The invention discloses a tobacco chromosome microdissection technique, which is characterized in that: (1) preparation of chromosomes: Tobacco matured seeds after soaking, placed in Petri dish germination; root length to be 0.5 1cm, 9:00 11:00 morning between their fresh root, put it in full and alpha Nai bromide solution room temperature pretreatment; cleaning, by the Kano I's were fixed overnight; after cleaning, placed in distilled water with low permeability, cellulose pectinase enzyme mixture solution treatment, cleaning, in distilled water and low permeability; root meristem on a slide, dropping the fixed liquid, the material is crushed and removed from the coated tissue residue, then with a fixed washing liquid; dyeing removal staining microscopy, good mid phase marker, standby; (2) chromosome microdissection: the specimens were placed in the laser micro cutting system on the stage, set the cutting line, will be out The centrifuge tube of the adhesive tube cover is installed on the automatic recovery device of the laser microdissection system. The viscous centrifugal tube after cutting the chromosome is treated.
【技术实现步骤摘要】
一种烟草染色体显微切割技术
本专利技术涉及一种烟草染色体显微切割技术,属于生物
技术介绍
植物根尖细胞有丝分裂及染色体制片技术:植物生长旺盛的分生组织如根尖、茎尖、幼叶等都在进行着有丝分裂。取这些组织为材料,经过固定后迅速杀死细胞,并使细胞内的物质和生活状态得以保持,再经过解离、染色、压片等过程,可以迅速地将细胞分散附着于载玻片和盖玻片之间,在显微镜下就可以看到大量处于有丝分裂各个时期的细胞,并进行染色体观察。分裂中期,各染色体的着丝粒排列在赤道面上,两臂伸向赤道面的两旁。纺锤体完全形成,其一端与染色体的着丝粒相连接,另一端集中于细胞的极处。中期染色体高度浓缩,具有各物种染色体的典型形态,是染色体观察的最好时期。植物染色体显微切割技术:植物染色体显微切割技术就是在显微镜下,主要采用微细玻璃针或激光对特定的染色体或染色体片段进行切割、分离,然后利用切割产物为模板进行外扩增,从而构建染色体或染色体区段特异性的DNA文库,其优点是可以根据研究者的需要,分离到任意一条染色体或染色体片段,快速地建立相应的DNA文库。烟草根尖细胞压片法染色体制片技术:取种子在室温25℃条件下,摇床上水培振荡萌发,待幼根长至1-3mm时,转移进行预处理,一般在材料进行有丝分裂高峰期前2-3h,即8:30-11:30之间处理。预处理液一般有5种:对二氯苯饱和液;0.2%的秋水仙素;0.002mol/L浓度的8-羟基喹啉溶液;5%的风油精溶液;20%的风油精溶液。预处理时间均为2h,温度20-25℃。弃处理液后,用乙醇、冰乙酸(3:1)固定材料24h,在转移至70%酒精溶液中,于 ...
【技术保护点】
一种烟草染色体显微切割技术,其特征在于:包含以下步骤:(1)染色体标本制备:烟草成熟饱满种子在蒸馏水浸泡后,播种在潮湿滤纸上,放置于培养皿内萌发;待根长至0.5‑1 cm时,于上午9:00‑11:00间剪取新鲜根尖,将其置入饱和α‑溴奈溶液室温预处理;蒸馏水清洗,经卡诺I氏固定液固定过夜;蒸馏水清洗后,置入蒸馏水低渗1h,用3%纤维素‑果胶酶混合酶液在37℃条件下处理2.5 h,清洗,置入蒸馏水低渗60min;剪取1‑2mm根尖分生组织于洁净玻片上,滴加卡诺I氏固定液,将材料压碎涂布并除去大组织残渣,然后加卡诺I氏固定液,微烤至干;Giemsa染液染色,然后冲洗去除染色液,镜检良好中期相标记,激光显微切割备用;(2)染色体显微切割:将制备好的染色体标本片放在激光显微切割系统载物台上,分别在10倍、20倍、40倍和100倍物镜下选择目标染色体后,设置目标染色体的切割路线,将具黏性管盖的离心管安装在激光显微切割系统自动回收装置上;设置切割激光的能量、切割速度、回收弹射激光的能量,进行染色体切割;切割后的目标染色体被回收弹射激光弹射至回收离心管的黏性管盖上;向捕获目标染色体的离心管中加入蛋白 ...
【技术特征摘要】
1.一种烟草染色体显微切割技术,其特征在于:包含以下步骤:(1)染色体标本制备:烟草成熟饱满种子在蒸馏水浸泡后,播种在潮湿滤纸上,放置于培养皿内萌发;待根长至0.5-1cm时,于上午9:00-11:00间剪取新鲜根尖,将其置入饱和α-溴奈溶液室温预处理;蒸馏水清洗,经卡诺I氏固定液固定过夜;蒸馏水清洗后,置入蒸馏水低渗1h,用3%纤维素-果胶酶混合酶液在37℃条件下处理2.5h,清洗,置入蒸馏水低渗60min;剪取1-2mm根尖分生组织于洁净玻片上,滴加卡诺I氏固定液,将材料压碎涂布并除去大组织残渣,然后加卡诺I氏固定液,微烤至干;Giemsa染液染色,然后冲洗去除染色液,镜检良好中期相标记,激光显微切割备用;(2)染色体显微切割:将制备好的染色体标本片放在激光显微切割系统载物台上,分别在10倍、20倍、40倍和100倍物镜下选择目标染色体后,设置目标染色体的切割路线,将具...
【专利技术属性】
技术研发人员:盛茂银,任学良,王霖娇,
申请(专利权)人:贵州师范大学,
类型:发明
国别省市:贵州,52
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