猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒，包括100?L?DL2000、20?L?RT-PCR一步法酶、250?L酶缓冲液、300?L?RNase?Free?dH2O、80?L混合引物（浓度各为10μmol/L）、20?L阳性对照及20?L阴性对照。本发明专利技术根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）ORF7?N基因、猪乙型脑炎病毒（JEV）NS1基因序列，设计了2对引物，通过反应条件的优化，成功研制了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪乙型脑炎病毒的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒，它对这两种病毒具有敏感性、特异性。可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种试剂盒，尤其是一种猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起怀孕母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状的传染病，俗称猪蓝耳病。乙型脑炎病毒(JEV)又称日本脑炎病毒，是一种人畜共患的病毒性传染病，导致母猪繁殖障碍和人的中枢神经系统疾病，该病不但影响畜牧业尤其是养猪业的发展，而且严重威胁人类健康[3-5]。随着规模化养猪的不断发展，由PRRSV和JEV引起的繁殖障碍较为严重，并常常发生混合感染，给养猪业造成了巨大的经济损失[6]。目前，PRRSV和JEV主要的检测方法有病毒分离鉴定、微量血清中和试验、ELISA、单一病毒RT-PCR，然而这些诊断方法存在操作繁杂、敏感性低、费时费力等不足。
技术实现思路
本专利技术的目的是:提供一种猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒，它能够对临床样品中猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎单独或混合感染进行快速、准确的检测及鉴定，该诊断试剂盒的敏感性好、特异性高。本专利技术是这样实现的:猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT?PCR诊断试剂盒，其特征在于：包括100μL?DL2000、20μL?RT?PCR一步法酶、250μL?酶缓冲液、300μLRNase?Free?dH2O、80μL混合引物，各引物的浓度均为10μmol/L、20?μL阳性对照及?20μL阴性对照；混合引物包括PRRSV?上游引物、PRRSV?下游引物、JEV上游引物及JEV下游引物；PRRSV?上游引物的序列为：5’?–CGCCCAACAAAACCAGTCCAGA–3’，PRRSV?下游引物的序列为：5’–CAGTATATTGCTCGGCAAACT–3’；JEV上游引物的序列为：5’?–TCC...

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合症和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒，其特征在于:包括IOOKL DL2000、2(^L RT-PCR 一步法酶、250μ 酶缓冲液、30(^LRNase Free (1Η20、80μ 混合引物，各引物的浓度均为10 μ mol/L、20 PL阳性对照及20μ 阴性对照；混合引物包括PRRSV上游引物、PRRSV下游引物、JEV上游引物及JEV下游引物；PRRSV上游引物的序列为:5 ’ - CGCCCAACAAAACCAGTCCAGA - 3 ’，PRRSV 下游弓丨物的序列为:5’ - CAGTATATTGCTCGGCAAACT - 3’ JEV上游弓丨物的序列为:5’ -TCCTCGTCATAGGGATTTGCT-3’，JEV下游引物的序列为:5’-AGGCCCAAGGCGTGAGGGCGG - 3，。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：余波，冉懋韬，谭诗文，史开志，
申请(专利权)人：贵州省畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：