘤的预防与治疗。由于中药的传统的使用方法以水煎煮为主，所以丹参中水溶性活性组分吸引了大家的广泛关注。丹参中水溶性活性组分包括丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹参素等(附图1)。紫草酸是丹参中主要的活性组分之一，文献报道，其具有抗氧化、抗炎、抗HIV活性，可以应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病的治疗和预防作用。另外，紫草酸具有抗HIV病毒整合酶的活性，是一种无毒的HIV病毒抑制剂，可以用于抗AIDS药物的构效关系、结构修饰寻找活性更高化合物等研究。紫草酸具有极强的水溶性，加上丹参水溶性组分结构相似，性质相近，其纯品的分离纯化及其困难，目前尚没有其纯品的大量制备方法报道。中国专利CN102993143报道了一种采用制备高效液相色谱制备紫草酸单体的方法，可以制备纯度达98%的紫草酸样品。然而，高效液相色谱法只适用于少量样品的制备，且其制备成本高，难以放大至工业生产，无法满足紫草酸做为药物开发的需求。因此，本领域的技术人员致力于开发一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法，用来满足紫草酸的新药开发研究，尤其是做为注射制剂原料药的生产工艺。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种制备紫草酸的方法，包括以下步骤:步骤一、制备丹参提取液向丹参药材中加入提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；步骤二、制备紫草酸粗品溶液将丹参提取液调节至PH10-14，在10-50°c范围内搅拌反应2_10小时，得到紫草酸粗品溶液；步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸调节紫草酸粗品溶液至PH6-10，经过大孔吸附树脂柱吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98%的紫草酸溶液。步骤四、浓缩干燥纯度超过98%的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。优选的，步骤一提取溶剂为水时，提取温度为80-100°C。提取溶剂为乙醇或甲醇溶液时，提取温度为50_70°C。提取液的固液分离，采用过滤、离心或者抽滤的方法。优选提取剂为体积分数40-70%的乙醇水溶液。优选的，步骤二中pH调节，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。优选地，步骤二中还包括将所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-4，减压浓缩至粗品溶液原体积的10-10%。更优选的，所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-3，减压浓缩温度为40-60°C。将紫草酸粗品溶液减压浓缩，有利于在后续分离纯化步骤中获得较好的分离度，但是 申请人:发现，直接将紫草酸粗品溶液进行减压浓缩处理，浓缩后的紫草酸粗品溶液中，杂质含量有很大提高且紫草酸含量有所下降，而将PH调为2-4后，再进行减压浓缩，则紫草酸粗品溶液中的杂质含量没有明显的变化，紫草酸的含量也没有明显的变化。优选的，步骤三中的大孔吸附树脂，选用聚苯乙烯-聚乙烯苯为骨架的树脂，吸附后采用水洗脱树脂。更优选的，所述大孔吸附树脂型号为Hz816、XAD-4或者大孔吸附树脂微球I号。优选的，步骤三中pH调节至6-8，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。 申请人:发现，步骤三中对PH的调节，对与本专利技术中制备高纯度的紫草酸非常重要，如果浓缩液上柱PH低于6或者高于8，则紫草酸的收率会显著降低。优选的，步骤三中树脂柱的高径比为3-15:1。优选的，步骤三中水洗脱体积为柱体积的3-10倍。步骤四中纯度超过98 %的紫草酸样品溶液，经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。浓缩方法可以是常压、低压真空浓缩、喷雾干燥法、冷冻干燥法中单一的方法或者是这几种方法的混合。进一步地，本专利技术步骤二中，采用两步法制备紫草酸粗品溶液，步骤如下:a)将丹参提取液pH调节至12-14，30_50°C搅拌反应1_2小时；b)步骤a)中所得溶液pH调节至10-11在10_30°C范围内搅拌反应2_5小时，得到紫草酸粗品溶液。优选地，步骤a)中将丹参提取液pH调节至13，35_40°C搅拌反应1_2小时。优选地，步骤b)中将a)中所得溶液pH调节至10.5在10_25°C范围内搅拌反应2-5 小时。 申请人:在实验过程中偶然的发现，上述两步调节pH分段加热的方法，能够显著增加紫草酸粗品溶液中的紫草酸含量，与仅调节一次PH至10-14反应2-10小时相比，所得的紫草酸粗品溶液中的紫草酸含量能够提高30-50 %，且紫草酸粗品溶液中杂质含量明显减少，非常有利于后续的分离纯化。本专利技术克服了已有紫草酸纯化方法中产物纯度低、产量小、生产工艺复杂、生产成本高等缺点，最终紫草酸的纯度超过98%，得率超过1% (以丹参干药材计算)。本专利技术采用的HPLC检测条件为:安捷伦高效液相色谱仪(HPllOO)，采用C18色谱柱，流动相组成为(乙腈:1%甲酸水溶液=30:70)，流动相流速0.8mL / min，检测波长286nm,进样体积5 μ L。【附图说明】图1是实施例1中丹参水提取物的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，3为迷迭香酸。图2是实施例1中经碱处理后的丹参提取液的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，4为原紫草酸，5为丹参素。图3是实施例1中制备的紫草酸的HPLC图谱，紫草酸纯度99.3%。图4是实施例1制备的紫草酸和紫草酸对照品共进样的HPLC图谱。图5是实施例20中经碱处理后的丹参提取液的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，4为原紫草酸，5为丹参素。图6是实施例20制备的紫草酸和紫草酸对照品共进样的HPLC图谱。本专利技术中紫草酸对照品购自上海同田生物技术有限公司，其他试剂及材料均可从市售渠道购买获得。【具体实施方式】实施例1步骤一、取丹参药材100g，加入1L70%的乙醇水溶液，70°C提取I小时，过滤，滤渣以相同的方法再提取一次，合并两次`滤液。步骤二、以氢氧化钠调节滤液至pH12，于室温下搅拌5小时，得紫草酸粗品溶液，HPLC检测图谱如图2所示。将提取液调节pH至2，旋转蒸发仪50°C减压浓缩至原体积的10-30% mL。将pH调至2能够降低样品中的杂质含量。步骤三、500mL大孔吸附树脂微球I号(上海华震科技有限公司)，装柱，高径比5:I。调节浓缩液至PH6.5，过柱吸附，8倍柱体积水洗脱树脂柱，分步收集，HPLC检测。步骤四、合并紫草酸纯度超过98%的样品溶液，冷冻干燥，得纯度99.3%的紫草酸 1.82g。实施例2将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为水，其余同实施例1，最终得到纯度98.2%的紫草酸1.218。实施例3将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为10%的乙醇，其余同实施例1，最终得到98.5%的紫草酸1.41g实施例4将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为90%的乙醇，其余同实施例1，最终得到99.0%的紫草酸1.55g。实施例5将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为10%的甲醇，其余同实施例1，最终得到98.3%的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种紫草酸的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤一、制备丹参提取液向丹参药材中加入所述提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；步骤二、制备紫草酸粗品溶液将丹参提取液pH调节至10?14，在10?50℃范围内搅拌反应2?10小时，得到紫草酸粗品溶液；步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸调节紫草酸粗品溶液至pH5?10，经过大孔吸附树脂吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98％的紫草酸溶液。步骤四、浓缩干燥纯度超过98％的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。

【技术特征摘要】
1.一种紫草酸的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤: 步骤一、制备丹参提取液 向丹参药材中加入所述提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液； 步骤二、制备紫草酸粗品溶液 将丹参提取液PH调节至10-14，在10-50°c范围内搅拌反应2-10小时，得到紫草酸粗品溶液； 步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸 调节紫草酸粗品溶液至PH5-10，经过大孔吸附树脂吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98%的紫草酸溶液。 步骤四、浓缩干燥 纯度超过98%的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。2.如权利要求1所述的方法，其中步骤一中提取剂为40-70%(V / V)的乙醇水或甲醇水溶液，提取温度为50-100°C。3.如权利要求1所述的方法 ，其中步骤二中还包括将所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-4，减压浓缩至粗品溶液原体积的10-10%。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：阚士东，
申请(专利权)人：兰赫上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：