【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒检验检测领域，具体涉及针对M基因和HA基因检测甲型HlNl流感病毒变异株的多靶点检测用引物、相应的试剂盒及检测方法。
技术介绍
甲型HlNl流感于2009年4月由墨西哥开始，造成了全球大流行的疫情。序列进化分析显示，该病毒为一个新型甲型流感变异株，与人类季节性HlNl流感病毒和经典HlNl猪流感病毒，存在明显差异。序列分析显示它的8个基因片段具有明显特殊性。但其HA片段与北美猪流感病毒HA片段同源性最高，为95 %左右；NA和M与欧亚猪源病毒片段最为相近，同源性分别为92%和97%。因此在实际的诊断与检测中，采用核酸扩增方法进行鉴别时，必须进行仔细的序列比对分析，才能确保诊断与检测的准确性。 由于PCR检测技术以其灵敏性、特异性、高效性而最为通用，在甲型HlNl流感暴发后国内外很多学者研究建立了荧光RT-PCR检测方法用于检测甲型HlNl流感病毒(2009变异株)流感病毒。但是，荧光RT-PCR检测方法也存在检测中发生假阴性或假阳性的可能。
技术实现思路
针对现有技术不足，本专利技术提供了一种可靠的多基因靶点检测甲型HlNl流感病毒变异株的方法和试...
【技术保护点】
一种用于检测甲型H1N1流感病毒变异株的试剂盒，该试剂盒含有如下的多组引物：一组针对M基因检测所有甲型流感病毒的引物，其序列如下所示：1)5’?GAA?TGG?CTA?AAG?ACA?AGA?CC?3′(SEQ?ID?NO：1)2)5’?GCT?GCA?GTC?CTC?GCT?CAC?T?3’(SEQ?ID?NO：2)其中序列1)和2)分别为检测所有甲型流感病毒M基因的正义引物和反义引物,反义引物的5’端标记报告荧光基团FAM(6?carboxy?荧光素)；一组针对HA基因检测所有H1N1的流感的引物，其序列如下所示：3)5’?GCA?GAT?CAA?AAG?AGC?ACA...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测甲型HlNl流感病毒变异株的试剂盒，该试剂盒含有如下的多组引物: 一组针对M基因检测所有甲型流感病毒的引物，其序列如下所示:1)5’-GAA TGG CTA AAG ACA AGA CC-3' (SEQ ID NO:1)2)5，-GCTGCA GTC CTC GCT CAC T-3，(SEQ ID NO:2) 其中序列I)和2)分别为检测所有甲型流感病毒M基因的正义引物和反义引物，反义引物的5’端标记报告突光基团FAM(6-carboxy_突光素); 一组针对HA基因检测所有HlNl的流感的引物，其序列如下所示:3)5，-GCAGAT CAA AAG AGC ACA CAA AAT-3' (SEQ ID NO:3)4)5’-CCA AAG TTC TTT CAT TTT CCA AT-3’ (SEQ ID NO:4) 其中序列3)和4)分别为检测所有HlNl流感病毒HA基因的正义引物和反义引物，反义引物的5’端标记报告突光基团FAM(6-carboxy_突光素)； 一组针对HA基因检测甲型HlNl流感病毒2009变异株的引物序列，其序列如下所示:5)5，-CATTCG CAA TGG AAA GAA A~3' (SEQ ID NO:5)6)5，-TCCTCA ATC CTG TGG CCA G_3，(SEQ ID NO:6) 其中序列5)和6)分别为检测甲型HlNl流感病毒(2009变异株)HA基因的正义引物和反义引物，反义引物的5’端标记报告突光基团FAM(6-carboxy-突光素)； 一组针对人类beta-2-microglobulin基因检测样品中人体组织的弓I物序列，其序列如下所示:7)5’-CCA GCA GAG AAT GGA AAG T-3' (SEQ ID NO:7)8)5，-GATGCT GCT TAC ATG TCT CG-3’ (SEQ ID NO:8) 其中序列7)和8)分别为检测人类beta-2-microglobulin基因的正义引物和反义引物，反义引物的5’端标记报告突光基团FAM(6-carboxy-突光素)。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有如下的成分: (1)、RT-PCR反应液，包括 1-10 X RT 缓冲液、SEQ ID NO: 1、SEQID NO:3、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:7正义引物混合、RT-PCR酶和dNTP; (2)、PCR反应液，包括1-10XPCR缓冲液、MgCl2、SEQID NO: 1-8共8种引物混合、TaqDNA聚合酶和dNTP ； (3)、纯水； (4)、阴性对照:流感病毒阴性样品RNA； (5)、阳性对照:甲型HlNl流感病毒2009变异株阳性样品RNA。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述试剂...
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