结合人CD27的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术公开了与人CD27结合的分离的单克隆抗体以及相关的基于抗体的组合物和分子。还公开了使用所述抗体的治疗和诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合人CD27的抗体及其用途
技术介绍
T细胞和抗原呈递细胞之间的相互作用涉及有利于产生免疫应答的多种辅助分子。一种这样的分子为CD27，其结合CD70并属于肿瘤坏死因子受体(TNF-R)超家族(Ranheim EA，等，Blood.1995 June 15 ；85(12):3556-65)。CD27 一般以糖基化的 1 型跨膜蛋白存在，形式通常为具有连接两个单体的二硫桥的同源二聚体。二硫桥处于靠近细胞膜的胞外域中(Camerini等，J Immunol.147:3165-69 (1991)。CD27也可以可溶形式表达(参见例如，van Oers MH,等，Blood.1993 Dec I ；82 (11):343O-6 和 Loenen WA,等，Eur.J.1mmunol.22:447，1992)。在T细胞上交联⑶27抗原提供协同刺激信号，其与T细胞受体交联一起可诱导T细胞增殖和细胞免疫活化。⑶27在以下细胞上表达:成熟胸腺细胞、大多数⑶4+和⑶8+外周血T细胞、自然杀伤细胞和 B 细胞(Kobata T，等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA.1995Nov 21 ；92(24):11249-53)。⑶27还在B细胞非霍奇金淋巴瘤和B细胞慢性淋巴细胞白血病中高表达(Ranheim EA，等，Blood.1995 Jun 15 ；85(12):3556-65)。另外，已在寄生虫感染、巨细胞病毒(CMV)感染、结节病、多发性硬化和B细胞慢性淋巴细胞白血病中的血清或疾病活动性部位鉴定了可溶性 CD27 蛋白水平升高(Loenen WA,等，Eur.J.1mmunol.22:447,1992)。最近已表明，激动性抗⑶27单克隆抗体可促进T细胞应答，并有望作为抗癌治疗剂(参见例如，Sakanishi T，等，Biochem Biophys.Res.Commun.2010 Feb 18 和 WO2008/051424)。然而，虽然迄今为止获得的结果将⑶27确立为免疫疗法的有用靶标，但仍然未知的是，抗CD27单克隆抗体的哪些具体特征对治疗目的尤为有利。因此，本领域仍然需要深入了解使抗CD27抗体在治疗学上有效的具体功能特性，以及对治疗和/或预防疾病更有效的改进型治疗性抗CD27抗体。专利技术概沭本专利技术特别提供分离的抗CD27抗体，其具有可与有利和期望的治疗效果相关联的特定功能特性。具体地讲，通过本专利技术已生成和表征了能够上调T细胞介导的免疫应答(例如，通过抗原特异性T细胞应答的诱导或增强而表明)的抗CD27单克隆抗体，其尤其适合与疫苗疗法相结合。在一个实施方案中，激动剂抗CD27抗体通过与活疫苗相结合或通过增强内源性免疫应答可增强对癌症或感染性疾病的免疫应答。此类抗体还可以直接或间接诱导细胞因子表达。另外，已经生成并表征了尤其适合治疗免疫疾病(诸如移植排斥、过敏和自身免疫疾病)的下调T细胞介导的免疫应答的抗CD27抗体。此外，已经生成并表征了对治疗多种涉及细胞增殖的疾病(如，癌症)尤其有效的通过直接细胞杀伤机制(如，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDCC))抑制CD27表达细胞生长的抗⑶27抗体。在一个实施方案中，本专利技术的抗⑶27抗体表现出以下特性中的一种或多种:(a)在10 μ g/ml的抗体浓度下阻断s⑶70与⑶27的结合达至少约70% ；(b)以1(Γ9Μ或更小的平衡解离常数Kd，或者作为另外一种选择，以IO+9IT1或更大的平衡缔合常数Ka与人CD27结合；(C)在3 μ g/ml的抗体浓度和约6%的兔血清补体下诱导至少10%的⑶27表达细胞的特异性补体介导的细胞毒性(CDC)；(d)在3μ g/ml的抗体浓度以及75: I的效应子:靶细胞比率下诱导至少10%的CD27表达细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)特异性裂解；(e)与未施用抗体的小鼠相比，当以0.3mg每周至少两次施用(腹腔注射)3周时，在体内肿瘤细胞接种(5 X IO5个Raji细胞或I X IO6个Daudi细胞)后的重症综合性免疫缺陷(SCID)小鼠中改善中位生存达至少20% ；(f)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性免疫应答；(g)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性THl免疫应答；(h)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性T细胞增殖或活化；⑴降低或抑制T细胞增殖或活化；(j)与同时、单独或顺序的TCR活化相结合时诱导或增强T细胞活性；(k)在10 μ g/ml的抗体浓度下阻断s⑶70与⑶27的结合达至少约70%，并且当不能与Fe受体结合或与Fe受体的结合减少时降低或抑制T细胞活性；(I)当以3mg/kg(静注)施用时在紧接施用后的29天内导致恒河猴CD3+T细胞(而非NK细胞)低于50%的去除；或(m)当以3mg/kg (静注)施用时在紧接施用后的29天内导致恒河猴记忆B细胞低于50%的去除。 在一个特定的实施方案中，本专利技术的抗体表现出这些功能特性的组合。因此，在一个方面，本专利技术提供诱导和/或增强免疫应答(如，T细胞介导的免疫应答)的抗CD27抗体。在又一个实施方案中，该抗体抑制细胞上CD70与CD27的结合。具有这些特性组合的特定抗体包括含有下述重链和/或轻链可变区序列的mAb 1F5，所述序列分别含有SEQ ID N0:37和/或43。作为另外一种选择，该抗体不抑制细胞上⑶70与CD27的结合。具有这些特性组合的特定抗体包括含有下述重链和/或轻链可变区序列的mAb 3H8，所述序列分别含有SEQ ID NO:7和/或13 ;或者7和/或19。此类抗⑶27抗体也可具有与所述抗体不同结合特异性的第二分子(例如，作为双特异性分子)连接，诸如T细胞受体(如 CD3、CD25、CD137、CD154_)或 Fe 受体(如，Fe Y RI (CD64)、Fc Y RIIA(CD32)、Fe yRIIB1(CD32)、Fe Y RIIB2 (CD32)、Fe Y RIIIA (CD16a)、Fe γ RIIIB (CD16b)、Fe ε R1、Fe ε RII(CD23)、FcaRI(CD89)、Fca/^I^PFcRn)或 NK 受体(如 CD56)或 B 细胞受体(如CD19、CD20)。根据本专利技术的旨在用于诱导或增强免疫应答的抗体可具有允许与Fe受体结合的功能性Fe结构域，并可包括具有增强的与Fe受体结合水平的突变Fe结构域。在另一方面，本专利技术提供这样的抗CD27抗体，其通过抑制表达这些蛋白质的细胞上CD27与CD70的结合而下调T细胞介导的免疫应答。在一个特定的实施方案中，该抗体抑制可溶性⑶70 (s⑶70)与⑶27表达细胞的结合达至少约70%。属于此类别的特定抗体包括例如包含下述重链和/或轻链可变区序列的mAb，所述序列含有SEQ ID NO:37和/或43 (mAb 1F5)、SEQ ID NO:49 和 / 或 55 (mAb 1H8)或 SEQ ID NO: 103 和 / 或 109 (mAb 3H12)。在又一方面，本专利技术提供这样的抗CD27抗体，其诱导或增强效应细胞功能(例如，通过ADCC和/或CDC杀伤细胞)。在一个实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.04.13 US 61/323,720;2011.04.04 US 61/471,4591.一种与人CD27结合的分离的人或人源化单克隆抗体，其中所述抗体表现出以下性质中的至少一种: (a)在10μ g/ml的抗体浓度下阻断s⑶70与⑶27的结合达至少约70% ； (b)以10_9M或更小的平衡解离常数Kd，或者作为另外一种选择，以IO+9M4或更大的平衡缔合常数Ka与人CD27结合； (c)在3μ g/ml的抗体浓度和约6%的兔血清补体下诱导至少10%的⑶27表达细胞的特异性补体介导的细胞毒性(CDC)； (d)在3μ g/ml的抗体浓度以及75: I的效应子:靶细胞比率下诱导至少10%的⑶27表达细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)特异性裂解； (e)与未施用抗体的小鼠相比，当以0.3mg每周至少两次施用(腹腔注射)3周时，在体内肿瘤细胞接种(5X 1O5个Raji细胞或I X IO6个Daudi细胞)后的重症综合性免疫缺陷(SCID)小鼠中改善中位生存达至少20% ； (f)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性免疫应答； (g)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性THl免疫应答； (h)与疫苗或内源性抗原相结合诱导或增强抗原特异性T细胞增殖或活化； (i)降低或抑制T细胞增殖或活化； (j)与同时、单独或顺序的TCR活化相结合时诱导或增强T细胞活性； (k)在10 μ g/ml的抗体浓度下阻断s⑶70与⑶27的结合达至少约70%，并当不能与Fe受体结合或与Fe受体的结合减少时降低或抑制T细胞活性； (I)当以3mg/kg(静注)施用时在紧接施用后的29天内导致恒河猴CD3+T细胞(而非NK细胞)低于50%的去除；或 (m)当以3mg/kg(静注)施用时在紧接施用后的29天内导致恒河猴记忆B细胞低于50%的去除。2.一种分离的单克隆抗体，其与人CD27结合并诱导或增强对抗原的免疫应答。3.根据权利要求2所述的抗体，其诱导或增强THl免疫应答。4.一种分离的单克隆抗体，其与人CD27结合并诱导或增强对抗原的免疫应答，其中所述抗体诱导或增强T细胞增殖或活化。5.根据权利要求4所述的抗体，其中所述抗体诱导或增强CD8+T细胞增殖或活化。6.根据权利要求4或5所述的抗体，其中所述抗体还抑制细胞上CD70与CD27的结合。7.根据权利要求2-6中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:37和/或43。8.根据权利要求2-5中任一项所述的抗体，其中所述抗体与人CD27结合并且不会显著抑制细胞上⑶70与⑶27的结合。9.根据权利要求8所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID勵:7、13和/或19。10.根据权利要求2-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含能够与Fe受体有效结合的Fe区。11.一种包含根据权利要求2-10中任一项所述的抗体的双特异性分子，所述抗体与具有与其不同的结合特异性的第二分子连接。12.根据权利要求11所述的双特异性分子，其中所述第二分子与T细胞受体结合。13.根据权利要求12所述的双特异性分子，其中所述T细胞受体选自由CD3、CD40和⑶25组成的组。14.根据权利要求11所述的双特异性分子，其中所述第二分子与Fe受体结合。15.根据权利要求11所述的双特异性分子，其中所述第二分子与NK受体结合。16.一种与人CD27结合并抑制细胞上CD70与CD27结合的分离的单克隆抗体，其中所述抗体在10 μ g/ml的抗体浓度下抑制s⑶70与⑶27表达细胞的结合达至少约70%以及抑制或降低对抗原的免疫应答。17.根据权利要求16所述的抗体，其抑制或降低T细胞增殖或活化。18.根据权利要求16或17所述的抗体，其抑制或降低CD8+T细胞增殖或活化。19.根据权利要求16-18中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:37、43、49、55、103 和 / 或 109。20.根据权利要求16-18中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:37和/或43。21.根据权利要求16-20中任一项所述的抗体，其中所述抗体为不含功能性Fe结构域的片段。22.根据权利要求16-20中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含显示出与Fe受体的结合降低或无结合的突变Fe区。23.一种与人CD27结合并诱导或增强效应细胞功能的分离的单克隆抗体，其中所述抗体在10 μ g/ml的抗体浓度下诱导至少约40%的⑶27表达细胞的ADCC特异性裂解或在10 μ g/ml的浓度下诱导至少约40%的⑶27表达细胞的补体介导的细胞毒性(OTC)。24.根据权利要求23所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:61、67、85、91、97、37、43、49、55、19、49、55、103 和 / 或 109。25.根据权利要求23-24中任一项所述的抗体，其中所述抗体抑制细胞上CD70与CD27的结合。26.根据权利要求25所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:37、43、49、55、19、103和/或109。27.根据权利要求23或24所述的抗体，其中所述抗体不抑制细胞上CD70与CD27的结口 ο28.根据权利要求27所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:61、67、85、91、97、7、13和/或19。29.根据权利要求28所述的抗体，其中所述抗体包含SEQID NO:37、43、7、13和/或19。30.根据权利要求23-29中任一项所述的抗体，其中所述抗体为全长抗体。31.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含对Fe受体的第二结合特异性。32.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述CD27表达细胞为B细胞。33.根据权利要求1-31中任一项所述的抗体，其中所述CD27表达细胞为T细胞。34.根据权利要求1-31中任一项所述的抗体，其中所述CD27表达细胞为CD8+T细胞。35.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述CD27表达细胞选自由Jurkat细胞、Raji细胞、Ramos细胞和Daudi细胞组成的组。36.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述CD27表达细胞为肿瘤细胞。37.根据前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体选自由IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgAl、IgA2、IgD 和 IgE 抗体组成的组。38.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体与人CD27结合并包含衍生自人种系Vh 3-7或Vh 3-33基因的重链可变区。39.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体与人CD27结合并包含衍生自人种系Vk3-20、Vk 3-11、Vk 1D-16*Vk 1_13 基因的轻链可变区。40.一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体与人CD27结合并包含衍生自人种系Vh 3-7*VH 3-33基因的重链可变区和衍生自人种系Vk 3-20、Vk 3-11, Vk 1D-16或Vk 1_13基因的轻链可变区。41.一种与人⑶27结合的分离的单克隆抗体，其中所述抗体包含含有⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的重链可变区和含有⑶R1、⑶R2和⑶R3序列的轻链可变区，其中所述重链可变区CDR3序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:R(G，E，D) (S，L，G，-) (G，L，T，W，_)(N，A, T，H，-) (V, Τ，-) (Μ, P，-) (G，V, -) (R，-) (G，Μ, -) (D，H，L，Τ，ff) (A, G，N，ff) (D，F，V,Y) (F，L) (D，E) (H，I，L，Y) (SEQ ID NO:113)，其中表示在该共有位置可以不存在氨基酸残基。42.根据权利要求41所述的抗体，其中所述轻链可变区CDR3序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:Q (F, R, Y) (N, S) (N，T，S) (Y，W) P (F，L，P，R) T (SEQ ID NO:114)，其中 表示在该共有位置可以不存在氨基酸残基。43.根据权利要求42所述的抗体，其中所述重链可变区CDR2序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:I(K, ff) (Y，N, Q)DGS(E，N) (K，Q) (SEQ ID NO:115)，其中表示在该共有位置可以不存在氨基酸残基，并且所述轻链可变区CDR2序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:(A，D) AS (SEQ ID NO:116)。44.根据权利要求43所述的抗体，其中所述重链可变区CDRl序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:GF(T，S) (F，L) (S，N) (I，S，H) (Y，H) (SEQ ID NO:117);并且所述轻链可变区⑶Rl序列包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列:Q(D，G，S) (I，V) (D，S) (R，S)(A, ff, Y) (SEQ ID NO:118)。45.一种分离的单克隆抗体，其与人CD27结合并包含选自由下列组成的组的重链和轻链可变区⑶R1、⑶R2和⑶R3序列: ⑴包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的重链可变区CDRl:GF(T, S) (F，L) (S，N) (I, S，H) (Y, H) (SEQ ID NO:117)； ( )包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的重链可变区CDR2:I(K, ff) (Y，N, Q)DGS (E, N) (K, Q) (SEQ ID NO:115)； (iii)包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的重链可变区⑶R3:R(G, E，D) (S，L，G，-) (G，L，T，ff, -) (N，A, Τ, H，-) (V, Τ, -) (Μ, P，-) (G，V, -) (R，-) (G，Μ, -) (D，H，L，Τ, ff) (Α,G, N, ff) (D, F，V, Y) (F，L) (D, Ε) (H, I, L, Y) (SEQ ID NO:113)； ( ν)包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的轻链可变区CDRl:Q(D, G，S) (I，V)(D, S) (R, S) (A, ff, Y) (SEQ ID NO:118)；(v)包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的轻链可变区CDR2:(A，D)AS (SEQ IDNO:116)； (vi)包含选自以下所述共有序列的氨基酸序列的轻链可变区CDR3:Q(F，R，Y)(N, S)(N, T, S) (Y, ff)P(F, L，P，R)T(SEQ ID NO:114);其中表示在该共有位置可以不存在氨基酸残基。46.一种与人CD27结合的分离的单克隆抗体，其中所述抗体包含含有CDR1、CDR2和⑶R3序列的重链和轻链可变区，其中: (a)所述重链可变区CDR3序列包含选自由SEQID NO: 10、28、40、52、64、76、88、106及其保守氨基酸序列修饰组成的组的氨基酸序列；并且 (b)所述轻链可变区CDR3序列包含选自由SEQID NO:16、22、34、46、58、70、82、94、100、112及其保守氨基酸序列修饰组成的组的氨基酸序列。47.根据权利要求46所述的抗体，其中所述重链可变区⑶R2序列包含选自由SEQIDNO:9、27、39、51、63、75、87、105及其保守氨基酸序列修饰组成的组的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR2序列包含选自由SEQ ID NO:15、21、33、45、57、69、81、93、99、111及其保守氨基酸序列修饰组成的组的氨基酸序列。48.根据权利要求47所述的抗体，其中所述重链可变区⑶Rl序列包含选自由SEQIDN0:8、26、38、50、62、74、86、104及其保守氨基酸序列修饰组成的组的氨基酸序列；并且所述轻链可变区CDRl序列选自由SEQ ID NO:14、20、32、44、56、68、80、92、98、110及其保守氨基酸序列修饰组成的组。49.一种与人CD27结合的分离的单克隆抗体，其中所述抗体包含: ⑴包含SEQ ID NO:38的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:39的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:40的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:44的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:45的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:46的轻链可变区CDR3 ； (ii)包含SEQID NO:50的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:51的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:52的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:56的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:57的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:58的轻链可变区CDR3 ；(iii)包含SEQID NO:104的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:105的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:106的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:110的轻链可变区⑶Rl ； 包含SEQ ID NO:111的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:112的轻链可变区CDR3 ； (iv)包含SEQID NO:86的重链可变区CDRl ；包含SEQ ID NO:87的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:88的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:92或98的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:93或99的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:94或100的轻链可变区CDR3 ； (V)包含SEQ ID NO:26的 重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:27的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:28的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:32的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:33的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:34的轻链可变区CDR3 ； (vi)包含SEQID NO:74的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:75的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:76的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:80的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:81的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:82的轻链可变区CDR3 ； (vii)包含SEQID NO:8的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:9的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:10的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO: 14或20的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO: 15或21的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO: 16或22的轻链可变区CDR3 ;或 (viii)包含SEQID NO:62的重链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:63的重链可变区CDR2 ； 包含SEQ ID NO:64的重链可变区CDR3 ； 包含SEQ ID NO:68的轻链可变区CDRl ； 包含SEQ ID NO:69的轻链可变区CDR2 ;和 包含SEQ ID NO:70的轻链可变区CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·凯勒，H·C·玛施，L·何，L·A·维泰尔，L·J·托马斯，
申请(专利权)人：塞尔德克斯医疗公司，
类型：
国别省市：