人源化IL-25抗体制造技术

本发明专利技术涉及结合人源化IL-25的特定表位的靶结合成员(如抗体)。本发明专利技术还涉及包含一条或多条人源化抗体VL结构域序列并且结合IL-25的靶结合成员(如抗体)。本发明专利技术还涉及包含结合IL-25的靶结合成员(如抗体)的组合物，产生此类靶结合成员的方法，以及将此类靶结合成员用于疾病和病症(如哮喘、炎性肠疾病)的治疗或预防。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人源化IL-25抗体
技术介绍
白介素-25(IL-25)也称为IL-17E，是属于IL-17细胞因子家族的细胞因子，并且通过2型辅助T细胞(Th2)和肥大细胞分泌。IL-25在多个组织中诱导其他细胞因子(包括IL-4、IL-5和IL-13)的产生，并且刺激嗜酸粒细胞的扩增。IL-25和胃肠道相关的慢性炎症有关系，并且经鉴定，IL-25基因位于肠自身免疫疾病(例如炎性肠疾病(IBD))相关的染色体区域。治疗IBD的传统疗法涉及抗生素或类固醇衍生的药物；然而，目前这些药物尚未成功用于诱导或维持患者的临床缓解。IL-25在哮喘患者的样品中也显示出上调(据估计哮喘这种病症在世界范围内影响超过3亿人)，这表明该细胞因子的过表达导致了哮喘和相关病症的病变。因此，需要可用于治疗以IL-25过表达为特征的疾病和病症(包括哮喘和炎性肠疾病)的有效IL-25拮抗剂。
技术实现思路
本专利技术涉及针对白介素25(IL_25)的靶结合成员，包括抗体及其结合片段。本专利技术还涉及鼠2C3抗体的人源化(⑶R-移植)类型RH2.5R71V的变体，本文也使用术语“huDDG91”和“M9”称呼。一种此类变体在本文中称为“M6抗体”或“M6”。M6表现出多种有益的体外和体内特性，包括(例如)相对于亲本huDDG91抗体而言增强了对IL-25的结合亲和力，在基于受体和细胞的测定法中相对于亲本huDDG91抗体而言提高了抑制IL-25受体的能力，以及其他特性，例如高表达水平，高溶解度，在纯化时不发生显著的蛋白质聚集，以及在纯化时不存在不需要的翻译后修饰、蛋白质-蛋白质相互作用和氧化。在一个实施例中，本专利技术涉及结合IL-25的靶结合成员，其中靶结合成员结合一条或多条选自如下的氨基酸序列:SEQ ID NO:17的第46-63位氨基酸残基、SEQ ID NO: 17的第66-84位氨基酸残基和SEQ ID NO:17的第129-135位氨基酸残基。在具体实施例中，本专利技术的靶结合成员结合SEQ IDNO:17的第56-63位氨基酸残基和SEQ ID NO:17的第66-74位氨基酸残基。在另一个实施例中，靶结合成员包含抗体VL结构域，抗体VL结构域包含具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的CDR3。在另一个实施例中，本专利技术涉及结合IL-25的靶结合成员，其中靶结合成员包含:a)抗体VL结构域，其包含具有氨基酸序列SASQGISNYLN (SEQ IDNO:6)的CDRl、具有氨基酸序列YTSSLHS (SEQ ID NO:7)的CDR2和具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的CDR3 ；以及b)抗体VH结构域，其包含具有氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO:10)的CDRl、具有氨基酸序列LINPYNGGTSYNQNFKG (SEQ IDNO:11)的CDR2和具有氨基酸序列EDYDGYLYFAMDY(SEQ ID NO: 12)的 CDR3。在具体实施例中，靶结合成员包含具有SEQ ID NO:5的VL结构域和具有SEQ IDNO:9的VH结构域。在其他实施例中，靶结合成员包含全抗体。在多个实施例中，本专利技术还涉及分离的核酸(其包含编码本专利技术靶结合成员的核苷酸序列)、包含此类核酸的表达载体和携带此类表达载体的宿主细胞。在另一个实施例中，本专利技术涉及产生靶结合成员的方法，该方法包括在适于产生靶结合成员的条件下培养本专利技术的宿主细胞。在其他实施例中，本专利技术提供包含本专利技术靶结合成员和可药用载体的组合物。在另外的实施例中，本专利技术涵盖在有所需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括(但不限于)哮喘和炎性肠疾病。在其他实施例中，本专利技术提供本专利技术靶结合成员的用法，例如以药物组合物的形式用于治疗疾病或病症，包括炎性病症例如哮喘(包括变应性哮喘)和炎性肠疾病(如克罗恩氏病(Crohn’ s disease)和溃瘍性结肠炎)。在另一个实施例中，本专利技术涉及与结合一条或多条氨基酸序列的靶结合成员竞争结合IL-25的靶结合成员，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO:17的第46-63位氨基酸残基、SEQ ID NO: 17的第66-84位氨基酸残基和SEQID NO: 17的第129-135位氨基酸残基。在具体实施例中，祀结合成员对人IL-25具有小于或等于约50pM的结合亲和力。在另一个实施例中，本专利技术还涉及本专利技术靶结合成员，其包含:a)抗体VL结构域，其包含相对于SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有I至约20个氨基酸置换的氨基酸序列；b)抗体VH结构域，其包含相对于SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有I至约20个氨基酸置换的氨基酸序列；或c)它们的组合。在另一个实施例中，本专利技术提供产生本专利技术靶结合成员的方法，其包括:(a)提供编码VL结构域的核酸的起始库，其中核酸包含待置换的⑶R3编码区或缺乏⑶R3编码区；(b)将起始库与编码具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的VL CDR3的供体核酸组合，其中供体核酸插入库中的一条或多条核酸中，以形成编码VL结构域的核酸的产物库，所述VL结构域包含具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的VL CDR3 ;(C)表达产物库的核酸以形成靶结合成员；(d)选择特异性结合一条或多条序列的靶结合成员，所述序列选自SEQ ID NO:17的第56-63位氨基酸残基、SEQ ID NO: 17的第66-74位氨基酸残基和SEQ ID NO: 17的第129-135位氨基酸残基；以及(e)回收靶结合成员或编码靶结合成员的核酸。附图说明本专利或专利申请文件包含至少一张绘制成彩色的附图。在提出请求并且支付必要的费用后，美国专利和商标局将会提供本专利或专利申请公开的带彩图副本。图1示出了 huDDG91/RH2.5 R71V抗体的κ轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:1)和氨基酸序列(SEQ ID NO:2) 0加下划线的氨基酸序列代表⑶R。不包含前导序列。 图2示出了 huDDG91/RH2.5 R71V抗体的重链核苷酸序列(SEQ ID NO:3)和氨基酸序列(SEQ ID NO:4) 0加下划线的氨基酸序列代表⑶R。不包含前导序列。图3是显示9个候选单克隆抗体(包括M6)的性质的表格，这些抗体通过筛选基于huDDG91/RH2.5 R71V抗体的25个成员组合文库来识别。斜体代表从不同的数据集获得的数字。R71V Gl是指huDDG91抗体。两行R71V Gl代表来自两个不同数据集的测量值。疏水性增加的残基以黄色突出显示。图4A示出了 M6抗体的轻链(SEQ ID NO:5)及其CDR(SEQ ID NO:6_8)的氨基酸序列。加下划线的氨基酸序列代表CDR的位置。不包含前导序列。加粗红色字体的氨基酸残基表示相对于亲本huDDG91/RH2.5 R71V序列的氨基酸置换。图4B 示出了 M6 抗体的重链(SEQ ID NO:9)及其 CDR(SEQ ID NO:10-12)的氨基酸序列。加下划线的氨基酸序列代表CDR的位置。不包含前导序列。图5为图表，显示在抑制IL-4/IL25介导的天然人⑶4+T细胞的IL-5分泌方面，M6抑制程度大本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.03.30 US 61/341,458;2010.03.31 US 61/319,2601.一种结合IL-25的靶结合成员，其中所述靶结合成员结合一条或多条氨基酸序列，所述氨基酸序列选自SEQ ID NO: 17的第46-63位氨基酸残基、SEQ ID NO: 17的第66-84位氨基酸残基和SEQ ID NO: 17的第129-135位氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员结合SEQID NO: 17的第56-63位氨基酸残基和SEQ ID NO: 17的第66-74位氨基酸残基。3.根据权利要求1或2所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包含抗体VL结构域，所述抗体VL结构域包含具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的⑶R3。4.根据权利要求3所述的靶结合成员，其中所述VL结构域还包含具有氨基酸序列SASQGISNYLN (SEQ ID NO:6)的 CDRl 和具有氨基酸序列 YTSSLHS (SEQ ID NO: 7)的 CDR2。5.根据权利要求4所述的靶结合成员，其中所述VL结构域包含SEQID N0:5。6.根据权利要求3所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包含抗体VH结构域，所述抗体VH结构域包含具有氨基酸序列GYTMN (SEQ ID NO: 10)的⑶R1、具有氨基酸序列LINPYNGGTSYNQNFKG (SEQ ID NO: 11)的 CDR2 和具有氨基酸序列 EDYDGYLYFAMDY (SEQ IDNO:12)的 CDR3。7.根据权利要求6所述的靶结合成员，其中所述VH结构域包含SEQID NO:9。8.根据权利要求3所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包含抗体恒定区。9.根据权利要求8所述的靶结合成员，其中所述抗体恒定区是IgGl恒定区或IgG4恒定区。10.根据权利要求9所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包括全抗体。11.根据权利要求3所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包括抗体片段，所述抗体片段选自Fab抗体片段、F(ab’)2抗体片段和scFv抗体片段。12.一种结合IL-25的靶结合成员，其中所述靶结合成员包含: a)抗体VL结构域，其包含具有氨基酸序列SASQGISNYLN(SEQ ID NO:6)的CDR1、具有氨基酸序列YTSSLHS (SEQ ID NO:7)的CDR2和具有氨基酸序列QQYLAFPYTF (SEQ ID NO:8)的⑶R3 ；以及 b)抗体VH结构域，其包含具有氨基酸序列GYTMN(SEQ ID NO: 10)的⑶R1、具有氨基酸序列 LINPYNGGTSYNQNFKG (SEQ ID NO: 11)的 CDR2 和具有氨基酸序列 EDYDGYLYFAMDY(SEQ ID NO:12)的 CDR3。13.根据权利要求12所述的靶结合成员，其中所述VL结构域包含SEQID NO: 5，并且所述VH结构域包含SEQ ID NO:9。14.根据权利要求12或13所述的靶结合成员，其中所述靶结合成员包括全抗体。15.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含编码权利要求1或12所述的靶结合成员的核苷酸序列。16.一种表达载体,所述表达载体包含权利要求15所述的核酸,其中所述核酸可操作地连接到启动子。17.一种携带权利要求16所述的表达载体的宿主细胞。18.一种产生靶结合成员的方法，所述方法包括在适于产生所述靶结合成员的条件下培养权利要求17所述的宿主细胞。19.根据权利要求18所述的方法，还包括分离所述靶结合成员...

【专利技术属性】
技术研发人员：JC阿尔马格罗，P布拉尼根，C凯恩，W斯特罗尔，S陶德特，M托尔内塔，J惠勒，
申请(专利权)人：詹森生物科技公司，
类型：
国别省市：