荚膜革兰氏阳性细菌生物缀合物疫苗制造技术

本发明专利技术的一种实施方式涉及新的金黄色葡萄球菌生物缀合物疫苗。更通常地，本发明专利技术涉及革兰氏阳性和其他生物缀合物疫苗，包含：包含插入的核酸共有序列的蛋白载体；至少一个连接至共有序列的多糖例如荚膜革兰氏阳性多糖；以及可选地佐剂或药学上可接受的载体。在进一步的方面，本发明专利技术涉及一种生产革兰氏阳性和其他生物缀合物疫苗的方法。在另一个方面，本发明专利技术提供了N-糖基化蛋白，其包含一种或多种多糖，例如革兰氏阳性多糖。本发明专利技术还涉及工程化的原核生物体，其包含编码第一原核生物体的糖基转移酶和第二原核生物体的糖基转移酶的核酸序列。本发明专利技术进一步包括质粒和用质粒转化的原核细胞，所述质粒编码多糖或生产N-糖基化蛋白和/或生物缀合物疫苗的酶。进一步地，本发明专利技术涉及在哺乳动物中诱导免疫应答的方法，包含给药所述生物缀合物疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】荚膜革兰氏阳性细菌生物缀合物疫苗相关申请的引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2010年5月6日提交的美国临时专利申请No.61/332,170的优先权，以其全文整体并入本文作为参考。联邦政府资助研究的声明本专利技术的一些方面是在国立卫生研究院（NationalinstitutesofHealth）授予的授权号1R01AI088754-2，子授权号105699的政府支持下做出的。政府在本专利技术的这些方面具有某些权利。序列表本申请包含序列表，其通过EFS-Web以ASCII格式下提交，并以其整体并入本文作为参考。所述ASCII的拷贝于2011年5月2日建立，命名为031229US.txt，大小为206,590字节。
技术介绍
疫苗是现代医学公共卫生领域中最重大的专利技术之一，并且已经拯救了数百万条生命。免疫已被证明是预防和控制感染的理想途径。疫苗每年能够使多达三百万人免于死亡，并使750,000名儿童免于残疾。（GlobalAllianceforVaccinesandImmunization-PressReleases（2006年3月11日）网址：www.gavialliance.org/media_centre/press_releases/2006_03_09_en_pr_queenrania_delhi.php）。在1999年，CDC宣布免疫是20世纪最伟大的公共卫生成就（Tengreatpublichealthachievements-UnitedStates，1900-1999.MMWRMorbMortalWklyRep48:241-3（1999年4月2日））。一些细菌，诸如引起破伤风和白喉的细菌，产生在很大程度上引起这些疾病的毒素。该毒素能够以减毒形式被用作疫苗。然而，对于大多数细菌而言，并没有能够用于开发疫苗的单一毒素。最成功的疫苗是诸如流感嗜血杆菌（Haemophilusinfluenzae）、脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis）和肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae）的细菌病原体的缀合至载体蛋白的表面多糖。这些细菌被荚膜所包围，其促进了微生物的致病性和对吞噬细胞杀伤的抗性，并保护其免于干燥。如果细菌多糖偶联至含有T细胞表位的蛋白载体，其就能够引起人类的长期免疫应答。这一观点在80年前就已被阐明（Avery，O.T.和W.F.Goebel.1929.Chemo-immunologicalstudiesonconjugatedcarbohydrate-proteins.IIImmunologicalspecificityofsyntheticsugar-proteins.J.Exp.Med.50:521-533），并且之后被联至蛋白载体白喉毒素的B型流感嗜血杆菌（HaemophilusinfluenzaetypeB，HIB）的多糖偶所证实（Anderson，P.1983.AntibodyresponsestoHaemophilusinfluenzaetypebanddiphtheriatoxininducedbyconjugatesofoligosaccharidesofthetypebcapsulewiththenontoxicproteinCRM197.InfectImmun39:233-8；Schneerson，R.，O.Barrera，A.Sutton和B.Robbins.1980.Preparation，characterization，andimmunogenicityofHaemophilusinfluenzaetypebpolysaccharide-proteinconjugates.JExpMed152:361-76）。该糖缀合物（glycoconjugate）也是于1987年在美国被许可的第一种缀合物疫苗，并在之后不久就引入美国婴儿免疫计划。除了HIB之外，缀合物疫苗也被成功用于对抗荚膜内人病原体脑膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）和肺炎链球菌（S.pneumoniae）。这些疫苗的常规应用导致了鼻咽部定植和感染的减少。目前大约25%的全球疫苗市场包含缀合物疫苗。革兰氏阳性细菌具有被荚膜多糖包围的细胞膜。葡萄球菌（Staphylococcus）就是一类这样的革兰氏阳性细菌。金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）引起感染。金黄色葡萄球菌是一种机会性细菌病原体，是引起广谱的人类疾病的原因。尽管金黄色葡萄球菌可以在正常人的黏膜表面定植，但其也是伤口感染的主要原因，并具有引发严重感染的侵袭能力，包括骨髓炎、心内膜炎和菌血症并伴有代谢性并发症（Lowy，F.D.1998.Staphylococcusaureusinfections.NewEnglJMed339:520-32）。金黄色葡萄球菌是涉及呼吸机相关性肺炎的最常见媒介之一，并且其也是社区获得性肺炎的重要的和新兴的起因，影响之前身体健康的成人和缺乏预防风险因素的儿童（Kollef，M.H.，A.Shorr，Y.P.Tabak，V.Gupta，L.Z.Liu和R.S.Johannes.2005.Epidemiologyandoutcomesofhealth-care-associatedpneumonia:resultsfromalargeUSdatabaseofculture-positivepneumonia.Chest128:3854-62；Shorr，A.F.2007.Epidemiologyandeconomicimpactofmeticillin-resistantStaphylococcusaureus:reviewandanalysisoftheliterature.Pharmacoeconomics25:751-68）。金黄色葡萄球菌是医院内菌血症（nosocomialbecteremia）的第二常见的起因，并且耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantS.aureus，MRSA）菌株占据了美国加护病房的所有感染的50%以上。医院和社区的金黄色葡萄球菌的感染还在增加。MRSA菌株在1974年从2%的葡萄球菌感染一级在2004年从63%的葡萄球菌感染中被分离出来。许多医院内MRSA菌株是耐多药的，并且即使甲氧西林敏感性菌株也可以是致死性的。一份最近的报告利用基于种群的活性实例发现，其显示2005年在美国发生了94,360例侵袭性MRSA感染，并且这些大部分（58%）发生在医院外（Klevens，R.M.，M.A.Morrison，J.Nadle，S.Petit，K.Gershman，S.Ray，L.H.Harrison，R.Lynfield，G.Dumyati，J.M.Townes，A.S.Craig，E.R.Zell，G.E.Fosheim，L.K.McDougal，R.B.Carey和S.K.Fridkin.2007.Invasivemethicillin-resistantStaphylococcusaureusinfectionsintheUnitedStates.JAMA298:1763-本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.06 US 61/332,1701.一种革兰氏阴性宿主原核生物，其中所述宿主生物是大肠杆菌（E.coli），其包含：（i）编码至少一种来自革兰氏阳性细菌的糖基转移酶的核苷酸序列，其中所述革兰氏阳性细菌是金黄色葡萄球菌（S.aureus）；（ii）编码至少一种来自革兰氏阴性细菌的糖基转移酶的核苷酸序列，其中所述革兰氏阴性细菌是铜绿色假单胞菌（P.aeruginosa）；（iii）编码载体蛋白的核苷酸序列，其中所述载体蛋白包含氨基酸共有序列D/E-X-N-Z-S/T，其中X和Z可以是除脯氨酸之外的任何天然氨基酸；和（iv）编码寡糖基转移酶的核苷酸序列。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·瓦克，迈克尔·科瓦里克，迈克尔·韦特，
申请(专利权)人：格林考瓦因有限公司，
类型：
国别省市：