一种大鳞鲃鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法技术

一种大鳞鲃鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法，涉及鱼类染色体的制备方法。本发明专利技术是要解决大鳞鲃鱼染色体的制备方法的技术问题。本发明专利技术的方法如下：一、活体注射：两次活体腹腔注射植物血球凝集素(PHA)后，注射秋水仙素；二、取样：取头肾于NaCl生理盐水中洗涤、收集细胞；三、用柠檬酸钠和KCl混合溶液低渗；四、卡诺氏固定液冷冻固定；五、冷滴片法滴片；六、吉姆萨(Giemsa)染色液染色，即得大鳞鲃鱼染色体。本发明专利技术操作简便，结果稳定，可获得数目完整、分散良好、形态清晰的大鳞鲃鱼染色体中期分裂相标本。本发明专利技术应用于鱼类染色体的制备领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鱼类染色体的制备方法。
技术介绍
大鱗鱼巴(Barbuscapito)属鲤科(Cyprinidae)、鱼巴亚科(Barbinae)、鱼巴属(Barbodes)，原产于乌兹别克斯坦的咸海。它具有食性广、生长速度快、肉质鲜美、耐盐碱、适应性强等优良性状，其最大个体长70cm、重12kg，是当地重要的大型经济鱼类(尼科里斯基著，缪学祖，林福申，田明诚译.分门鱼类学[M].北京:高等教育出版社，1958:186-189.)。2003年黑龙江水产研究所将该鱼引入我国，旨在增加内陆盐碱水域鱼类养殖品种，以促进盐碱水域的开发和利用。染色体是遗传物质的主要载体，染色体数与染色体核型是生物细胞遗传学研究的主要内容之一，对认识和探索生物的染色体演化过程、分类系统及进化关系具有重要意义，还可为鱼类遗传育种提供细胞遗传学依据。染色体制备是细胞遗传学研究中的一项基本的技术，快速、简便地获得形态好、分裂指数高的染色体结果是进行核型分析的前提和基础。目前，鱼类染色体制备方法主要分为直接法、体内培养法和细胞培养法三大类，虽然制备原理基本相同，但由于不同鱼类组织结构的不同及处理方法的差异，得到的细胞分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大鳞鲃鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法，其特征在于大鳞鲃鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法是按以下步骤进行的：一、活体注射：用5～10ppm苯氧乙醇将大鳞鲃鱼麻醉后称重，第一次活体腹腔注射植物血球凝集素(PHA)，剂量与体重的比为7～12μg∶1g，16～20h后第二次活体腹腔注射植物血球凝集素(PHA)，剂量与体重的比为5～10μg∶1g，作用4～6h后注射质量浓度为0.1％～0.2％的秋水仙素，剂量与体重的比为5～10μg∶1g，反应时间为2～4h；二、取样：将步骤一处理的大鳞鲃鱼剪鳃，水中放血10～15min，然后取出头肾于质量浓度为0.7％～0.9％的NaCl生理盐水中洗涤，用手术剪...

【技术特征摘要】
1.一种大鳞鈀鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法，其特征在于大鳞鈀鱼肾细胞体内培养制备染色体的方法是按以下步骤进行的: 一、活体注射:用5 IOppm苯氧乙醇将大鳞鈀鱼麻醉后称重，第一次活体腹腔注射植物血球凝集素(PHA)，剂量与体重的比为7 12 ii g: Ig, 16 20h后第二次活体腹腔注射植物血球凝集素(PHA)，剂量与体重的比为5 IOiig: lg，作用4 6h后注射质量浓度为0.1% 0.2%的秋水仙素，剂量与体重的比为5 IOiig: lg，反应时间为2 4h ; 二、取样:将步骤一处理的大鳞鈀鱼剪鳃，水中放血10 15min，然后取出头肾于质量浓度为0.7% 0.9%的NaCl生理盐水中洗涤，用手术剪剪碎至生理盐水变浑浊为止，静置3 5min后用吸管收集上层细胞悬液于离心管中，在转速为1000 1500r/min的条件下离心5 IOmin,弃上清,收集细胞； 三、低渗:向步骤二收集的细胞中加入低渗液，用吸管吹打至细胞均匀分散后，室温反应40 60min ;其中低渗液由质量浓度为0.1% 0.5%的KCl溶液和质量浓度为0.1% 0.5%的柠檬酸钠溶液按体积比为1:1 2混合而成； 四、固定:将步骤三低渗的细胞在转速为1000 2000r/min的条件下离心5 lOmin，留0.3 0.5mL的上清液吹打成细胞悬液后，加入卡诺氏固定液固定20 30min ； 五、重复步骤四的操作I 2次后,在1000 1500r/min的转速下离心5 IOmin...

【专利技术属性】
技术研发人员：耿龙武，鲁翠云，姜海峰，徐伟，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：