疫苗组合物制造技术

本公开内容涉及疫苗组合物，特别是KLH‑肽共轭物，以及制造这样的组合物的方法。本公开内容还涉及使用本文描述的组合物减少异常细胞生长的方法。

Vaccine composition

The disclosure relates to a vaccine composition, especially KLH peptide conjugates, and methods of making such compositions. The present disclosure also relates to a method for reducing abnormal cell growth using the composition described in this article.

【技术实现步骤摘要】
疫苗组合物本申请是申请号为201080058432.8、申请日为2010年12月8日、名称为“疫苗组合物”的专利申请的分案申请。本申请要求于2009年12月22日提交的美国临时申请第61/289,083号的优先权，其通过参考以其整体并入本文。领域本公开内容涉及疫苗组合物，特别是KLH-肽共轭物，以及制造这样的组合物的方法。本公开内容还涉及使用本文描述的组合物减少异常细胞生长的方法。背景CDX-110正被开发用于治疗患有多形性成胶质细胞瘤(一种脑癌)的患者。患有该疾病的患者中相当多的一部分在他们的癌细胞表面上表达表皮生长因子受体(EGFR)的变体。这种变体，被称为EGFRvIII，由在癌细胞表面上导致独特的肽序列(通常具有13个氨基酸)的接合变异(splicemutation)形成。由于这种变体不在正常细胞上表达，因此EGFRvIII序列是用于抗癌治疗的良好的靶标。EGFR是已被充分证实作为癌症治疗的靶标的蛋白。然而，与EGFR不同，EGFRvIII不存在于正常组织中，这表明该靶标将使能够开发用于癌症患者的肿瘤特异性的治疗。此外，EGFRvIII是可直接促进癌细胞生长的转化致癌基因(transformingoncogene)。虽然最初发现于最常见的和侵略性的形式的脑癌，多形性成胶质细胞瘤(GBM)，但EGFRvIII的表达还在多种其他癌症中观察到，例如乳腺癌、卵巢癌、转移性前列腺癌、结肠直肠癌和头颈癌。CDX-110是通过将EGFRvIII肽共价连接至载体蛋白钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)而形成的共轭疫苗(conjugatevaccine)(参见，例如美国专利号5,401,828、6,224,868；和WO2007/056061)，C-端半胱氨酸已被添加至所述EGFRvIII蛋白。KLH还作为免疫刺激物以增强对EGFRvIII肽的免疫响应。EGFRvIII肽与KLH之间的化学键通过使用双官能的连接基，磺基琥珀酰亚胺基4-[N-马来酰亚胺甲基]环己烷-1-羧酸酯(Sulfo-SMCC)，而实现。先前用于生产CDX-110及其制剂的工艺对于在商业环境中使用具有一些缺陷。例如，这样的缺陷包括缺乏连接基(SMCC)的完全的溶解性，导致了难以控制的反应；不可接受的水平的过程中杂质；经不起放大规模的工艺方法的检验；对关键生物物理学特性缺乏足够的控制，例如肽：KLH载体的比例、尺寸不均匀性、颗粒和凝胶形成和产品不稳定性。KLH是很大的载体蛋白，其先前已被证实非常难以按照高药物标准来共轭和配制。因此，存在对于提供了解决这样的缺陷的KLH-肽共轭物的组合物的改进的制造方法和制剂的需求。概要本公开内容的其他特征和优势将从以下的详细描述和实施例中变得明显，这些描述和实施例不应当被理解为限制性的。整个公开内容中引证的所有参考、图、Genbank项目、专利和公布的专利申请的内容将特别地通过引用整体并入本文。在一方面中，本公开内容提供了一种包含KLH-肽共轭物、磷酸钾缓冲液、二糖和表面活性剂的组合物。在一个实施方案中，磷酸钾缓冲液以5mM至30mM的浓度存在，例如5mM至20mM、5mM至15mM、7mM至13mM、8mM至12mM、9mM至11mM、或9.5mM至10.5mM。在另一个实施方案中，磷酸钾缓冲液以10mM的浓度存在。在进一步的实施方案中，存在的磷酸钾缓冲液的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。在进一步的实施方案中，在组合物中的二糖是海藻糖。在一个实施方案中，海藻糖以45mg/mL至150mg/mL、70mg/mL至120mg/mL、80mg/mL至100mg/mL、或85mg/mL至95mg/mL的浓度存在。在另一个实施方案中，海藻糖以90mg/mL的浓度存在。在另一个实施方案中，存在的海藻糖的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。在进一步的实施方案中，在组合物中的表面活性剂是聚山梨醇酯80。例如，在一个实施方案中，聚山梨醇酯80以0.01mg/mL至0.3mg/mL、0.05mg/mL至0.25mg/mL、0.1mg/mL至0.25mg/mL、或0.15mg/mL至0.25mg/mL的浓度存在。在一个实施方案中，聚山梨醇酯80以0.2mg/mL的浓度存在。在进一步的实施方案中，存在的聚山梨醇酯80的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。在一方面中，本公开内容提供了如本文所述的任何组合物，其中在所述KLH-肽共轭物中共轭至KLH的肽包括SEQIDNO:1，主要由SEQIDNO:1组成或由SEQIDNO:1组成。在进一步的实施方案中，在所述KLH-肽共轭物中共轭至KLH的肽包括SEQIDNO:2，主要由SEQIDNO:2组成或由SEQIDNO:2组成。在一个实施方案中，所述肽采用Sulfo-SMCC连接基共轭至KLH。在一个实施方案中，本公开内容提供了本文所述的任何KLH-肽组合物，其中表位密度为20至80。例如，在一个实施方案中，表位密度为25至75、25至70、25至65、30至60、30至55、35至50、40至50。在进一步的实施方案中，表位密度为25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、或60。在进一步的方面中，本公开内容提供了本文所述的任何组合物，其中以二聚体形式存在的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的45％至65％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。例如，在一个实施方案中，该二聚体形式为按质量计50％至60％、51％至59％、52％至58％、53％至57％、或54％至56％。在进一步的实施方案中，二聚体形式的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、或60％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。在进一步的实施方案中，二聚体形式的KLH-肽共轭物的量为按质量计大于所述组合物的总质量的80％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。例如，在一个实施方案中，二聚体形式的量为按质量计大于85％、大于90％、大于95％、大于96％、大于97％、大于98％、或大于99％。在进一步的方面中，本公开内容提供了本文所述的任何组合物，其中当经受尺寸排阻色谱法以及通过UV吸收检测时，对应于二聚体形式的KLH-肽共轭物的峰为45％至65％的曲线下总面积。例如，在一个实施方案中，对应于二聚体形式的峰为50％至60％、51％至59％、52％至58％、53％至57％、或54％至56％的曲线下总面积。在进一步的实施方案中，对应于二聚体形式的峰为50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、或60％的曲线下总面积。在进一步的实施方案中，对应于二聚体形式的峰为大于80％的曲线下总面积。例如，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含KLH‑肽共轭物、缓冲液、糖和表面活性剂的组合物，其中在所述KLH‑肽共轭物中共轭至KLH的肽包括EGFRvIII氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2009.12.22 US 61/289,0831.一种包含KLH-肽共轭物、缓冲液、糖和表面活性剂的组合物，其中在所述KLH-肽共轭物中共轭至KLH的肽包括EGFRvIII氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲液包括磷酸钾缓冲液。4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述缓冲液以5mM至30mM的浓度存在。5.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中存在的所述缓冲液的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述糖是二糖。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述二糖是海藻糖，并且以45至150mg/mL的浓度存在或以80至110mg每mgKLH-肽共轭物的量存在。8.根据权利要求6所述的组合物，其中所述二糖是海藻糖并且存在的所述二糖的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。9.根据权利要求1所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯，并且以0.01至0.3mg/mL的浓度存在或以0.01至0.3mg每mgKLH-肽共轭物的量存在。10.根据权利要求1所述的组合物，其中所述表面活性剂是聚山梨醇酯并且存在的所述表面活性剂的浓度为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述KLH-肽共轭物中共轭至KLH的肽由SEQIDNO:1组成。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述KLH-肽共轭物中共轭至KLH的肽由SEQIDNO:2组成。13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述肽采用Sulfo-SMCC连接基共轭至KLH。14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述表位密度为20至80。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中以二聚体形式存在的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的45％至65％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中以单体形式存在的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的15％至40％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。17.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中以单体形式存在的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的18％至35％，而以二聚体形式存在的KLH-肽共轭物的量为按质量计所述组合物的总质量的50％至65％，如通过尺寸排阻色谱法测定的。18.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物是含水的药物组合物，并且所述组合物的pH为6至8。19.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物是含水的药物组合物，并且所述组合物的pH的量为使得在40℃下12周后，在所述组合物中的所述KLH-肽共轭物的浓度，以mg/mL测定，当与原始浓度比较时改变了少于15％。20.一种包含KLH-EGFRvIII肽共轭物、磷酸钾缓冲液、海藻糖和聚山梨醇酯80的液体组合物，其中：共轭至KLH的所述肽包括SEQIDNO:1；所述KLH-EGFRvIII肽共轭物具有30至65的表位密度；所述缓冲液以9mM至11mM的浓度存在；所述组合物的pH为7.3至7.5；所述海藻糖以85mg/mL至95mg/mL的浓度存在；所述聚山梨醇酯80以0.1m...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·S·阿梅德，J·J·巴克利三世，L·M·勒维斯，B·R·奥斯伯尔内，S·辛哈，J·M·索恩，F·扎曼，
申请(专利权)人：塞尔德克斯医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US