在不同研究中已证实WW-结合蛋白2(WBP2)为酪氨酸激酶底物，激活ERα/PR转录并在乳腺癌中起作用。然而，WBP2酪氨酸磷酸化在调节ER功能和乳腺癌生物学中的作用是未知的。这里，我们确定WBP2为雌激素信号传导经由EGFR串话的酪氨酸磷酸化靶标。使用显性失活的、组成型活化的突变体、RNAi和药理学研究，我们证实WBP2在Tyr192和Tyr231处的磷酸化可以通过c-Src和c-Yes激酶来调节。我们进一步证实消除WBP2磷酸化修复>60%的ERα报道活性，据推定这是通过阻断WBP2的核进入及其与ERα的相互作用。与载体对照相比，MCF7中WBP2及其磷酸化模拟突变体的过表达导致小鼠中较大的肿瘤，诱导细胞-细胞粘附的丧失，以雌激素依赖性和不依赖性方式增加细胞增殖、贴壁不依赖性生长、迁移和侵袭，这些事件基本上可以通过磷酸化缺陷突变体的过表达来消除。Wnt/β-连环蛋白抑制物FH535比他莫昔芬和氟维司群更显著地阻断磷酸化WBP2介导的癌细胞生长，部分是通过诱导ERα的表达。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】酪氨酸-磷酸化的WBP2，一种新的癌症靶和生物标记物相关申请的交叉引用本申请要求于2010年8月30日提交的新加坡专利申请第201006302-2号的权益，其全部内容援引加入本文。
本专利技术一般涉及确定癌症的倾向或者诊断和/或治疗癌症的方法和试剂盒。
技术介绍
本专利技术的背景的以下讨论是为了促进本专利技术的理解。但是，应当理解该讨论不是承认或允许所提及的任何材料在本申请的优先权日期是公开的、已知的或任何管辖范围中常见的一般知识的部分。通过核激素受体增强基因转录包括其通过蛋白-蛋白相互作用与共激活蛋白和基础转录复合物相互作用(1,2)。共激活蛋白可以作为转录接头发挥作用，或者通过组氨酸乙酰转移酶(HAT)或核小体重塑复合物修饰染色质。此外，共激活蛋白调节mRNA转运、翻译以及合成蛋白的翻译后修饰。一些已知的核激素受体共激活蛋白包括共激活蛋白的p160家族成员、SRC-1、SRC-2[TIF-2/GRIP-l/NCoA-2]、SRC-3[pCIP/ACTR/AIB-l/RAC-3/TRAM-1]、NRIF-3、E6-AP和WBP2。由于它们的多效作用，转录共激活蛋白作为在癌症发展中越来越多涉及的一组蛋白出现并不令人惊讶(3-5)。转录共激活蛋白常进行翻译后修饰，例如磷酸化。SRC/pl60家族蛋白的特定成员的磷酸化可以增加它们的核定位(6)，抑制它们与非核受体激活蛋白的相互作用(7)或者刺激它们内在的共激活蛋白活性(8)。AIB1和PGC-1的磷酸化调节它们的半衰期和活性(9,10)。此外，通过Pak1磷酸化NRIF3会通过增加的ERa-NRIF3相互作用促进ERa反式激活(5)。WW-结构域结合蛋白(WBP2)为转录共激活蛋白，据证实其通过激素依赖性ERα/PR-WBP2相互作用选择性和特异性地增强ERa和PR反式激活并将WBP2募集至激素应答元件(11)。WBP2包含内在的激活结构域。其3个聚脯氨酸(PPXY)基序之一-PY3对于其在ERα/PR反式激活中的共激活功能是必需的。其共激活蛋白活性可以通过YAP(Yes激酶相关蛋白)进一步增强，YAP还调节几种转录因子，例如p73(12)、Runx2(13)、TEAD/TEF(14)和ErbB4(15)。我们以前的研究已鉴定WBP2为新的酪氨酸激酶底物，其在乳腺癌发展的MCF10AT模型中表现出差异性磷酸化(16)。随后证实外源表达的WBP2是EGFR的真实靶标。我们假设EGFR介导的WBP2的酪氨酸磷酸化在调节ERa功能和乳腺癌生物学中起作用。因此我们试图描绘EGFR介导的WBP2的酪氨酸磷酸化的信号传导途径并研究WBP2磷酸化对其共激活蛋白活性的影响。还研究WBP2及其酪氨酸磷酸化对ER阳性乳腺癌生物学的作用以及深层机制。
技术实现思路
因此，本专利技术的一方面包括一种检测患者的癌症的方法，所述方法包括以下步骤：a)测量在分离自患者的第一样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量；以及b)将样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量与分离自正常的非癌性细胞的第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量进行比较，其中相对于第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，第一样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量的增加指示在第一样品中存在癌症。优选地，第一和第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQEDNo.1的多肽的量还检测在SEQIDNo.1的多肽的Y231处酪氨酸的磷酸化，其中相对于第二样品中在Y192和Y231处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，第一样品中在Y192和Y231处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量的增加指示在第一样品中存在癌症。优选地，癌症是由EGFR、c-Src、c-Yes、ER、Wnt、WBP2或E2F表达或活性引起，或者起始于或依赖于EGFR、c-Src、c-Yes、ER、Wnt、WBP2或E2F表达或活性。优选地，用分离的磷酸化位点特异性抗体测量具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，所述抗体仅当SEQIDNo.1的多肽在酪氨酸Y192、或酪氨酸Y231、或酪氨酸Y192和酪氨酸Y231处磷酸化时特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白，其中当SEQIDNo.1的多肽在所述酪氨酸处未磷酸化时所述抗体不结合SEQIDNo.1的多肽。优选地，所述方法还包括以下步骤：a)使SEQIDNo.1的多肽与多核苷酸探针或引物接触，所述多核苷酸探针或引物包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列仅在SEQIDNo.1的多肽于酪氨酸Y192、或酪氨酸Y231、或酪氨酸Y192处磷酸化时在合适的杂交条件下能够选择性地杂交至SEQIDNo.1的多肽；以及b)检测所述探针或引物与在所述酪氨酸处磷酸化的SEQIDNo.1的多肽之间形成的任何双链体。6.权利要求1-3中任一项的方法，其中用分离的磷酸化位点特异性适体测量具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，所述适体仅当SEQIDNo.1的多肽在酪氨酸Y192或Y231或者酪氨酸Y192和酪氨酸Y231处磷酸化时特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白，其中当SEQIDNo.1的多肽在所述酪氨酸处未磷酸化时所述适体不结合SEQIDNo.1的多肽。本专利技术的另一方面包括干扰SEQIDNO.1的多肽中酪氨酸Y192和/或Y231的磷酸化的物质。优选地，所述物质包含仅当SEQIDNo.1的多肽在酪氨酸Y192、Y231或酪氨酸Y192和酪氨酸Y231处磷酸化时特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白的分离的磷酸化位点特异性抗体，其中所述抗体在所述酪氨酸未磷酸化时不结合SEQIDNo.1的多肽。优选地，所述抗体是包含免疫球蛋白重链的免疫球蛋白。优选地，所述抗体是包含免疫球蛋白轻链的免疫球蛋白。优选地，所述免疫球蛋白是IgG1κ免疫球蛋白。优选地，所述免疫球蛋白在免疫球蛋白的重链内包含人IgG1恒定区，并且在免疫球蛋白的轻链内包含人恒定区。在一实施方案中，所述免疫球蛋白在重链内和轻链内包含完整的或部分的人框架区。在一实施方案中，所述免疫球蛋白在重链内和轻链内包含鼠框架区。优选地，所述抗体能够在细胞系中产生。优选地，所述物质包含仅当SEQIDNo.1的多肽在酪氨酸Y192或者酪氨酸Y192和酪氨酸Y231处磷酸化时特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白的分离的磷酸化位点特异性适体，其中所述适体在所述酪氨酸未磷酸化时不结合SEQIDNo.1的多肽。在一实施方案中，所述物质包含小干扰RNA如SEQIDNO.2。本专利技术的另一方面包括本专利技术的物质，其用于治疗癌症。优选地，本专利技术的物质用于治疗乳腺癌和肺癌。优选地，本专利技术的物质还包含式1的FH535化合物。本专利技术的另一方面包括包含本专利技术的物质和式1的FH535化合物的组合物。本专利技术的另一方面包括一种治疗患有癌症的患者的方法，所述方法包括以下步骤：(a)向患者施用干扰SEQIDNO.1的多肽中酪氨酸Y192和/或Y231的磷酸化的物质。附图说明本专利技术的优选实施方案本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.30 SG 201006302-21.抗体在制备用于通过以下方法检测患者中的乳腺癌或肺癌的试剂盒中的用途，所述方法包括以下步骤：a)测量在分离自所述患者的第一样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量；以及b)将所述样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量与分离自正常的非癌性细胞的第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量进行比较，其中相对于所述第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，所述第一样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量的增加指示在所述第一样品中存在乳腺癌或肺癌，其中用特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白的抗体测量具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，其中所述抗体仅当所述多肽在酪氨酸Y192或者酪氨酸Y192和酪氨酸Y231处磷酸化时特异性结合SEQID.NO.1的WW-结构域结合蛋白，其中当SEQIDNo.1的多肽在所述酪氨酸处未磷酸化时所述抗体不结合SEQIDNo.1的多肽。2.权利要求1的用途，其中所述抗体是分离的磷酸化位点特异性抗体。3.权利要求1或2的用途，其中所述第一和第二样品中在Y192处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量还检测在SEQIDNo.1的多肽在Y231处的酪氨酸的磷酸化，其中相对于所述第二样品中在Y192和Y231处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量，所述第一样品中在Y192和Y231处具有磷酸化的酪氨酸的SEQIDNo.1的多肽的量的增加指示在所述第一样品中存在乳腺癌或肺癌。4.权利要求1或2的用途，其中所述乳腺癌或肺癌依赖于EGFR、c-Src、c-Yes、ER、Wnt、WBP2或E2F。5.权利要求1或2的用途，其中所述第一和第二样品分离自细胞的核级分。6.一种适于干扰SEQIDNO.1的多肽中酪氨酸Y192和/或Y231的磷酸化的物质，其中所述物质包含对应于SEQID.NO.1的一部分的肽，所述SEQID.NO.1的一部分包括酪氨酸Y192或Y231或Y192和Y231以及酪氨酸Y192或Y231或Y192和Y231任一侧的氨基酸，且所述肽还包括核定位...
【专利技术属性】
技术研发人员：林允斌，
申请(专利权)人：新加坡国立大学，
类型：
国别省市：
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