【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种芝麻染色体荧光原位杂交方法,其特征在于,包括如下步骤:A、染色体标本的制备;B、BAC探针制备:1)BAC质粒DNA提取从芝麻BAC库中挑出目的BAC克隆,培养后,采用质粒提取试剂盒提取质粒DNA,质粒DNA浓度100-500 ng/μL;2)探针标记取20μL BAC DNA,0.1Kpa、120℃下放置5min,然后冰浴放置5min,随机引物法进行探针标记,37℃水浴20h,65℃灭活5min,‑20℃保存备用;标记体系见表1;表1探针荧光标记反应体系C、荧光原位杂交将标记好的探针用杂交液稀释10倍作为工作液用于荧光原位杂交;工作液各组分见表2;表2 荧光原位杂交所用工作液组成1)染色体制片处理将染色体制片浸泡于45%乙酸中1-2min,取出自然晾干,褪去吉姆萨染液颜色;37℃下用含100μg/mL RNase A的2×SSC处理制片标记区1h;然后用2×SSC洗片三次,每次5min;使用70%、85%及无水乙醇对制片逐级脱水,每级3-5min;自然晾干后, 37℃下用1%胃蛋白酶处理制片标记区30min,1×PBS洗2次,每次5min;然后用1%多聚甲醛处理制片标记区10mi ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:张海洋,苗红梅,赵瑞红,李春,马琴,魏利斌,段迎辉,
申请(专利权)人:河南省农业科学院芝麻研究中心,
类型:发明
国别省市:河南;41
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。