一种虾类生殖细胞染色体的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种虾类生殖细胞染色体的制备方法，包括以下步骤：秋水仙素培养精巢/卵巢；KCl低渗处理，卡诺氏固定液预固定；后固定液固定，所述的后固定液为体积比1:1的无水乙醇和冰乙酸；分散精母/卵母细胞，制成细胞悬液；Giemsa磷酸盐缓冲液染色；Motic显微镜下镜检。本发明专利技术优点在于：操作简单高效，能够批量制作染色体玻片；可以快速简便的获得足够的染色体样本，获得的样本分散均匀，背景浅，易于观察，得出的染色体数目准确度高；为虾类染色体制备提供了一种简便易行的方法；采用无毒的固定液，减少对制片操作者的伤害。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，具体地说，是。
技术介绍
把生物工程的新技术用于虾类的遗传育种与品种改良，是水产养殖上的一个发展方向。经对现有技术的文献检索发现，传统的染色体压片技术所制的染色体标本，破坏了染色体的结构，无法进行更高层次的染色体实验，并且实验初期的掀片过程会损失大量的分裂相染色体，不利于后续实验的开展。钱国英，汪财生等在《实验生物学报》2005年，第38卷第5期，456-460页发表的《日本沼虾染色体制备的比较研究》一文中比较了低渗法与管渗法2种制片技术:低渗法获得的性腺染色体标本，双线期二价体居多，形态清晰，着丝点位置易分辨；管渗法制备的性腺染色体，分散程度不大，镜检困难。低渗法制备的胚胎材料，背景深，分裂相不易找，形态不易观察；管渗法制备的胚胎染色体中期分裂相多，背景浅，分散好，形态清晰，易于观察及后续实验。两种方法都存在一定的缺陷，对材料的要求较高。因此，需要一种操作简单、镜检效果好的虾类生殖细胞染色体制片法以满足虾、蟹研究的快速发展。中国专利文献CN101974627A公开了一种鱼类卵巢生殖细胞染色体的制备方法，是取活体成熟卵巢并用生理盐水清洗；将卵巢置于含有I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虾类生殖细胞染色体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：秋水仙素培养精巢/卵巢；KCl低渗处理，卡诺氏固定液预固定；后固定液固定，所述的后固定液为体积比1:1的无水乙醇和冰乙酸；分散精母/卵母细胞，制成细胞悬液；Giemsa磷酸盐缓冲液染色；Motic显微镜下镜检。

【技术特征摘要】
1.一种虾类生殖细胞染色体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:秋水仙素培养精巢/卵巢；KC1低渗处理,卡诺氏固定液预固定；后固定液固定，所述的后固定液为体积比1:1的无水乙醇和冰乙酸；分散精母/卵母细胞，制成细胞悬液；Giemsa磷酸盐缓冲液染色；Motic显微镜下镜检。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)选取雄性/雌性虾，沿头胸甲后缘中心剪开头胸甲，摘取精巢/卵巢，放于培养皿 内； (2)将精巢/卵巢用秋水仙素恒温培养，去净秋水仙素； (3)KC1室温下低渗处理，移去低渗液，随即用卡诺氏固定液混匀进行预固定，所述的卡诺氏固定液为体积比3:1的无水乙醇和冰乙酸； (4)更换两次卡诺氏固定液,再用后固定液固定一次,所述的后固定液为体积比1:1的无水乙醇和冰乙酸； (5)吸弃但不吸干固定液，沿精巢/卵巢纵轴剪开外膜，使精母/卵母细胞解离分散，制成细胞悬液； (6)细胞悬液滴在载玻片上，并轻轻吹动使细胞散开，干燥后用Giemsa磷酸盐缓冲液染色，磷酸盐缓冲液冲去染液； (7)干燥后置于Motic显微镜下镜检观察。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中将精巢/卵巢用500ug/ml秋水仙素16°C生化培养箱中恒温培养4h。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)中0.lmol/L KCl室温下低渗处理30min。5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中间隔Ih更换卡诺氏固定...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏华，沙晓姣，陈阿琴，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：