一种高纯度的紫草酸及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种高纯度的紫草酸及其制备方法和用途，具体地本发明专利技术从丹参中大量制备紫草酸单体(98％)的方法，属于中药活性组分的分离纯化技术领域。该方法按照以下步骤进行：首先，采用水或者乙醇溶液提取丹参药材中的丹酚酸B、紫草酸等组分；第二，调节提取液pH至碱性，使丹参提取液中的丹酚酸B水解，生成紫草酸，增加其中紫草酸的含量；最后，采用大孔吸附树脂分离纯化紫草酸，得到纯度超过98％的紫草酸溶液，溶液进一步经过干燥得到紫草酸单体粉末。最终紫草酸的纯度超过98％，得率超过1％(以丹参干药材计算)。该工艺操作简单，易于放大，适用于紫草酸的大量工业制备。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度的紫草酸及其制备方法和用途本申请是申请日为2013年10月17日，申请号为201310487764.3，专利技术创造名称为“一种紫草酸的制备方法”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种中药活性组分的分离纯化方法，尤其涉及一种从丹参中分离纯化紫草酸的方法。
技术介绍
丹参是一种临床常用的中药，广泛应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病和肿瘤的预防与治疗。由于中药的传统的使用方法以水煎煮为主，所以丹参中水溶性活性组分吸引了大家的广泛关注。丹参中水溶性活性组分包括丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹参素等(附图1)。紫草酸是丹参中主要的活性组分之一，文献报道，其具有抗氧化、抗炎、抗HIV活性，可以应用于心脑血管疾病、肝病、肾病、神经系统疾病的治疗和预防作用。另外，紫草酸具有抗HIV病毒整合酶的活性，是一种无毒的HIV病毒抑制剂，可以用于抗AIDS药物的构效关系、结构修饰寻找活性更高化合物等研究。紫草酸具有极强的水溶性，加上丹参水溶性组分结构相似，性质相近，其纯品的分离纯化及其困难，目前尚没有其纯品的大量制备方法报道。中国专利CN102993143报道了一种采用制备高效液相色谱制备紫草酸单体的方法，可以制备纯度达98％的紫草酸样品。然而，高效液相色谱法只适用于少量样品的制备，且其制备成本高，难以放大至工业生产，无法满足紫草酸做为药物开发的需求。因此，本领域的技术人员致力于开发一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法，用来满足紫草酸的新药开发研究，尤其是做为注射制剂原料药的生产工艺。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种简单、高效、成本低廉、环境友好的紫草酸制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种制备紫草酸的方法，包括以下步骤：步骤一、制备丹参提取液向丹参药材中加入提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；步骤二、制备紫草酸粗品溶液将丹参提取液调节至pH10-14，在10-50℃范围内搅拌反应2-10小时，得到紫草酸粗品溶液；步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸调节紫草酸粗品溶液至pH6-10，经过大孔吸附树脂柱吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98％的紫草酸溶液。步骤四、浓缩干燥纯度超过98％的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。优选的，步骤一提取溶剂为水时，提取温度为80-100℃。提取溶剂为乙醇或甲醇溶液时，提取温度为50-70℃。提取液的固液分离，采用过滤、离心或者抽滤的方法。优选提取剂为体积分数40-70％的乙醇水溶液。优选的，步骤二中pH调节，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。优选地，步骤二中还包括将所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-4，减压浓缩至粗品溶液原体积的10-10％。更优选的，所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-3，减压浓缩温度为40-60℃。将紫草酸粗品溶液减压浓缩，有利于在后续分离纯化步骤中获得较好的分离度，但是申请人发现，直接将紫草酸粗品溶液进行减压浓缩处理，浓缩后的紫草酸粗品溶液中，杂质含量有很大提高且紫草酸含量有所下降，而将pH调为2-4后，再进行减压浓缩，则紫草酸粗品溶液中的杂质含量没有明显的变化，紫草酸的含量也没有明显的变化。优选的，步骤三中的大孔吸附树脂，选用聚苯乙烯-聚乙烯苯为骨架的树脂，吸附后采用水洗脱树脂。更优选的，所述大孔吸附树脂型号为Hz816、XAD-4或者大孔吸附树脂微球1号。优选的，步骤三中pH调节至6-8，选用盐酸、醋酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等常见的非氧化性酸、碱。申请人发现，步骤三中对pH的调节，对与本专利技术中制备高纯度的紫草酸非常重要，如果浓缩液上柱pH低于6或者高于8，则紫草酸的收率会显著降低。优选的，步骤三中树脂柱的高径比为3-15：1。优选的，步骤三中水洗脱体积为柱体积的3-10倍。步骤四中纯度超过98％的紫草酸样品溶液，经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末。浓缩方法可以是常压、低压真空浓缩、喷雾干燥法、冷冻干燥法中单一的方法或者是这几种方法的混合。进一步地，本专利技术步骤二中，采用两步法制备紫草酸粗品溶液，步骤如下：a)将丹参提取液pH调节至12-14，30-50℃搅拌反应1-2小时；b)步骤a)中所得溶液pH调节至10-11在10-30℃范围内搅拌反应2-5小时，得到紫草酸粗品溶液。优选地，步骤a)中将丹参提取液pH调节至13，35-40℃搅拌反应1-2小时。优选地，步骤b)中将a)中所得溶液pH调节至10.5在10-25℃范围内搅拌反应2-5小时。申请人在实验过程中偶然的发现，上述两步调节pH分段加热的方法，能够显著增加紫草酸粗品溶液中的紫草酸含量，与仅调节一次pH至10-14反应2-10小时相比，所得的紫草酸粗品溶液中的紫草酸含量能够提高30-50％，且紫草酸粗品溶液中杂质含量明显减少，非常有利于后续的分离纯化。本专利技术克服了已有紫草酸纯化方法中产物纯度低、产量小、生产工艺复杂、生产成本高等缺点，最终紫草酸的纯度超过98％，得率超过1％(以丹参干药材计算)。本专利技术采用的HPLC检测条件为：安捷伦高效液相色谱仪(HP1100)，采用C18色谱柱，流动相组成为(乙腈：1％甲酸水溶液＝30：70)，流动相流速0.8mL/min，检测波长286nm，进样体积5μL。附图说明图1是实施例1中丹参水提取物的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，3为迷迭香酸。图2是实施例1中经碱处理后的丹参提取液的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，4为原紫草酸，5为丹参素。图3是实施例1中制备的紫草酸的HPLC图谱，紫草酸纯度99.3％。图4是实施例1制备的紫草酸和紫草酸对照品共进样的HPLC图谱。图5是实施例20中经碱处理后的丹参提取液的HPLC图谱；1为丹酚酸B，2为紫草酸，4为原紫草酸，5为丹参素。图6是实施例20制备的紫草酸和紫草酸对照品共进样的HPLC图谱。本专利技术中紫草酸对照品购自上海同田生物技术有限公司，其他试剂及材料均可从市售渠道购买获得。具体实施方式实施例1步骤一、取丹参药材100g，加入1L70％的乙醇水溶液，70℃提取1小时，过滤，滤渣以相同的方法再提取一次，合并两次滤液。步骤二、以氢氧化钠调节滤液至pH12，于室温下搅拌5小时，得紫草酸粗品溶液，HPLC检测图谱如图2所示。将提取液调节pH至2，旋转蒸发仪50℃减压浓缩至原体积的10-30％mL。将pH调至2能够降低样品中的杂质含量。步骤三、500mL大孔吸附树脂微球1号(上海华震科技有限公司)，装柱，高径比5：1。调节浓缩液至pH6.5，过柱吸附，8倍柱体积水洗脱树脂柱，分步收集，HPLC检测。步骤四、合并紫草酸纯度超过98％的样品溶液，冷冻干燥，得纯度99.3％的紫草酸1.82g。实施例2将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为水，其余同实施例1，最终得到纯度98.2％的紫草酸1.21g。实施例3将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为10％的乙醇，其余同实施例1，最终得到98.5％的紫草酸1.41g实施例4将实施例1步骤一中提取丹参药材的溶剂换为90％的乙醇，其余同实施例1，最终得到99.0％的紫草酸1.55g。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高纯度的紫草酸，其特征在于，所述紫草酸的HPLC纯度大于98％，并且所述高纯度的紫草酸的制备方法：包括以下步骤：步骤一、制备丹参提取液向丹参药材中加入所述提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；步骤二、制备紫草酸粗品溶液将丹参提取液pH调节至10‑14，在10‑50℃范围内搅拌反应2‑10小时，得到紫草酸粗品溶液；步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸调节紫草酸粗品溶液至pH5‑10，经过大孔吸附树脂吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98％的紫草酸溶液，步骤四、浓缩干燥纯度超过98％的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末即为所述高纯度的紫草酸。

【技术特征摘要】
1.一种高纯度的紫草酸，其特征在于，所述紫草酸的HPLC纯度大于98％，并且所述高纯度的紫草酸的制备方法：包括以下步骤：步骤一、制备丹参提取液向丹参药材中加入所述提取剂，经过加热提取后，提取液经过滤浓缩，得丹参提取液，所述提取剂为水、甲醇水溶液或乙醇水溶液；步骤二、制备紫草酸粗品溶液将丹参提取液pH调节至10-14，在10-50℃范围内搅拌反应2-10小时，得到紫草酸粗品溶液；步骤三、大孔吸附树脂分离纯化紫草酸调节紫草酸粗品溶液至pH5-10，经过大孔吸附树脂吸附后，采用水洗脱，分步收集洗脱液，HPLC检测，合并纯度超过98％的紫草酸溶液，步骤四、浓缩干燥纯度超过98％的紫草酸溶液经过浓缩干燥，得到紫草酸粉末即为所述高纯度的紫草酸。2.如权利要求1所述的高纯度的紫草酸，其中步骤一中提取溶剂为水时，提取温度为80-100℃；提取溶剂为乙醇或甲醇溶液时，提取温度为50-70℃。3.如权利要求1所述的高纯度的紫草酸，其中步骤二中还包括将所得的紫草酸粗品溶液调pH为2-4，减压浓缩至粗品溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：阚士东，
申请(专利权)人：兰赫上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31