用于生物缀合物产生的修饰宿主细胞和杂合寡糖制造技术

本文提供能够产生杂合寡糖和多糖的宿主细胞，其中所述杂合寡糖和多糖在其第一重复单元的还原末端不包含己糖。本文还提供可由本文所述的宿主细胞产生的杂合寡糖或多糖和生物缀合物，其中所述生物缀合物包含与杂合寡糖或多糖连接的载体蛋白，所述杂合寡糖或多糖在其第一重复单元的还原末端不包含己糖。

Modified host cells and oligosaccharides for the production of conjugates

The present invention provides a host cell capable of producing heterozygous oligosaccharides and polysaccharides, wherein the heterozygous oligosaccharides and polysaccharides do not contain hexose at the reducing end of the first repeating unit thereof. This paper also provides the host cells produced by this hybrid oligosaccharides or polysaccharides and biological conjugates, wherein the bioconjugate with heterozygous carrier protein containing oligosaccharides or polysaccharides connected, the hybrid does not contain oligosaccharides or polysaccharides in hexose reducing end its first repeat unit.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】1-引言本文提供能够产生杂合寡糖和多糖的宿主细胞，其中所述杂合寡糖和多糖在其第一重复单元的还原末端不包含己糖。本文还提供可由本文所述的宿主细胞产生的杂合寡糖和多糖和生物缀合物，其中所述生物缀合物包含与杂合寡糖或多糖连接的载体蛋白，所述杂合寡糖或多糖在其第一重复单元的还原末端不包含己糖。2-背景糖基化是将碳水化合物分子或糖(单糖、二糖、寡糖或多糖)连接至蛋白或多肽中的不同氨基酸残基的侧链以产生糖蛋白的过程。N-连接的蛋白糖基化(N-糖基化)--发生在真核生物内质网中的最常见的翻译后修饰类型--是将碳水化合物分子添加至靶蛋白的多肽链中的天冬酰胺残基的过程。该过程通过酶促的寡糖基转移酶复合体(OST)完成，所述寡糖基转移酶复合体(OST)在内质网中负责将来自脂质载体(磷酸多萜醇)的预装配寡糖转移至新生蛋白保守序列Asn-X-Ser/Thr(其中X是除了脯氨酸之外的任何氨基酸)内的天冬酰胺残基。随后糖链在高尔基体中经历其他修饰。本质上，N-连接的糖基化出现在真核生物和古细菌中，但是在细菌中罕见。O-连接的糖基化是在真核生物、古细菌和细菌中出现的糖基化形式。其由将糖分子连接至蛋白靶标中的氨基酸残基中的氧原子组成。宿主细胞产生包含与碳水化合物分子或糖连接(例如N-连接)的载体蛋白的生物缀合物的用途是本领域已知的。然而，尽管使用原核宿主细胞产生生物缀合物的进展，仍然需要在宿主细胞中生物缀合物产生的改进方法。3-专利技术概述本领域已知，来自空肠弯曲杆菌(PglB)的寡糖基转移酶对在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖的聚糖(寡糖或多糖)具有低亲和力(ProcNatlAcadSciUSA.2006May2;103(18):7088-93)。因此，宿主细胞系统产生生物缀合物的用途通常限于产生由与寡糖或多糖连接的载体蛋白构成的生物缀合物，所述寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端不包含己糖单糖。然而，因为许多细菌寡糖/多糖抗原在第一重复单元的还原末端含有己糖单糖(例如葡萄糖)，本领域已知的宿主细胞生物缀合物产生系统不足以产生包含此类寡糖/多糖抗原的生物缀合物。本申请的专利技术人已经鉴定了修饰宿主细胞的新型方法，其使得宿主细胞能够产生衍生自供体寡糖或多糖的杂合寡糖或多糖。供体寡糖或多糖是在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖(例如葡萄糖)的那些寡糖或多糖，而杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端不包含己糖，而是包含己糖单糖衍生物。此类己糖单糖衍生物是PglB的适当底物，因此在适当的宿主细胞背景中可以与载体蛋白连接，以产生生物缀合物，其可用于例如治疗细菌性疾病/感染和/或针对细菌性疾病/感染接种疫苗。重要的是，本申请的专利技术人已令人惊讶地发现，由于聚合酶(wzy)和翻转酶(wzx)酶的松弛特异性，可以在包含异源糖基化机制(例如，翻转酶，聚合酶)的宿主细胞中完成本文所述的杂合寡糖和多糖的转位和聚合。总之，本文所述的发现允许产生能够产生高产量的生物缀合物的修饰的宿主细胞，所述生物缀合物在本专利技术人的发现之前不能以高产量生产。本专利技术由下面呈现的实施方案进行概述。实施方案1：原核宿主细胞，其包含：a)编码产生寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶的核酸，其中所述重复单元在还原末端不包含己糖，且其中所述寡糖或多糖重复单元衍生自在还原末端包含己糖的供体寡糖或多糖重复单元；b)编码包含N-糖基化共有序列的载体蛋白的核酸；和c)编码寡糖基转移酶的核酸。实施方案2：原核宿主细胞，其包含：a)编码产生寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶的核酸，其中所述重复单元在还原末端不包含己糖，且其中所述寡糖或多糖重复单元衍生自在还原末端包含己糖的供体寡糖或多糖重复单元；b)编码包含N-糖基化共有序列的载体蛋白的核酸；c)编码寡糖基转移酶的核酸；和d)编码聚合酶(wzy)的核酸，其中所述聚合酶催化杂合寡糖或多糖的产生，其中所述杂合寡糖或多糖(i)在所述第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，且(ii)在所有其他重复单元的还原末端包含己糖单糖。实施方案3：实施方案1或2的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含足以合成所述供体寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶。实施方案4：实施方案3的宿主细胞，其中所述足以合成所述供体寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶作为操纵子或基因簇或其部分存在于所述宿主细胞中。实施方案5：实施方案1-4中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与所述供体寡糖或多糖相同，除了所述杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，代替通常存在于所述供体寡糖或多糖的第一重复单元的还原末端的己糖单糖。实施方案6：实施方案1-4中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与所述供体寡糖或多糖相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖，除了包含所述供体寡糖或多糖的所有单糖之外，在第一重复单元的还原末端还包含己糖单糖衍生物。实施方案7：实施方案1-4中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含(i)将己糖单糖衍生物组装至焦磷酸十一异戊烯基酯(UND-PP)上的糖基转移酶和(ii)能够将单糖添加至组装在UND-PP上的己糖单糖衍生物的一种或多种糖基转移酶。实施方案8：实施方案7的宿主细胞，其中所述己糖单糖衍生物是其C-2位被乙酰氨基修饰的任何单糖，诸如N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖(DATDH)、N-乙酰岩藻糖胺(FucNAc)、N-乙酰异鼠李糖胺(QuiNAc)；或实施方案7的宿主细胞，其中所述己糖单糖衍生物为N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)。实施方案9：实施方案7或8的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶与宿主细胞异源和/或与催化所述供体寡糖重复单元的基因异源。实施方案10：实施方案7-9中任一项的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶来自埃希氏菌属、志贺氏菌(Shigella)属、克雷伯氏菌(Klebsiella)属、黄单胞菌(Xhantomonas)属、沙门氏菌(Salmonella)属、耶尔森菌(Yersinia)属、气单胞菌(Aeromonas)属、弗朗西斯氏菌(Francisella)属、螺杆菌(Helicobacter)属、变形杆菌(Proteus)属、乳球菌(Lactococcus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、棒状杆菌(Corynebacterium)属、链霉菌(Streptomyces)属、链球菌(Streptococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、葡萄球菌(Staphylococcus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、梭状芽孢杆菌(Clostridium)属、李斯特菌(Listeria)属或弯曲杆菌(Campylobacter)属。实施方案11：实施方案7-10中任一项的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶是wecA。实施方案12：实施方案11的宿主细胞，其中所述wecA来自大肠杆菌。实施方案13：实施方案7-12中任一项的宿主细胞，其中所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有以下结构的杂合寡糖或多糖(B)n—A→其中A是含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的寡糖重复单元，其在还原末端具有己糖单糖衍生物(通过箭头表示)；其中B是含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的寡糖重复单元；其中A和B是不同的寡糖重复单元；且其中n为至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至少20。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.08 US 62/0353601.具有以下结构的杂合寡糖或多糖(B)n—A→其中A是含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的寡糖重复单元，其在还原末端具有己糖单糖衍生物(通过箭头表示)；其中B是含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的寡糖重复单元；其中A和B是不同的寡糖重复单元；且其中n为至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至少20。2.权利要求1的杂合寡糖或多糖，其中所述B寡糖重复在所述重复的还原末端含有己糖单糖。3.权利要求2的杂合寡糖或多糖，其中在所述重复的还原末端的己糖单糖选自葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖醇、岩藻糖和甘露糖。4.权利要求1-3中任一项的杂合寡糖或多糖，其中A的寡糖重复单元和B的寡糖重复单元的不同仅在于在所述重复的还原末端含有不同的单糖。5.权利要求1-4中任一项的杂合寡糖或多糖，其中A的寡糖重复单元是革兰氏阳性细菌荚膜糖的荚膜糖的重复单元，所述革兰氏阳性细菌荚膜糖例如组A链球菌荚膜糖、组B链球菌荚膜糖、肺炎链球菌荚膜糖、肠球菌荚膜糖或金黄色葡萄球菌荚膜糖。6.权利要求1-5中任一项的杂合寡糖或多糖，其中A的寡糖重复单元是肺炎链球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10A、10B、10C、10F、11A、11B、11C、11D、11F、12A、12B、13、14、15A、15B、15C、15F、16A、16F、17A、17F、18A、18B、18C、18F、19A、19B、19C、19F、20、21、22A、22F、23A、23B、23F、24A、24B、24F、25A、25F、26、27、28A、28F、29、31、32A、32F、33A、33B、33C、33D、33F、34、35A、35B、35C、35D、35F、36、37、38、39、40、41A、41F、42、43、44、45、46、47A、47F或48的荚膜糖的重复单元。7.生物缀合物，其包含与权利要求1-6中任一项的杂合寡糖或多糖连接的载体蛋白。8.包含与杂合寡糖或多糖N-连接的载体蛋白的生物缀合物，其中所述杂合寡糖或多糖与供体寡糖或多糖相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖，除了包含所述供体寡糖或多糖的所有单糖之外，在第一重复单元的还原末端还包含己糖单糖衍生物。9.权利要求7或8的生物缀合物，其中所述己糖单糖衍生物是其中C-2位被乙酰氨基修饰的任何单糖，诸如N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖(DATDH)、N-乙酰岩藻糖胺(FucNAc)或N-乙酰异鼠李糖胺(QuiNAc)。10.权利要求9的生物缀合物，其中所述己糖单糖衍生物为N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)。11.权利要求7-10中任一项的生物缀合物，其中所述杂合寡糖或多糖与革兰氏阳性细菌荚膜糖相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，代替通常存在于所述革兰氏阳性细菌荚膜糖的第一重复的还原末端的己糖单糖。12.权利要求11的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是组A链球菌荚膜糖、组B链球菌荚膜糖、肺炎链球菌荚膜糖、肠球菌荚膜糖或金黄色葡萄球菌荚膜糖。13.权利要求12的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是肺炎链球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10A、10B、10C、10F、11A、11B、11C、11D、11F、12A、12B、12F、13、14、15A、15B、15C、15F、16A、16F、17A、17F、18A、18B、18C、18F、19A、19B、19C、19F、20、21、22A、22F、23A、23B、23F、24A、24B、24F、25A、25F、26、27、28A、28F、29、31、32A、32F、33A、33B、33C、33D、33F、34、35A、35B、35C、35D、35F、36、37、38、39、40、41A、41F、42、43、44、45、46、47A、47F或48荚膜糖。14.权利要求13的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是肺炎链球菌血清型8、12F、14、15A、16F、22F、23A、24F、31、33F、35B或38荚膜糖。15.权利要求12的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是金黄色葡萄球菌血清型5或8荚膜糖。16.权利要求12的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是无乳链球菌(组B链球菌)血清型Ia、Ib、II、III、IV、V、VI、VII或VIII荚膜糖。17.权利要求12的生物缀合物，其中所述革兰氏阳性细菌荚膜糖是粪肠球菌血清型A、B、C或D荚膜糖。18.权利要求7-17中任一项的生物缀合物，其中所述载体蛋白是脱毒的绿脓假单胞菌外毒素A(EPA)、CRM197、麦芽糖结合蛋白(MBP)、白喉类毒素、破伤风类毒素、脱毒的金黄色葡萄球菌的溶血素A、凝集因子A、凝集因子B、大肠杆菌FimH、大肠杆菌FimHC、大肠杆菌不耐热肠毒素、大肠杆菌不耐热肠毒素的脱毒变体、霍乱毒素B亚基(CTB)、霍乱毒素、霍乱毒素的脱毒变体、大肠杆菌Sat蛋白、大肠杆菌Sat蛋白的过客结构域、肺炎链球菌肺炎球菌溶血素和其脱毒变体、空肠弯曲杆菌AcrA、空肠弯曲杆菌天然糖蛋白、PcrV(又名LcrV、EspA、SseB)、PopB(YopB、YopD、FliC)或OprF、OprI。19.合成以下结构的寡糖或多糖的方法(B)n—A→其中A是(任选地含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的)寡糖重复单元，其在还原末端具有己糖单糖衍生物(通过箭头表示)；其中B是(任选地含有至少2、3、4、5、6、7或8个单糖的)寡糖重复单元；其中A和B是不同的寡糖重复单元；且其中n为至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或至少20；所述方法包括：将A和B与多糖聚合酶孵育。20.权利要求19的方法，其中所述接触步骤在体外进行。21.权利要求19的方法，其中所述接触步骤在原核细胞中，任选地在原核细胞的周质中进行。22.权利要求19的方法，其中所述多糖聚合酶是wzy多糖聚合酶。23.权利要求19的方法，其中A在还原末端具有己糖单糖衍生物(通过箭头表示)，且B在还原末端具有己糖，且其中A和B在其他方面相同。24.权利要求19的方法，其中A与B具有相同的结构，其中一个差别是A在还原末端具有额外单糖。25.权利要求24的方法，其中所述额外单糖是己糖单糖衍生物。26.权利要求19至25中任一项的方法，其中所述己糖单糖衍生物或额外单糖是其C-2位被乙酰氨基修饰的任何单糖，诸如N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖(DATDH)、N-乙酰岩藻糖胺(FucNAc)、N-乙酰异鼠李糖胺(QuiNAc)，或其中所述己糖单糖衍生物是GlcNAc、HexNAC、脱氧HexNAc或2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖。27.权利要求19至26中任一项的方法，其中所述聚合酶来自埃希氏菌属、志贺氏菌(Shigella)属、克雷伯氏菌(Klebsiella)属、黄单胞菌(Xhantomonas)属、沙门氏菌(Salmonella)属、耶尔森菌(Yersinia)属、气单胞菌(Aeromonas)属、弗朗西斯氏菌(Francisella)属、螺杆菌(Helicobacter)属、变形杆菌(Proteus)属、乳球菌(Lactococcus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、棒状杆菌(Corynebacterium)属、链霉菌(Streptomyces)属、链球菌(Streptococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、葡萄球菌(Staphylococcus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、梭状芽孢杆菌(Clostridium)属、李斯特菌(Listeria)属或弯曲杆菌(Campylobacter)属。28.权利要求19至27中任一项的方法，其中所述供体寡糖或多糖重复单元是肺炎链球菌荚膜多糖CP1、CP2、CP3、CP4、CP5、CP6(A、B)、CP7(A、B、C)、CP8、CP9(A、L、N、V)、CP10(A、B、C、F)、CP11(A、B、C、D、F)、CP12(A、B、F)、CP13、CP14、CP15(A、B、C、F)、CP16(A、F)、CP17(A、F)、CP18(A、B、C、F)、CP19(A、B、C、F)、CP20、CP21、CP22(A、F)、CP23(A、B、F)、CP24(A、B、F)、CP25(A、F)、CP26、CP27、CP28(A、F)、CP29、CP31、CP32(A、F)、CP33(A、B、C、D、F)、CP34、CP35(A、B、C、D、F)、CP36、CP37、CP38、CP39、CP40、CP41(A、F)、CP42、CP43、CP44、CP45、CP46、CP47(A、F)或CP48的重复单元。29.原核宿主细胞，其包含：a)编码产生寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶的核酸，其中所述重复单元在还原末端不包含己糖，且其中所述寡糖或多糖重复单元衍生自在还原末端包含己糖的供体寡糖或多糖重复单元；和b)编码包含N-糖基化共有序列的载体蛋白的核酸；和c)编码寡糖基转移酶的核酸；和任选地d)编码聚合酶(wzy)的核酸，其中所述聚合酶催化杂合寡糖或多糖的产生，其中所述杂合寡糖或多糖(i)在所述第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，且(ii)在所有其他重复单元的还原末端包含己糖单糖。30.权利要求29的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含足以合成所述供体寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶。31.权利要求30的宿主细胞，其中所述足以合成所述供体寡糖或多糖重复单元的糖基转移酶作为操纵子或基因簇或其部分存在于所述宿主细胞中。32.权利要求29-31中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与所述供体寡糖或多糖相同，除了所述杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，代替通常存在于所述供体寡糖或多糖的第一重复单元的还原末端的己糖单糖。33.权利要求29-32中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与所述供体寡糖或多糖相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖，除了包含所述供体寡糖或多糖的所有单糖之外，在第一重复单元的还原末端还包含己糖单糖衍生物。34.权利要求29-32中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含(i)将己糖单糖衍生物组装至焦磷酸十一异戊烯基酯(UND-PP)上的糖基转移酶和(ii)能够将单糖添加至组装在UND-PP上的己糖单糖衍生物的一种或多种糖基转移酶。35.权利要求34的宿主细胞，其中所述己糖单糖衍生物是其中C-2位被乙酰氨基修饰的任何单糖，例如N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖(DATDH)、N-乙酰岩藻糖胺(FucNAc)、N-乙酰异鼠李糖胺(QuiNAc)。36.权利要求34或35的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶与宿主细胞异源和/或与催化所述供体寡糖重复单元的基因异源。37.权利要求34-36中任一项的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶来自埃希氏菌属、志贺氏菌(Shigella)属、克雷伯氏菌(Klebsiella)属、黄单胞菌(Xhantomonas)属、沙门氏菌(Salmonella)属、耶尔森菌(Yersinia)属、气单胞菌(Aeromonas)属、弗朗西斯氏菌(Francisella)属、螺杆菌(Helicobacter)属、变形杆菌(Proteus)属、乳球菌(Lactococcus)属、乳杆菌(Lactobacillus)属、假单胞菌(Pseudomonas)属、棒状杆菌(Corynebacterium)属、链霉菌(Streptomyces)属、链球菌(Streptococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、葡萄球菌(Staphylococcus)属、芽孢杆菌(Bacillus)属、梭状芽孢杆菌(Clostridium)属、李斯特菌(Listeria)属或弯曲杆菌(Campylobacter)属。38.权利要求34-37中任一项的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶是wecA，任选地来自大肠杆菌。39.权利要求34-38中任一项的宿主细胞，其中所述己糖单糖是半乳糖(Gal)。40.权利要求34-39中任一项的宿主细胞，其中所述能够将单糖添加至所述己糖单糖衍生物的一种或多种糖基转移酶是来自鲍氏志贺氏菌的半乳糖基转移酶(wfeD)或来自大肠杆菌O28的半乳糖呋喃糖基转移酶(wbeY)或来自大肠杆菌O167的半乳糖呋喃糖基转移酶(wfdK)或者是来自大肠杆菌O28的半乳糖呋喃糖基转移酶(wbeY)和来自大肠杆菌O167的半乳糖呋喃糖基转移酶(wfdK)。41.权利要求30、31或33-40中任一项的宿主细胞，其中所述足以合成所述供体寡糖或多糖的重复单元的糖基转移酶包含来自肺炎链球菌CP14的wchL和/或wchM。42.权利要求41的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与肺炎链球菌CP14相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，代替通常存在于肺炎链球菌CP14的第一重复单元的还原末端的己糖单糖。43.权利要求30、31或33-42中任一项的宿主细胞，其中所述足以合成所述供体寡糖或多糖的重复单元的糖基转移酶包含来自肺炎链球菌CP33F的wciC、wciD、wciE和/或wciF。44.权利要求43的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生杂合寡糖或多糖，其中所述杂合寡糖或多糖与肺炎链球菌CP33F相同，除了以下事实：所述杂合寡糖或多糖在第一重复单元的还原末端包含己糖单糖衍生物，代替通常存在于肺炎链球菌CP33F的第一重复单元的还原末端的己糖单糖。45.权利要求29-34中任一项的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含(i)将己糖单糖衍生物组装至焦磷酸十一异戊烯基酯(UND-PP)上的糖基转移酶和(ii)将供体寡糖或多糖重复单元组装至己糖单糖衍生物上的糖基转移酶。46.权利要求45的宿主细胞，其中所述己糖单糖衍生物是其C-2位被乙酰氨基修饰的任何单糖，诸如N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、2,4-二乙酰氨基-2,4,6-三脱氧己糖(DATDH)、N-乙酰岩藻糖胺(FucNAc)、N-乙酰异鼠李糖胺(QuiNAc)。47.权利要求45或46的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶与所述宿主细胞异源。48.权利要求45-47中任一项的宿主细胞，其中所述将己糖单糖衍生物组装至UND-PP上的糖基转移酶来自埃希氏菌属、志贺氏菌(Shigella)属、克雷伯氏菌(Klebsiella)属、黄单胞菌(Xhantomonas)属、沙门氏菌(Salmonella)属、耶尔森菌(Yersinia)属、气单胞菌(Aeromonas)属、弗朗西斯氏菌(Francisella)属、螺杆菌(Helicobacter)属、变形杆菌(Proteus)属、乳球菌(Lactococcus)属、乳杆菌(Lac...

【专利技术属性】
技术研发人员：A法里德莫阿耶，
申请(专利权)人：格林考瓦因有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH