制备模块融合蛋白表达产物的方法技术

本发明专利技术涉及制备模块型嵌合蛋白表达产物的方法以及用于所述方法的组合物。具体地说，本发明专利技术涉及顺次、定向克隆编码多肽模块的多核苷酸。各可克隆元件或模块含有侧接预定的限制性位点的感兴趣开放读框。这些方法包括利用模块和含有这些模块的载体作为重组DNA技术的起始材料。本发明专利技术的优点之一是能快速而方便地制备融合蛋白的许多变体，而无需设计和评估后续的各克隆步骤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学方法 和实施该方法的产品。更具体地说，本专利技术涉及编码模块型蛋白质的核酸的克隆方法，所述模块可顺序加入预定位置。
技术介绍
本领域已知克隆核酸的重组DNA技术和分子生物学方法。这种方法包括利用限制性内切酶、连接酶、核苷酸/核苷激酶和磷酸酶、聚合酶及其它分子生物学工具操作核酸，从而产生所需的重组核酸。已出版的几种实验室手册可以作为分子生物学研究者的参考书籍。这些参考手册的例子包括:Sambrook, J.，E.F.Fritsch和T.Maniatis, 1989,《分子克隆:实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第二版,冷泉港,纽约:冷泉港实验室出版社；Joseph Sambrook和David Russell, 2001,《分子克隆:实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第三版,冷泉港，纽约:冷泉港实验室出版社。本领域的问题之一是缺乏方法来工程改造嵌合蛋白质表达产物，而能方便地将模块元件插入嵌合体内所需位置。总之，虽然已成功制备了杂交或嵌合蛋白质，但本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种载体，其含有以下每一种元件，这些元件顺次排列而形成模块型开放读框，所述载体包含：a)编码第一组氨基酸的第一限制性位点，其中此第一组氨基酸包括至少两个氨基酸；b)编码感兴趣多肽的第一开放读框，其中此感兴趣多肽的编码序列与上述第一限制位点的至少两个氨基酸的编码序列同在框内；c)编码第二组氨基酸的第二限制性位点，其中此第二组氨基酸包括至少两个氨基酸，其中上述第二限制性位点的第二组氨基酸编码序列与上述第一开放读框的感兴趣多肽编码序列同在框内，其中上述第二限制性位点的多核苷酸序列与第一限制性位点的多核苷酸序列不同；d)间隔臂多核苷酸序列，其中此间隔臂多核苷酸序列编码至少3个间隔氨基酸，其中此间隔臂序...

【技术特征摘要】
2005.10.19 US 60/728,2591.一种载体，其含有以下每一种元件，这些元件顺次排列而形成模块型开放读框，所述载体包含: a)编码第一组氨基酸的第一限制性位点，其中此第一组氨基酸包括至少两个氨基酸； b)编码感兴趣多肽的第一开放读框，其中此感兴趣多肽的编码序列与上述第一限制位点的至少两个氨基酸的编码序列同在框内； c)编码第二组氨基酸的第二限制性位点，其中此第二组氨基酸包括至少两个氨基酸，其中上述第二限制性位点的第二组氨基酸编码序列与上述第一开放读框的感兴趣多肽编码序列同在框内，其中上述第二限制性位点的多核苷酸序列与第一限制性位点的多核苷酸序列不同； d)间隔臂多核苷酸序 列，其中此间隔臂多核苷酸序列编码至少3个间隔氨基酸，其中此间隔臂序列的编码序列与上述第二限制性位点的多核苷酸序列同在框内；和 e)编码第三组氨基酸的第三限制性位点，其中此第三组氨基酸包括至少两个氨基酸，其中上述第三限制性位点的第三组氨基酸编码序列与上述至少3个间隔氨基酸的编码序列同在框内，其中上述第三限制性位点的多核苷酸序列与第一限制性位点的多核苷酸序列不同，并且第三限制性位点与第二限制性位点的多核苷酸序列不同； 其中元件(a)-(e)彼此同框相连从而形成模块型开放读框。2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述第一限制性位点易受限制性酶作用而产生含有至少2个核苷酸的第一单链突出端，所述第二限制性位点易受限制性酶作用而产生含有至少2个核苷酸的第二单链突出端，其中所述第一和第二突出端彼此互补，从而使所述第一和第二突出端在合适条件下能彼此退火。3.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述第一限制性位点包含NgoMIV限制性酶识别的多核苷酸序列。4.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述第二限制性位点包含XmaI限制性酶识别的多核苷酸序列。5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述第三限制性位点包含CIaI限制性酶识别的多核苷酸序列。6.如权利要求1所述的载体，其特征在于，还包含与所述模块型开放读框的5’部分操作性相连的启动子。7.如权利要求6所述的载体，其特征在于，所述启...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·里德，
申请(专利权)人：英特瑞克斯顿股份有限公司，
类型：发明
国别省市：